煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導因子
2015-01-15 15:50:03潘梅戚華莎黃賽王景飛呂德任符瑞
江蘇農業科學 2014年11期
潘梅+戚華莎+黃賽+王景飛+呂德任+符瑞侃
摘要：以煙葉唇柱苣苔無菌葉片為試驗材料，研究培養基pH值、無機鹽濃度、蔗糖濃度、植物生長調節劑種類及配比等對不定芽誘導的影響，以期篩選出最佳誘導培養基。結果表明：不定芽誘導的最佳培養基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L，滅菌前pH值為6.0，40d不定芽誘導率為100%，不定芽數平均為9.58個/張，生長勢好。
關鍵詞：煙葉唇柱苣苔；葉片；不定芽；組織培養
中圖分類號：Q943.1文獻標志碼：A文章編號：1002-1302（2014）11-0075-03
苦苣苔科植物具有極重要的生物學價值和分類意義[1]，其種類繁多，全世界約有150屬3000余種，我國有58屬約463種[2]，其中海南省約有13屬21種1變種，而特有種10種[3]。苦苣苔科植物中許多種類是重要的觀賞植物、藥用植物和特種蔬菜資源。煙葉唇柱苣苔（Chiritaheterotricha）是苦苣苔科唇柱苣苔屬多年生草本植物，生于海拔約430m的山谷林中或溪邊石上，是海南特有的野生花卉，其花冠淡紫色或白色，極為優雅，而且花期長，四季長綠，適合觀賞和園藝。此外，唇柱苣苔屬植物具有廣泛的適應性[4]，因而煙葉唇柱苣苔具有極大的開發潛力。目前，煙葉唇柱苣苔仍處于野生狀態，未進行商品化開發。由于人類活動的干擾、生態環境惡化以及自身的原因，煙葉唇柱苣苔資源逐漸減少，因此極有必要進行組織培養研究，以滿足煙葉唇柱苣苔的保護和開發利用的需要。本試驗以煙葉唇柱苣苔無菌葉片作為材料，較系統地研究葉片分化不定芽過程中的若干影響因素，以期篩選出最佳的不定芽誘導培養條件，快速建立煙葉唇柱苣苔組培技術體系。
1材料與方法
1.1試驗材料
植株采自海南省保亭縣。取幼葉進行表面消毒后培養獲得的無菌葉片作為試驗材料。
1.2試驗方法
在基本培養基中添加不同種類和濃度的植物生長調節劑，除試驗項目以外，所有處理中的基本培養基中含食用蔗糖30g/L、卡拉膠9g/L，滅菌前pH值為6.0，光照強度1500lx，光照時間9h/d，培養溫度（26±2）℃。取無菌植株小葉片（約0.5cm×0.5cm），以葉面朝上接種于各種培養基上（圖1），每個處理接種8袋，每袋3張葉，3次重復，定期觀察并記錄，培養40d后統計葉片不定芽誘導率和平均不定芽數。不定芽誘導率=誘導出芽葉片數/接種葉片數×100%，平均不定芽數=不定芽總數/誘導出芽葉片數。
1.2.1不同接種方式對不定芽誘導的影響以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L為基本培養基，接種葉片分別以葉背和葉面平放于培養基上，共2種處理。
1.2.2pH值對不定芽誘導的影響以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L為基本培養基，滅菌前pH值分別調至5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，共5個處理。
1.2.3無機鹽濃度對不定芽誘導的影響以1/4MS、2/4MS、3/4MS、MS作為基本培養基，各添加6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L，共4個處理。
1.2.4不同種類細胞分裂素對不定芽誘導的影響以MS+NAA0.1mg/L為基本培養基，分別添加6-BA0.1mg/L、KT0.1mg/L和TDZ0.1mg/L，共3個處理。
1.2.5蔗糖濃度對不定芽誘導的影響以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L為基本培養基，設置蔗糖濃度10、20、30、40、50g/L共5個處理。
