葛根素與阿片類藥物聯合應用對神經病理性痛的鎮痛作用

段美婷，王 婧，余 婧，王軍陽＊（.西安交通大學醫學部免疫學與病原生物學系，西安 7006；2.陜西省婦幼保健院醫學實驗中心，西安 70003）

葛根素與阿片類藥物聯合應用對神經病理性痛的鎮痛作用

段美婷1，2，王 婧1，余 婧1，王軍陽1＊（1.西安交通大學醫學部免疫學與病原生物學系，西安 710061；2.陜西省婦幼保健院醫學實驗中心，西安 710003）

目的 觀察葛根素與阿片類藥物聯合應用對坐骨神經慢性壓迫性損傷（chronic constriction injury，CCI）模型小鼠的鎮痛作用，為慢性神經病理性痛的治療及復方鎮痛藥的研發奠定基礎。方法 采用鉻腸線限制性環扎小鼠右側坐骨神經建立CCI神經病理性痛模型，熱板法測定葛根素（60mg·kg－1）、嗎啡（10mg·kg－1）和曲馬多（40mg·kg－1）單獨或者小劑量聯合腹腔注射對模型小鼠患側腳掌縮足潛伏期的影響。結果 單獨注射葛根素、嗎啡或曲馬多均可顯著提高CCI模型小鼠患側腳掌的縮足潛伏期，產生明顯的鎮痛作用。葛根素與嗎啡或曲馬多小劑量聯合應用后，也可明顯提高模型小鼠的縮足潛伏期，但不同組合的鎮痛效應不同，其中30mg·kg－1葛根素與5mg·kg－1嗎啡或20mg·kg－1曲馬多聯合應用的鎮痛作用最強，其鎮痛效應明顯高于60mg·kg－1葛根素注射組，但與10mg·kg－1嗎啡或40mg·kg－1曲馬多所產生的鎮痛效應比較，差異無統計學意義。結論 葛根素與嗎啡或曲馬多小劑量聯合應用可用于慢性神經病理性痛的臨床治療。

葛根素；嗎啡；曲馬多；聯合給藥；神經病理性痛

神經病理性痛是外周或中樞神經系統損傷或疾病引起的疼痛綜合征，以自發性疼痛、痛覺過敏和痛覺超敏為特征，嚴重影響著人類的健康和生存質量。由于神經病理性痛的發病機制目前尚不完全清楚，長期以來臨床治療疼痛主要依賴于阿片類藥物，由于特異性不高，常引起毒性和不良反應，如藥物依賴、呼吸抑制、惡心、嘔吐、幻覺等。鎮痛藥物的聯合應用不但能夠增強鎮痛作用，而且可以減少不良反應的發生，但目前鎮痛藥物聯合應用的研究相對較少。因此，本研究擬在以往研究發現葛根素對神經病理性痛具有鎮痛作用的基礎上［1］，進一步探討葛根素與嗎啡或曲馬多小劑量聯合應用對坐骨神經慢性壓迫性損傷（chronic constriction injury，CCI）模型小鼠的鎮痛作用，為慢性神經病理性痛的臨床治療及復方鎮痛藥的研發奠定基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器 YLS－21A冷熱板測痛儀（濟南益延科技發展有限公司）。

1.2 試藥 葛根素注射液（山東方明藥業集團股份有限公司，批號1304127）；鹽酸嗎啡（沈陽第一制藥廠，批號100903－2）；曲馬多（通化興華藥業有限公司，批號13070795）；烏拉坦（上海山浦化工有限公司，批號20070820）。

1.3 動物 雌性昆明小鼠（18～20g），由西安交通大學實驗動物中心提供。

2 方法

2.1 CCI模型的建立 參照文獻報道的方法［2－3］。小鼠腹腔注射烏拉坦（1.4g·kg－1）麻醉后，切開右后肢上部皮膚，鈍性分離股二頭肌，暴露坐骨神經主干。用8－0鉻制羊腸線在坐骨神經上輕輕結扎3個單結，結扎環間隔1mm，結扎扣的松緊程度以右后肢出現輕微收縮為宜。手術完成后，分層縫合肌肉和皮膚，腹腔注射青霉素預防感染。術后1周進行熱板實驗。

