麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖研究

李金鳳+糜林+陳雪平+萬春雁+霍恒志+陳丙義

摘要：以麥斯衣陶芬無花果幼嫩枝條為試材，研究了外植體材料、基本培養(yǎng)基以及激素種類和配比等因素對其離體快速增殖的影響。結(jié)果表明，適宜麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖的外植體為腋芽，培養(yǎng)基為改良MS+1mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+1mg/LGA3+20mg/L蔗糖+7mg/L瓊脂粉，pH值為5.8。

關(guān)鍵詞：麥斯衣陶芬無花果；離體繁殖；增殖倍數(shù)

中圖分類號：S663.304+.3文獻標志碼：A文章編號：1002-1302（2014）11-0073-02

麥斯衣陶芬無花果，因其果大俗稱巨型無花果，原產(chǎn)美國加州，從日本引入我國。試種觀察結(jié)果表明，麥斯衣陶芬是目前最有推廣前途的無花果優(yōu)良品種之一，適宜長江以南地區(qū)栽培。無花果生產(chǎn)上多采用扦插繁殖[1]，也有外來無花果嫁接培育方法，但與材料來源多、增殖率高的試管離體快速培養(yǎng)苗木繁殖相比，具有材料來源少、繁殖率低、費工費時、受季節(jié)限制嚴重、場地面積占用大等問題，難以滿足當前大面積栽培及推廣的需要；此外，從育種角度來講，無花果為隱頭花序，小花隱生于囊狀總花托內(nèi)，不能利用常規(guī)雜交育種技術(shù)進行品種改良和更新。隨著生物技術(shù)在果樹育種中的成熟應用，轉(zhuǎn)基因技術(shù)無疑是改良品種的首選方法。而轉(zhuǎn)基因技術(shù)又是以組織培養(yǎng)為前提、為基礎(chǔ)的一門技術(shù)，因此，要想利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)進行無花果育種就必須先建立無花果離體培養(yǎng)的快速增殖體系。盡管宋儀農(nóng)等近幾年來對不同品種無花果的組織培養(yǎng)離體快繁技術(shù)作了相應的報道[2-5]，但沒有麥斯衣陶芬無花果的離體快速增殖方法的相關(guān)報道。基因型往往決定著離體培養(yǎng)的成敗，不同基因型對不同激素的種類及濃度搭配要求不同[6-7]。本研究以麥斯衣陶芬無花果為試驗材料，試圖建立其離體快速增殖的方法，以供參考。

1材料與方法

1.1材料

麥斯衣陶芬（MasuiDauphine）無花果生長旺盛的幼嫩枝條。

1.2方法

1.2.1外植體沖洗剪取處于旺盛生長的幼嫩枝條，將其剪成帶單芽的莖段，芽上方剪留0.5cm長，芽下莖段剪留1～1.5cm長，頂芽單獨截取。用洗衣粉反復清洗數(shù)遍，流水沖洗2h，裝入保鮮袋中備用。

1.2.2防褐化處理將裝有單芽的保鮮袋放入4℃的冰箱，預冷4h后取出，擦干表面水分，置于1500mg/L的維生素C溶液中浸泡30min，備用。

1.2.3表面消毒將進行過防褐化處理的單芽，先用75%乙醇浸泡30s，無菌清水沖洗2遍，無菌紙擦干表面水分，再轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2溶液中消毒8min，不間斷地晃動瓶子，使外植體與溶液充分接觸，促使消毒更徹底。然后，用無菌清水反復沖洗外植體數(shù)遍，直至將HgCl2完全沖洗干凈，倒掉多余清水，用無菌紙吸干外植體表面水分。

1.2.4扦插分別將每個外植體的剪口處再剪掉0.2cm長，按照芽的極性，將下端扦插入誘導培養(yǎng)基（基本培養(yǎng)基）中，培養(yǎng)20～30d，待小苗長至0.4～0.5cm時切下，轉(zhuǎn)到增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)。

1.2.5篩選外植體以腋芽和頂芽為試材，扦插在基本培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基中接種3個外植體，每處理10瓶，設3次重復，培養(yǎng)15～20d后調(diào)查統(tǒng)計。

1.2.6基本培養(yǎng)基選用MS、3/4MS、1/2MS和改良MS（以MS培養(yǎng)基母液的配方為基礎(chǔ)，用四水硝酸鈣替換大量元素中的無水氯化鈣，經(jīng)換算，其用量為無水氯化鈣的2.12倍）4種基本培養(yǎng)基，分別在其中添加1mg/L6-BA和0.05mg/LNAA對幼苗進行培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基中接種1株幼苗，每處理10瓶，設3次重復，培養(yǎng)30d后調(diào)查統(tǒng)計。

1.2.7篩選激素種類及濃度配比細胞分裂素選用0.5、1、2mg/L6-BA，生長素選用0.05、0.1mg/LNAA，0.4mg/LIBA和0.2、0.4、0.5、1、2mg/LGA3分別進行組配，每瓶培養(yǎng)基中接種1個外植體，每處理10瓶，設3次重復，培養(yǎng)30d后調(diào)查統(tǒng)計。