1.2.6不同植物生長調節劑組合對不定芽誘導的影響以MS為基本培養基，設計6-BA0.1、0.5、1.0mg/L與NAA0.1、0.5mg/L不同配比，共6個處理。
1.3數據分析
采用方差分析法，F測驗顯著后用新復極差法進行多重比較。
2結果與分析
2.1不同接種方式對不定芽誘導的影響
煙葉唇柱苣苔葉片幾乎無明顯的愈傷組織分化，可以直接分化出不定芽。接種15d后，葉面開始膨大隆起，25d開始有小芽點萌動，40d在葉片邊緣、主葉脈基部和葉面處均分化出不定芽。從表1可見，以葉背和葉面2種方式接種培養的結果差異極大，以葉背接觸培養基的葉片不定芽誘導率高達100%，平均不定芽數為7.22個/張；而葉面接觸培養基的不定芽誘導率只有73.91%，平均不定芽數為4.76個/張。方差分析結果表明，2種接種方式不定芽誘導率和平均不定芽數的差異均達到極顯著水平，因此煙葉唇柱苣苔葉片不定芽的誘導以葉背平置于培養基上為宜。
2.2pH值對不定芽誘導的影響
由表2可知，pH值為6.0的培養基上不定芽的誘導率和平均不定芽數最高，分別為100%和7.34個/張；其次為pH值為6.5的培養基，其不定芽誘導率和平均不定芽數分別為96.30%和6.07個/張；最低的為pH值為5.0的培養基，其不定芽誘導率和平均不定芽數分別為79.17%和4.01個/張。經方差分析可知，pH值為6.0的培養基與其他培養基處理的不定芽誘導率和平均不定芽數的差異極顯著，因此煙葉唇柱苣苔不定芽誘導培養基的pH值在滅菌前宜調至6.0。
2.3無機鹽濃度對不定芽誘導的影響
從表3可見，除1/4MS外，其余3種無機鹽濃度對葉片不定芽的誘導率均能達到100%，而平均不定芽數則隨著無機鹽濃度的增加而增加，呈正相關關系。MS對葉片不定芽的誘導效果最好，平均不定芽數最多，達7.23個/張，與其他處理差異極顯著，且芽苗生長健壯，葉色濃綠；3/4MS的誘導效果次之，分化芽數為6.18個/張，芽生長勢也好，葉綠色；1/2MS和1/4MS誘導的平均不定芽數差異不顯著，但1/4MS誘導的不定芽生長勢差，部分葉片出現黃化現象。說明全量MS培養基適合煙葉唇柱苣苔不定芽誘導培養。
2.4不同種類細胞分裂素對不定芽誘導的影響
由表4知，6-BA和TDZ對葉片不定芽的誘導率均達到100%，但二者誘導的平均不定芽數差異極顯著，6-BA平均不定芽數達7.17個/張，而TDZ僅為4.25個/張；誘導效果最差的為KT，不定芽誘導率僅為47.62%，平均不定芽數為3.10個/張。從生長勢看，6-BA誘導的不定芽長勢好，KT誘導的不定芽也正常，但較細小，而TDZ誘導的芽在40d以后出現較多的玻璃化現象。因此，煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導培養，細胞分裂素宜選用6-BA。
2.5蔗糖濃度對不定芽誘導的影響
由表5可以看出，30g/L蔗糖對煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導效果最好，不定芽誘導率達到100%，平均不定芽數為7.50個/張；其次是20g/L蔗糖，不定芽誘導率和平均不定芽數分別為100%和6.67個/張；最差的為50g/L蔗糖，不定芽誘導率和平均不定芽數分別為92.31%和3.14個/張。可見5種蔗糖濃度培養基的不定芽生長均正常。經方差分析結果可知，20、30g/L蔗糖誘導的不定芽誘導率和平均不定芽數差異均不顯著，而二者與10、40、50g/L蔗糖處理差異極顯著，說明蔗糖濃度對煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導影響較大，過高或過低的蔗糖均不利于不定芽的生長，因此煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導培養可以選用20～30g/L蔗糖。
2.6不同植物生長調節劑組合對不定芽誘導的影響