2.2 實驗分組及給藥方法 將CCI模型小鼠隨機分為10組，每組8只，分別為生理鹽水對照組，60 mg·kg－1葛根素組，10mg·kg－1嗎啡組，40 mg·kg－1曲馬多組，45mg·kg－1葛根素＋2.5 mg·kg－1嗎啡組，30mg·kg－1葛根素＋5 mg·kg－1嗎啡組，15mg·kg－1葛根素＋7.5 mg·kg－1嗎啡組，45mg·kg－1葛根素＋10 mg·kg－1曲馬多組，30mg·kg－1葛根素＋20 mg·kg－1曲馬多組，15mg·kg－1葛根素＋30 mg·kg－1曲馬多組。所有藥物均通過腹腔注射。

2.3 熱板實驗 參照文獻報道的方法［4－5］。將CCI模型小鼠放置在面板溫度為55±0.3°C的冷熱板測痛儀上，以抬足或舔足作為疼痛反應指標，動態測定小鼠給藥前和給藥后15，30，45，60，75和90min患側腳掌的縮足潛伏期（s）。每個觀察時間點測2次（間隔2min），取其平均值作為痛覺閾值。

3 實驗結果

3.1 CCI誘導的熱痛覺過敏 手術1周后，利用熱板法測定CCI模型小鼠的平均縮足潛伏期為6.85± 0.40s，明顯低于對照組小鼠的縮足潛伏期13.19± 0.50s，One－way ANOVA分析顯示，差異具有統計學意義（P＜0.01），提示CCI神經病理性痛模型小鼠建立成功。

3.2 葛根素與嗎啡聯合應用對CCI模型小鼠的鎮痛作用 見表1。表1結果顯示，腹腔單獨注射60 mg·kg－1葛根素或10mg·kg－1嗎啡，均可顯著提高CCI模型小鼠患側腳掌的縮足潛伏期，產生明顯的鎮痛作用，與生理鹽水對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01）。葛根素與嗎啡小劑量聯合應用同樣可提高CCI模型小鼠的縮足潛伏期，產生明顯的鎮痛效應，但不同組合的鎮痛效應不同，其中30 mg·kg－1葛根素與5mg·kg－1嗎啡聯合應用的鎮痛效應最強，維持時間最長，達到75min，其鎮痛效應明顯高于60mg·kg－1葛根素注射組（P＜0.01），但與10mg·kg－1嗎啡注射組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 葛根素與嗎啡聯合應用對CCI模型小鼠的鎮痛作用Tab.1 Analgesic effect of combined administration of puerarin and morphine on CCI mice ±s，n＝8）

表1 葛根素與嗎啡聯合應用對CCI模型小鼠的鎮痛作用Tab.1 Analgesic effect of combined administration of puerarin and morphine on CCI mice ±s，n＝8）

注：與生理鹽水對照組比較＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

藥物 劑量／mg·kg－1給藥前／s給藥后不同時間（min）小鼠的縮足潛伏期／s15 30 45 60 75 90生理鹽水 — 6.61±0.10 7.06±0.11 6.69±0.12 6.66±0.13 6.55±0.12 6.74±0.15 6.80±0.10葛根素 60 6.18±0.25 9.47±0.46＊＊10.34±0.29＊＊ 9.68±0.20＊＊ 9.17±0.18＊＊ 6.98±0.36 6.03±0.23嗎啡 10 6.98±0.48 9.88±0.73＊＊11.69±0.57＊＊10.08±0.38＊＊10.12±0.29＊＊ 9.08±0.34＊＊8.02±0.61葛根素＋45＋2.5 6.63±0.14 9.52±0.59＊＊10.76±0.21＊＊ 9.73±0.48＊＊ 8.85±0.43＊＊ 7.63±0.39 6.89±0.15嗎啡 30＋5.0 6.58±0.22 11.87±0.48＊＊12.79±0.80＊＊10.99±0.22＊＊10.66±0.52＊＊10.18±0.81＊＊8.78±0.78 15＋7.5 7.27±0.21 12.61±0.56＊＊12.19±0.28＊＊10.86±0.29＊＊10.44±0.23＊＊8.52±0.41 7.93±0.60

