GOLPH3 在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

唐紀(jì)蘭 文新年 白 晶

肺癌是發(fā)生率和病死率增長(zhǎng)最快，對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近年來(lái)，盡管肺癌的治療有了較大的提高，但是肺癌發(fā)生的分子機(jī)制至今尚不完全明確，因此，進(jìn)一步探索研究新的基因功能改變與肺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，對(duì)于進(jìn)一步提高肺癌的治療水平具有重要意義。高爾基磷酸化蛋白3(Golgi protein phosphorylation 3，GOLPH3)屬于高爾基體基質(zhì)蛋白，是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種癌基因，主要定位于高爾基體反面的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，通過(guò)調(diào)控雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號(hào)通路影響多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞的分化和增殖［1］。關(guān)于GOLPH3 與肺癌組織的關(guān)系研究報(bào)道尚少，本研究通過(guò)免疫組化法觀(guān)察GOLPH3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)，探討其與惡性腫瘤的內(nèi)在關(guān)系，為尋找新的肺癌預(yù)后標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)提供線(xiàn)索。

材料與方法

1.研究對(duì)象:原發(fā)性人肺癌組織標(biāo)本取自筆者醫(yī)院病理科。肺癌病例來(lái)自2005 年1 月～2011 年12 月新發(fā)并通過(guò)病理學(xué)明確診斷為肺癌。納入標(biāo)準(zhǔn):①患者的臨床病理和隨訪(fǎng)資料完整;②病理明確診斷為非小細(xì)胞肺癌(腺癌或鱗癌);③獲得患者知情同意;④患者手術(shù)前均未進(jìn)行化療或放療，術(shù)后存活時(shí)間超過(guò)3 個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn):①術(shù)前接受過(guò)化療;②合并其他慢性消耗性疾病或傳染病;③合并其他惡性腫瘤;④樣本量小的其他類(lèi)型肺癌。隨訪(fǎng)時(shí)間為2005 年3月～2012 年12 月，平均隨訪(fǎng)時(shí)間為33.9(3 ～70)個(gè)月，隨訪(fǎng)率為100%。具有完整的臨床資料且隨訪(fǎng)可靠，并排除并發(fā)其他類(lèi)型的惡性腫瘤或隨訪(fǎng)中出現(xiàn)非肺癌致死的患者。術(shù)后分期Ⅰ期患者未進(jìn)行輔助化療，Ⅱ～Ⅲ期患者行鉑類(lèi)為基礎(chǔ)的化療。

2.免疫組化法檢測(cè)GOLPH3 在肺癌中的表達(dá)水平:用En-Vision 法常規(guī)進(jìn)行免疫組化檢測(cè)GOLPH3 在肺癌組織中的表達(dá)。每張切片隨機(jī)選擇10 個(gè)高倍鏡(×400)視野對(duì)1000 個(gè)細(xì)胞進(jìn)行觀(guān)察。GOLPH3 蛋白均主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，為均勻的棕黃色顆粒。GOLPH3 蛋白的表達(dá)為陰性或陽(yáng)性，按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)判，評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)為:陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)＜5%為0 分，5% ～24%為1 分，25% ～49%為2 分，50% ～74%為3 分，≥75%為4 分。陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的著色深度:基本不著色為0 分，淡黃色為1 分，黃色為2 分，棕黃色3分。兩者得分相乘，0 分記為(-)，1 ～4 分記為(+)，5 ～8 分記為(+ +)，9 ～12 分記為(+ + +)。(+)～(+ + +)視為陽(yáng)性表達(dá)，其余判定為陰性表達(dá)［2］。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 15.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。對(duì)生存概率的估計(jì)采用Kaplan-Meier 法，不同組間生存曲線(xiàn)的比較采用Log-rank 檢驗(yàn)，風(fēng)險(xiǎn)比(HR)的估計(jì)采用COX 比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平與NSCLC 臨床病理因素的關(guān)系:免疫組化的結(jié)果顯示GOLPH3 蛋白主要定位于NSCLC 細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中(圖1)，GOLPH3蛋白的陽(yáng)性率是66.1%。相應(yīng)的癌旁組織中GOLPH3 蛋白表達(dá)大部分是陰性，GOLPH3 蛋白在癌旁組織中的陽(yáng)性率是10. 4%。根據(jù)免疫組化的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［2］，GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平相應(yīng)的分為陰性表達(dá)和陽(yáng)性表達(dá)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理類(lèi)型明顯相關(guān)，而與患者年齡、性別和吸煙史無(wú)關(guān)(表1)。

圖1 GOLPH3 蛋白在肺癌組織中表達(dá)(SP，×400)