葉片接種于6個含植物生長調節劑的培養基中，25d后均有不定芽分化，40d平均不定芽數均超過4個/張。從表6可見，不同的6-BA和NAA配比對煙葉唇柱苣苔不定芽誘導和生長影響很大，其中以6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L組合對不定芽的誘導效果最好，不定芽誘導率高達100%，不定芽分化數量最多，平均有9.58個/張，其芽苗生長勢好，葉色綠而健壯（圖2）。其次為6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L組合，其不定芽誘導率也高達100%，但不定芽分化數量較少，為7.21個/張。方差分析結果表明，6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L組合與6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L組合不定芽誘導率差異不顯著，與其他配比組合差異極顯著；而平均不定芽數與其他配比差異極顯著，因此適合煙葉唇柱苣苔不定芽誘導的植物生長調節劑組合為6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。
3結論與討論
本試驗結果表明，影響煙葉唇柱苣苔不定芽誘導的因素較多，接種葉片放置方式、培養基pH值、無機鹽濃度、蔗糖濃度、植物生長調節劑種類及配比對不定芽誘導均有影響，本試驗中所有處理均可誘導不定芽分化，但各處理間差異較大。
煙葉唇柱苣苔以葉背朝下的方式接入培養基為佳，表現為誘導率高，分化芽數多，與葉面朝下方式間差異極顯著。桂林唇柱苣苔、三苞唇柱苣苔等苦苣苔科植物組織培養的葉片外植體均為葉背朝下接入培養基中[5-6]，不同植物外植體的生長與分化所需最適合的pH值不同，煙葉唇柱苣苔的葉片分化以pH值為6.0最適宜，與其他處理間的不定芽誘導率和不定芽分化數差異極顯著。本試驗中無機鹽濃度對不定芽的誘導數量和生長勢影響極大，在全量的MS培養基上平均不定芽數最多，生長勢好；而在1/4MS培養基的誘導效果最差，不定芽誘導數量少，葉片黃化。培養基中的無機營養成分是組成植物生命體的主要元素，會影響植物的生長與分化，而鎂是葉綠素分子結構中的一部分，缺鎂時葉綠素不能形成，致使葉片失綠[7]，這可能是培養物出現黃化現象的原因。植物生長調節劑的種類及配比對不定芽的誘導影響極大，6-BA的效果極顯著優于KT和TDZ。TDZ兼有細胞分裂素和生長素的功效，在組培中應用廣泛[8]，但在苦苣苔科植物中尚未有應用的報道。本試驗中TDZ的效果并不理想，誘導率低分化芽數少，后期還會出現玻璃化現象，這也許是由于濃度偏高的原因。6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L組合對不定芽的誘導效果最好，誘導率達到100%，平均誘導不定芽數高達9.58個/張，較其他配比差異極顯著。該結果與湯正輝的研究結果[9]有差異，湯正輝認為6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L組合的效果最佳[9]。蔗糖在組織培養中主要作為碳源和能源物質，同時可以調節培養基的滲透壓[7]，其濃度與細胞增殖和分化有關[10-11]。本試驗中蔗糖對煙葉唇柱苣苔不定芽誘導生長的作用十分明顯，過高或過低的蔗糖濃度均不利于芽的誘導，以30g/L濃度最佳。
綜合試驗結果可知，在溫度（26±2）℃、光照度1500lx的培養條件下，煙葉唇柱苣苔不定芽誘導的最佳培養基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L，滅菌前pH值為6.0，接種葉片以葉背平置于培養基上，不定芽誘導效果最好，其誘導率高，不定芽分化多，芽苗生長勢好。
苦苣苔科植物由于葉片表面密布絨毛，消毒極為困難，初代培養污染率極高。目前，有關煙葉唇柱苣苔的組織培養研究極少，本試驗通過系統研究建立起葉片誘導體系，減少了初代培養接種污染概率，且增殖效率高，可以快速建立高效再生體系，為煙葉唇柱苣苔的商品化開發奠定基礎，也可以為其他苦苣苔植物的開發利用及技術研究提供技術參考。
參考文獻：
[1]溫放，張啟翔.廣西苦苣苔科野生觀賞植物資源的調查、引種及現狀分析[J].種質資源，2005，16（4）：60-65.