1.2.8生根及移栽選用1/2改良MS+0.5mg/LIBA+20mg/L蔗糖+7mg/L瓊脂粉、pH值5.8的培養(yǎng)基進行生根，并移栽。

2結(jié)果與分析

2.1外植體對成苗的影響

腋芽和頂芽均能培養(yǎng)成健壯苗，且2種外植體的成苗率基本相同（表1）。頂芽經(jīng)過防褐化和消毒處理后極易白化，白化率高達17%，腋芽白化率僅為6%，且腋芽取材容易，來源廣，綜合考慮，用腋芽作試材更經(jīng)濟方便。

2.2基本培養(yǎng)基對無花果增殖倍數(shù)的影響

由表2可以看出，幼苗在改良MS基本培養(yǎng)基中植株長勢健壯，葉色綠，株高達7.1cm，增殖倍數(shù)最高，達26.7倍，愈傷組織分化的量也較多，白嫩且晶瑩剔透，說明改良MS基本培養(yǎng)基更適于麥斯衣陶芬無花果離體快速培養(yǎng)。

2.3激素種類及濃度配比對無花果離體快速增殖的影響

由表3可知，在同時添加1mg/L6-BA、0.05mg/LNAA和1mg/LGA3的改良MS培養(yǎng)基上，試管苗植株長勢最為健壯，葉色綠，葉片大，幼嫩而肥厚，增殖倍數(shù)最高，高達28.4倍，植株株高最高，達6.8cm，節(jié)間最長，最大節(jié)間長度1.1cm。6-BA濃度達到2mg/L時，植株嚴重玻璃化。

2.4生根及移栽

選用1/2改良MS+0.5mg/LIBA+20mg/L蔗糖+7mg/L瓊脂粉、pH值5.8的培養(yǎng)基，生根率達到100%，移栽成活率達98%。

3結(jié)論與討論

在無花果離體培養(yǎng)過程中，由于其嫩莖及莖尖組織髓部較大，組織結(jié)構(gòu)疏松，使其內(nèi)部具有大量的內(nèi)生菌[8]，增加了無菌苗的獲得難度。本試驗中，選取旺盛生長期的莖尖（頂芽）和腋芽做試材，以減少內(nèi)生菌感染。同時，利用乙醇和HgCl2結(jié)合滅菌，并適當延長滅菌時間至8min，達到了較好的滅菌效果。

褐變也是無花果離體培養(yǎng)過程中普遍存在的問題。在研究過程中發(fā)現(xiàn)，較重程度的褐變會嚴重影響外植體的生長，甚至造成死亡。本試驗采用孫麗娟等的方法[9]，在培養(yǎng)前用1500mg/L維生素C溶液浸泡，大大降低了褐變程度，保證了培養(yǎng)過程中試管苗的正常生長。

無花果屬于無性繁殖能力很強的樹種，離體增殖和誘導生根相對比較容易。本研究發(fā)現(xiàn)，在較低的外源激素濃度下即可達到理想的效果，過高反而不利于生長。本試驗結(jié)果表明，適宜麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖的培養(yǎng)基為改良MS+6-BA1mg/L+0.05mg/LNAA+1mg/LGA3+20mg/L蔗糖+7mg/L瓊脂粉，pH值為5.8。這與段新玲等報道的培養(yǎng)基[3，10-11]不同，表明不同基因型材料所要求的培養(yǎng)基種類不同。

參考文獻：

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褐變也是無花果離體培養(yǎng)過程中普遍存在的問題。在研究過程中發(fā)現(xiàn)，較重程度的褐變會嚴重影響外植體的生長，甚至造成死亡。本試驗采用孫麗娟等的方法[9]，在培養(yǎng)前用1500mg/L維生素C溶液浸泡，大大降低了褐變程度，保證了培養(yǎng)過程中試管苗的正常生長。

無花果屬于無性繁殖能力很強的樹種，離體增殖和誘導生根相對比較容易。本研究發(fā)現(xiàn)，在較低的外源激素濃度下即可達到理想的效果，過高反而不利于生長。本試驗結(jié)果表明，適宜麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖的培養(yǎng)基為改良MS+6-BA1mg/L+0.05mg/LNAA+1mg/LGA3+20mg/L蔗糖+7mg/L瓊脂粉，pH值為5.8。這與段新玲等報道的培養(yǎng)基[3，10-11]不同，表明不同基因型材料所要求的培養(yǎng)基種類不同。

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褐變也是無花果離體培養(yǎng)過程中普遍存在的問題。在研究過程中發(fā)現(xiàn)，較重程度的褐變會嚴重影響外植體的生長，甚至造成死亡。本試驗采用孫麗娟等的方法[9]，在培養(yǎng)前用1500mg/L維生素C溶液浸泡，大大降低了褐變程度，保證了培養(yǎng)過程中試管苗的正常生長。

無花果屬于無性繁殖能力很強的樹種，離體增殖和誘導生根相對比較容易。本研究發(fā)現(xiàn)，在較低的外源激素濃度下即可達到理想的效果，過高反而不利于生長。本試驗結(jié)果表明，適宜麥斯衣陶芬無花果離體快速增殖的培養(yǎng)基為改良MS+6-BA1mg/L+0.05mg/LNAA+1mg/LGA3+20mg/L蔗糖+7mg/L瓊脂粉，pH值為5.8。這與段新玲等報道的培養(yǎng)基[3，10-11]不同，表明不同基因型材料所要求的培養(yǎng)基種類不同。

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