表1 GOLPH3 的表達(dá)與NSCLC 患者臨床病理分析

2.GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平與NSCLC 患者預(yù)后的單因素分析:采用Kaplan - Meier 法，通過(guò)Log -rank 檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平與NSCLC 患者預(yù)后的關(guān)系(表2，圖2)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平與肺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，陰性表達(dá)GOLPH3 蛋白的肺癌患者的生存期明顯高于GOLPH3 蛋白陽(yáng)性表達(dá)者。

表2 COX 回歸單因素分析NSCLC 患者預(yù)后

圖2 Kaplan-Meier 法分析GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平與NSCLC 患者總體生存率的關(guān)系

3.GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平與NSCLC 患者預(yù)后多因素分析:為了消除各因素之間的交叉相互作用，進(jìn)一步通過(guò)多因素COX 回歸分析，結(jié)果顯示GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平與NSCLC 患者預(yù)后密切相關(guān)，陽(yáng)性GOLPH3 表達(dá)的肺癌患者死亡危險(xiǎn)增加2.190倍(表3)。這些結(jié)果說(shuō)明GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平是影響NSCLC 患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

表3 COX 回歸多因素分析NSCLC 患者預(yù)后

討 論

GOLPH3 基因又稱(chēng)GPP34、GMx33、MIDAS，編碼一種約34kDa 的蛋白質(zhì)，最初是在對(duì)小鼠高爾基體進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析時(shí)發(fā)現(xiàn)的，它屬于高爾基體基質(zhì)蛋白，是高爾基體復(fù)合物的一種相關(guān)蛋白，主要發(fā)揮蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)的作用［3］。近來(lái)研究表明GOLPH3 在非小細(xì)胞性肺癌、黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、前列腺癌、胃癌、食管癌和舌癌等多種惡性腫瘤中存在過(guò)量表達(dá)，這提示GOLPH3 在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，提出GOLPH3 可能是一個(gè)全新的致癌基因，是這些腫瘤預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素［1，4～8，12～15，19］;關(guān)于GOLPH3 與肺癌組織的關(guān)系僅Scott 等［1］研究報(bào)道外，其他報(bào)道尚少。

本研究表明，GOLPH3 在NSCLC 組織中表達(dá)明顯增高，并與腫瘤的直徑、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肺癌的病理類(lèi)型密切相關(guān)，這說(shuō)明GOLPH3 的表達(dá)與NSCLC 的惡性程度密切相關(guān)，可作為判斷肺癌生物學(xué)特征的輔助指標(biāo)。此外，本研究發(fā)現(xiàn)GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平與肺癌患者的生存期密切相關(guān)，GOLPH3 蛋白表達(dá)陽(yáng)性的NSCLC 患者生存期明顯低于GOLPH3 蛋白表達(dá)陰性的患者。單因素和多因素分析的結(jié)果均顯示，GOLPH3 蛋白的表達(dá)水平是影響NSCLC 患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可以作為預(yù)測(cè)NSCLC 患者生存率的有效指標(biāo)。關(guān)于GOLPH3 影響NSCLC 預(yù)后的機(jī)制可能與mTORC 信號(hào)通路有關(guān)［1］。mTOR 是一個(gè)重要的絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶，其異?；罨c多種人類(lèi)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)［9］。研究表明GOLPH3 可通過(guò)mTORCl 和mTORC2 刺激mTOR信號(hào)通路，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)S6K1、Akt 同時(shí)增高，加速蛋白合成、細(xì)胞分裂，抑制細(xì)胞凋亡/程序性死亡［3，4，10］。此外GOLPH3 還可通過(guò)與Retromer 復(fù)合體中Vps35 相互作用作用，調(diào)節(jié)Wnt 信號(hào)通路的活性［3，11，19］。Wnt 通路的過(guò)度激活與多種癌癥(包括結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌等)的發(fā)生緊密相關(guān)［16～18］。癌基因或抑癌基因的突變均可導(dǎo)致正常調(diào)控細(xì)胞增生的調(diào)節(jié)途徑不恰當(dāng)?shù)幕罨?，使?xì)胞增生失控而致腫瘤形成［20］。這些作用可能是GOLPH3 影響肺癌增殖和預(yù)后的機(jī)制。

綜上所述，GOLPH3 在NSCLC 組織中高表達(dá)，可促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖，與患者預(yù)后密切相關(guān)，可能在肺癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮非常重要的作用。GOLPH3 有望為肺癌治療新靶點(diǎn)。本研究因樣本量原因未將小細(xì)胞癌、大細(xì)胞癌、腺鱗癌、類(lèi)癌等其他肺癌病理類(lèi)型納入此次研究，有待于今后進(jìn)一步研究。

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