[2]李桭宇，王印波.中國苣苔科植物[M].鄭州：河南科學技術出版社，2005：4-5.
[3]史佑海，徐世松，黃覺武.海南苦苣苔科野生植物資源及其觀賞特性評價[J].北方園藝，2011（11）：79-82.
[4]王莉芳，黃士訓，周太久，等.廣西唇柱苣苔屬植物的引種栽培試驗[J].福建林業科技，2012，39（2）：109-112.
[5]付傳明，黃寧珍，唐鳳鸞，等.桂林唇柱苣苔的組織培養和快速繁殖[J].植物生理學通訊，2010，46（3）：253-254.
[6]余海霞，凌征柱，黃雪彥，等.三苞唇柱苣苔的組織培養與快速繁殖[J].植物生理學通訊，2010，46（11）：1177-1178.
[7]王玉英，高新一.植物組織培養技術手冊[M].北京：金盾出版社，2006：113-114.
[8]陳肖英，葉慶生，劉偉.TDZ研究進展（綜述）[J].亞熱帶植物科學，2003，32（3）：59-63.
[9]湯正輝.苦苣苔科植物的快速繁殖、離體保存及耐陰性研究[D].成都：四川大學，2007.
[10]岳紅，盧其能，趙昶靈，等.蔗糖濃度和外源激素對馬鈴薯微型薯誘導的影響[J].江蘇農業科學，2012，40（7）：58-60.
[11]涂藝聲.經濟植物大規模快速繁殖技術[M].北京：化學工業出版社，2009：33.
2.4不同種類細胞分裂素對不定芽誘導的影響
由表4知，6-BA和TDZ對葉片不定芽的誘導率均達到100%，但二者誘導的平均不定芽數差異極顯著，6-BA平均不定芽數達7.17個/張，而TDZ僅為4.25個/張；誘導效果最差的為KT，不定芽誘導率僅為47.62%，平均不定芽數為3.10個/張。從生長勢看，6-BA誘導的不定芽長勢好，KT誘導的不定芽也正常，但較細小，而TDZ誘導的芽在40d以后出現較多的玻璃化現象。因此，煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導培養，細胞分裂素宜選用6-BA。
2.5蔗糖濃度對不定芽誘導的影響
由表5可以看出，30g/L蔗糖對煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導效果最好，不定芽誘導率達到100%，平均不定芽數為7.50個/張；其次是20g/L蔗糖，不定芽誘導率和平均不定芽數分別為100%和6.67個/張；最差的為50g/L蔗糖，不定芽誘導率和平均不定芽數分別為92.31%和3.14個/張。可見5種蔗糖濃度培養基的不定芽生長均正常。經方差分析結果可知，20、30g/L蔗糖誘導的不定芽誘導率和平均不定芽數差異均不顯著，而二者與10、40、50g/L蔗糖處理差異極顯著，說明蔗糖濃度對煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導影響較大，過高或過低的蔗糖均不利于不定芽的生長，因此煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導培養可以選用20～30g/L蔗糖。
2.6不同植物生長調節劑組合對不定芽誘導的影響
葉片接種于6個含植物生長調節劑的培養基中，25d后均有不定芽分化，40d平均不定芽數均超過4個/張。從表6可見，不同的6-BA和NAA配比對煙葉唇柱苣苔不定芽誘導和生長影響很大，其中以6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L組合對不定芽的誘導效果最好，不定芽誘導率高達100%，不定芽分化數量最多，平均有9.58個/張，其芽苗生長勢好，葉色綠而健壯（圖2）。其次為6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L組合，其不定芽誘導率也高達100%，但不定芽分化數量較少，為7.21個/張。方差分析結果表明，6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L組合與6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L組合不定芽誘導率差異不顯著，與其他配比組合差異極顯著；而平均不定芽數與其他配比差異極顯著，因此適合煙葉唇柱苣苔不定芽誘導的植物生長調節劑組合為6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。