3.3 葛根素與曲馬多小劑量聯合應用對CCI模型小鼠的鎮痛作用 見表2。表2結果顯示，腹腔單獨注射60mg·kg－1葛根素或40mg·kg－1曲馬多，均可顯著提高CCI模型小鼠患側腳掌的縮足潛伏期，產生明顯的鎮痛作用，與生理鹽水對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01）。葛根素與曲馬多小劑量聯合應用同樣可提高CCI模型小鼠的縮足潛伏期，產生明顯的鎮痛效應，但不同組合的鎮痛效應不同，其中30mg·kg－1葛根素與20mg·kg－1曲馬多聯合應用的鎮痛作用最強，其鎮痛效應明顯高于60mg·kg－1葛根素注射組（P＜0.01），但與40mg·kg－1曲馬多注射組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表2 葛根素與曲馬多小劑量聯合應用對CCI模型小鼠的鎮痛作用Tab.2 Analgesic effect of combined administration of puerarin and small dose of tanmadol on CCI mice （±s，n＝8）

表2 葛根素與曲馬多小劑量聯合應用對CCI模型小鼠的鎮痛作用Tab.2 Analgesic effect of combined administration of puerarin and small dose of tanmadol on CCI mice （±s，n＝8）

注：與生理鹽水對照組比較＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

藥物 劑量／mg·kg－1 給藥前／s 給藥后不同時間（min）小鼠的縮足潛伏期／s 15 30 45 60 75 90生理鹽水 － 6.61±0.10 7.06±0.11 6.69±0.12 6.66±0.13 6.55±0.12 6.74±0.15 6.80±0.10葛根素 60 6.18±0.25 9.47±0.46＊＊10.34±0.29＊＊ 9.68±0.20＊＊ 9.17±0.18＊＊ 6.98±0.36 6.03±0.23曲馬多 40 7.18±0.09 12.97±0.24＊＊11.26±0.43＊＊ 9.63±0.32＊＊ 8.75±0.41＊＊ 7.66±0.38 7.07±0.14葛根素＋ 45＋10 6.50±0.15 12.34±0.66＊＊12.81±0.39＊＊ 9.89±0.32＊＊ 8.78±0.30＊＊ 8.04±0.13 6.83±0.09曲馬多 30＋20 7.05±0.11 13.12±0.73＊＊12.38±0.72＊＊10.48±0.50＊＊ 8.36±0.29＊ 7.71±0.34 7.49±0.20 15＋30 7.09±0.25 11.66±0.28＊＊11.65±0.45＊＊ 8.92±0.37＊＊ 8.30±0.06＊8.03±0.12 7.43±0.18

4 討論

阿片類藥物是臨床治療慢性神經病理性痛的首選藥物，但由于其不良反應較常見，長期應用易發生耐受和成癮等，因而極大地限制了此類藥物在疼痛治療中的應用。葛根素是從中藥葛根中提取的一種異黃酮化合物，具有擴張冠狀動脈、降血壓、降血脂、保護心肌及抗氧化、抗血栓形成、改善微循環以及提高免疫功能等多種藥理活性［6］，臨床主要用于治療心血管系統疾病。近年來研究表明，葛根素對燒傷引起的急性痛及慢性神經病理性痛模型大鼠具有明顯的鎮痛作用，其鎮痛機制主要是通過抑制大鼠DRG神經元細胞以及外周血單核細胞的ATP受體（P2X3和P2X2／3）表達來實現的［1，7－9］。但長期大劑量使用葛根素容易引起發熱、溶血、變態反應、肝腎功能損害和心衰等不良反應。因此，本研究觀察了葛根素與阿片類鎮痛藥物小劑量聯合應用對神經病理性痛的鎮痛效果，以期為臨床治療病理性痛尋求鎮痛效果好并且毒性和不良反應小的復方鎮痛藥物。