3結論與討論
本試驗結果表明，影響煙葉唇柱苣苔不定芽誘導的因素較多，接種葉片放置方式、培養基pH值、無機鹽濃度、蔗糖濃度、植物生長調節劑種類及配比對不定芽誘導均有影響，本試驗中所有處理均可誘導不定芽分化，但各處理間差異較大。
煙葉唇柱苣苔以葉背朝下的方式接入培養基為佳，表現為誘導率高，分化芽數多，與葉面朝下方式間差異極顯著。桂林唇柱苣苔、三苞唇柱苣苔等苦苣苔科植物組織培養的葉片外植體均為葉背朝下接入培養基中[5-6]，不同植物外植體的生長與分化所需最適合的pH值不同，煙葉唇柱苣苔的葉片分化以pH值為6.0最適宜，與其他處理間的不定芽誘導率和不定芽分化數差異極顯著。本試驗中無機鹽濃度對不定芽的誘導數量和生長勢影響極大，在全量的MS培養基上平均不定芽數最多，生長勢好；而在1/4MS培養基的誘導效果最差，不定芽誘導數量少，葉片黃化。培養基中的無機營養成分是組成植物生命體的主要元素，會影響植物的生長與分化，而鎂是葉綠素分子結構中的一部分，缺鎂時葉綠素不能形成，致使葉片失綠[7]，這可能是培養物出現黃化現象的原因。植物生長調節劑的種類及配比對不定芽的誘導影響極大，6-BA的效果極顯著優于KT和TDZ。TDZ兼有細胞分裂素和生長素的功效，在組培中應用廣泛[8]，但在苦苣苔科植物中尚未有應用的報道。本試驗中TDZ的效果并不理想，誘導率低分化芽數少，后期還會出現玻璃化現象，這也許是由于濃度偏高的原因。6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L組合對不定芽的誘導效果最好，誘導率達到100%，平均誘導不定芽數高達9.58個/張，較其他配比差異極顯著。該結果與湯正輝的研究結果[9]有差異，湯正輝認為6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L組合的效果最佳[9]。蔗糖在組織培養中主要作為碳源和能源物質，同時可以調節培養基的滲透壓[7]，其濃度與細胞增殖和分化有關[10-11]。本試驗中蔗糖對煙葉唇柱苣苔不定芽誘導生長的作用十分明顯，過高或過低的蔗糖濃度均不利于芽的誘導，以30g/L濃度最佳。
綜合試驗結果可知，在溫度（26±2）℃、光照度1500lx的培養條件下，煙葉唇柱苣苔不定芽誘導的最佳培養基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L，滅菌前pH值為6.0，接種葉片以葉背平置于培養基上，不定芽誘導效果最好，其誘導率高，不定芽分化多，芽苗生長勢好。
苦苣苔科植物由于葉片表面密布絨毛，消毒極為困難，初代培養污染率極高。目前，有關煙葉唇柱苣苔的組織培養研究極少，本試驗通過系統研究建立起葉片誘導體系，減少了初代培養接種污染概率，且增殖效率高，可以快速建立高效再生體系，為煙葉唇柱苣苔的商品化開發奠定基礎，也可以為其他苦苣苔植物的開發利用及技術研究提供技術參考。
參考文獻：
[1]溫放，張啟翔.廣西苦苣苔科野生觀賞植物資源的調查、引種及現狀分析[J].種質資源，2005，16（4）：60-65.
[2]李桭宇，王印波.中國苣苔科植物[M].鄭州：河南科學技術出版社，2005：4-5.
[3]史佑海，徐世松，黃覺武.海南苦苣苔科野生植物資源及其觀賞特性評價[J].北方園藝，2011（11）：79-82.
[4]王莉芳，黃士訓，周太久，等.廣西唇柱苣苔屬植物的引種栽培試驗[J].福建林業科技，2012，39（2）：109-112.
[5]付傳明，黃寧珍，唐鳳鸞，等.桂林唇柱苣苔的組織培養和快速繁殖[J].植物生理學通訊，2010，46（3）：253-254.
[6]余海霞，凌征柱，黃雪彥，等.三苞唇柱苣苔的組織培養與快速繁殖[J].植物生理學通訊，2010，46（11）：1177-1178.
[7]王玉英，高新一.植物組織培養技術手冊[M].北京：金盾出版社，2006：113-114.
[8]陳肖英，葉慶生，劉偉.TDZ研究進展（綜述）[J].亞熱帶植物科學，2003，32（3）：59-63.
[9]湯正輝.苦苣苔科植物的快速繁殖、離體保存及耐陰性研究[D].成都：四川大學，2007.
[10]岳紅，盧其能，趙昶靈，等.蔗糖濃度和外源激素對馬鈴薯微型薯誘導的影響[J].江蘇農業科學，2012，40（7）：58-60.
[11]涂藝聲.經濟植物大規模快速繁殖技術[M].北京：化學工業出版社，2009：33.
2.4不同種類細胞分裂素對不定芽誘導的影響
由表4知，6-BA和TDZ對葉片不定芽的誘導率均達到100%，但二者誘導的平均不定芽數差異極顯著，6-BA平均不定芽數達7.17個/張，而TDZ僅為4.25個/張；誘導效果最差的為KT，不定芽誘導率僅為47.62%，平均不定芽數為3.10個/張。從生長勢看，6-BA誘導的不定芽長勢好，KT誘導的不定芽也正常，但較細小，而TDZ誘導的芽在40d以后出現較多的玻璃化現象。因此，煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導培養，細胞分裂素宜選用6-BA。
2.5蔗糖濃度對不定芽誘導的影響
由表5可以看出，30g/L蔗糖對煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導效果最好，不定芽誘導率達到100%，平均不定芽數為7.50個/張；其次是20g/L蔗糖，不定芽誘導率和平均不定芽數分別為100%和6.67個/張；最差的為50g/L蔗糖，不定芽誘導率和平均不定芽數分別為92.31%和3.14個/張。可見5種蔗糖濃度培養基的不定芽生長均正常。經方差分析結果可知，20、30g/L蔗糖誘導的不定芽誘導率和平均不定芽數差異均不顯著，而二者與10、40、50g/L蔗糖處理差異極顯著，說明蔗糖濃度對煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導影響較大，過高或過低的蔗糖均不利于不定芽的生長，因此煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導培養可以選用20～30g/L蔗糖。
2.6不同植物生長調節劑組合對不定芽誘導的影響
葉片接種于6個含植物生長調節劑的培養基中，25d后均有不定芽分化，40d平均不定芽數均超過4個/張。從表6可見，不同的6-BA和NAA配比對煙葉唇柱苣苔不定芽誘導和生長影響很大，其中以6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L組合對不定芽的誘導效果最好，不定芽誘導率高達100%，不定芽分化數量最多，平均有9.58個/張，其芽苗生長勢好，葉色綠而健壯（圖2）。其次為6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L組合，其不定芽誘導率也高達100%，但不定芽分化數量較少，為7.21個/張。方差分析結果表明，6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L組合與6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L組合不定芽誘導率差異不顯著，與其他配比組合差異極顯著；而平均不定芽數與其他配比差異極顯著，因此適合煙葉唇柱苣苔不定芽誘導的植物生長調節劑組合為6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。
3結論與討論
本試驗結果表明，影響煙葉唇柱苣苔不定芽誘導的因素較多，接種葉片放置方式、培養基pH值、無機鹽濃度、蔗糖濃度、植物生長調節劑種類及配比對不定芽誘導均有影響，本試驗中所有處理均可誘導不定芽分化，但各處理間差異較大。