研究結果顯示：葛根素、嗎啡或曲馬多單獨使用均可對CCI模型小鼠產生明顯的鎮痛作用。葛根素與嗎啡小劑量聯合應用也可產生鎮痛作用，但3種不同劑量的組合方案所產生的鎮痛效應強弱不同，其中30mg·kg－1葛根素與5mg·kg－1嗎啡聯合應用的鎮痛效應最強，與單獨注射10mg·kg－1嗎啡的鎮痛效應比較，差異無統計學意義。同樣，葛根素和曲馬多小劑量聯合應用也可產生明顯的鎮痛作用，3種不同組合方案中以30mg·kg－1葛根素與20mg·kg－1曲馬多聯合應用的鎮痛效應最強。該研究結果提示，葛根素與嗎啡或曲馬多小劑量聯合應用，既能利用效應的疊加或協同作用產生理想的鎮痛效果，又能降低阿片類藥物和葛根素的用量從而減少不良反應的發生。該研究不但為臨床治療慢性神經病理性痛提供了新的思路，也為新型復方鎮痛藥物的研發奠定了基礎。參考文獻：

［1］ 羅敬華，曾曉艷，范桂香，等.葛根素對神經病理性痛模型小鼠的鎮痛作用［J］.西北藥學雜志，2013，28（1）：48－50.

［2］ 張倩，曾曉艷，王婧，等.不同鎮痛藥物對坐骨神經壓迫性損傷模型小鼠的鎮痛作用［J］.西北藥學雜志，2013，28（4）：385－388.

［3］ Bennett G J，Xie Y K.A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man［J］.Pain，1988，33（1）：87－107.

［4］ 張盼，梁建輝，葉向鋒.L－型鈣通道阻斷劑對曲馬多鎮痛作用的影響［J］.中國藥理學通報，2004，20（9）：976－980.

［5］ 趙銘，朱少非，劉靜，等.烏藤鎮痛膠囊的鎮痛、抗炎作用及對血流變性的影響［J］.西北藥學雜志，2007，22（3）：121－124.

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［7］ Li X，Zhang J，Gao Y，et al.Puerarin alleviates burnrelated procedural pain mediated by P2X3receptors［J］.Purinerg Signal，2011，7（4）：489－497.

［8］ Liang S，Xu C，Li G，et al.P2Xreceptors and modulation of pain transmission：focus on effects of drugs and compounds used in traditional Chinese medicine［J］.Neurochem Int，2010，57（7）：705－712.

［9］ Xu C，Li G，Gao Y，et al.Effect of puerarin on P2X3receptor involved in hyperalgesia after burn injury in the rat［J］.Brain Res Bull，2009，80（6）：341－346.

Analgesic effect of combined administration of puerarin and opioids on neuropathic pain

DUAN Meiting1，2，WANG Jing1，YU Jing1，WANG Junyang1＊（1.Department of Immunology and Pathogenic Biology，Health Science Center，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；2.Laboratory Center of Shaanxi Provincial Maternal and Child Health Hospital，Xi′an 710003，China）

Objective To investigate the analgesic effect of combined administration of puerarin and opioids on mice with chronic constriction injury（CCI）of the sciatic nerve，and lay a foundation for the treatment of chronic pathological pain and the development of compound analgesics.Methods After the establishment of CCI neuropathic pain mouse by restrictive ligation of right sciatic nerve with chromic catgut，hot plate test was used to measure the ipsilateral paw withdrawal latency of CCI mice before and after single or combined injection of puerarin（60mg·kg－1），morphine（10mg·kg－1）and tramadol（40mg·kg－1）.Results A single injection of puerarin，morphine or tramadol significantly improved the ipsilateral paw withdrawal latency of CCI mice and produced an obvious analgesic effect.Combined application of puerarin with morphine or tramadol at small doses also improved the paw withdrawal latency of CCI mice，but the analgesic effects produced by different combination groups were different.Combined application of 30mg·kg－1puerarin with 5mg·kg－1morphine or 20mg·kg－1tramadol showed the highest analgesic effect，which was higher than that of 60mg·kg－1puerarin but did not show statistical significance compared with that of 10mg·kg－1morphine or 40mg·kg－1tramadol.Conclusion Combined administration of puerarin with morphine or tramadol at small doses is workable for the clinical treatment of chronic neuropathic pain.

puerarin；morphine；tramadol；combined administration；neuropathic pain

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.018

R965

A

1004－2407（2015）02－0162－03

2014－09－06）

教育部留學回國人員啟動基金（10回國基金15）

段美婷，女，在讀碩士研究生

＊通信作者：王軍陽，男，副教授，碩士生導師