煙葉唇柱苣苔以葉背朝下的方式接入培養基為佳，表現為誘導率高，分化芽數多，與葉面朝下方式間差異極顯著。桂林唇柱苣苔、三苞唇柱苣苔等苦苣苔科植物組織培養的葉片外植體均為葉背朝下接入培養基中[5-6]，不同植物外植體的生長與分化所需最適合的pH值不同，煙葉唇柱苣苔的葉片分化以pH值為6.0最適宜，與其他處理間的不定芽誘導率和不定芽分化數差異極顯著。本試驗中無機鹽濃度對不定芽的誘導數量和生長勢影響極大，在全量的MS培養基上平均不定芽數最多，生長勢好；而在1/4MS培養基的誘導效果最差，不定芽誘導數量少，葉片黃化。培養基中的無機營養成分是組成植物生命體的主要元素，會影響植物的生長與分化，而鎂是葉綠素分子結構中的一部分，缺鎂時葉綠素不能形成，致使葉片失綠[7]，這可能是培養物出現黃化現象的原因。植物生長調節劑的種類及配比對不定芽的誘導影響極大，6-BA的效果極顯著優于KT和TDZ。TDZ兼有細胞分裂素和生長素的功效，在組培中應用廣泛[8]，但在苦苣苔科植物中尚未有應用的報道。本試驗中TDZ的效果并不理想，誘導率低分化芽數少，后期還會出現玻璃化現象，這也許是由于濃度偏高的原因。6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L組合對不定芽的誘導效果最好，誘導率達到100%，平均誘導不定芽數高達9.58個/張，較其他配比差異極顯著。該結果與湯正輝的研究結果[9]有差異，湯正輝認為6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L組合的效果最佳[9]。蔗糖在組織培養中主要作為碳源和能源物質，同時可以調節培養基的滲透壓[7]，其濃度與細胞增殖和分化有關[10-11]。本試驗中蔗糖對煙葉唇柱苣苔不定芽誘導生長的作用十分明顯，過高或過低的蔗糖濃度均不利于芽的誘導，以30g/L濃度最佳。
綜合試驗結果可知，在溫度（26±2）℃、光照度1500lx的培養條件下，煙葉唇柱苣苔不定芽誘導的最佳培養基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L，滅菌前pH值為6.0，接種葉片以葉背平置于培養基上，不定芽誘導效果最好，其誘導率高，不定芽分化多，芽苗生長勢好。
苦苣苔科植物由于葉片表面密布絨毛，消毒極為困難，初代培養污染率極高。目前，有關煙葉唇柱苣苔的組織培養研究極少，本試驗通過系統研究建立起葉片誘導體系，減少了初代培養接種污染概率，且增殖效率高，可以快速建立高效再生體系，為煙葉唇柱苣苔的商品化開發奠定基礎，也可以為其他苦苣苔植物的開發利用及技術研究提供技術參考。
參考文獻：
[1]溫放，張啟翔.廣西苦苣苔科野生觀賞植物資源的調查、引種及現狀分析[J].種質資源，2005，16（4）：60-65.
[2]李桭宇，王印波.中國苣苔科植物[M].鄭州：河南科學技術出版社，2005：4-5.
[3]史佑海，徐世松，黃覺武.海南苦苣苔科野生植物資源及其觀賞特性評價[J].北方園藝，2011（11）：79-82.
[4]王莉芳，黃士訓，周太久，等.廣西唇柱苣苔屬植物的引種栽培試驗[J].福建林業科技，2012，39（2）：109-112.
[5]付傳明，黃寧珍，唐鳳鸞，等.桂林唇柱苣苔的組織培養和快速繁殖[J].植物生理學通訊，2010，46（3）：253-254.
[6]余海霞，凌征柱，黃雪彥，等.三苞唇柱苣苔的組織培養與快速繁殖[J].植物生理學通訊，2010，46（11）：1177-1178.
[7]王玉英，高新一.植物組織培養技術手冊[M].北京：金盾出版社，2006：113-114.
[8]陳肖英，葉慶生，劉偉.TDZ研究進展（綜述）[J].亞熱帶植物科學，2003，32（3）：59-63.
[9]湯正輝.苦苣苔科植物的快速繁殖、離體保存及耐陰性研究[D].成都：四川大學，2007.
[10]岳紅，盧其能，趙昶靈，等.蔗糖濃度和外源激素對馬鈴薯微型薯誘導的影響[J].江蘇農業科學，2012，40（7）：58-60.
[11]涂藝聲.經濟植物大規模快速繁殖技術[M].北京：化學工業出版社，2009：33.
