湖州地區1 814例新生兒耳聾基因篩查及突變位點分析

忻蓉 顧春健 婁志武 沈學萍

湖州地區1 814例新生兒耳聾基因篩查及突變位點分析

忻蓉 顧春健 婁志武 沈學萍

目的鉬了解湖州地區新生兒耳聾基因的攜帶率及突變類型。 方法 應用飛行時間質譜技術，對1 814例新生兒進行GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體12SrRNA 4個常見耳聾基因20個熱點突變位點的檢測。 結果 1 814例新生兒中檢測出GJB2基因突變54例（2.98%），SLC26A4基因突變24例（1.32%），GJB3基因突變12例（0.66%），線粒體12SrRNA基因突變2例（0.11%）。結論 在湖州地區無耳聾家族史的新生兒中，GJB2和SLC26A4基因突變率較高，GJB3基因和線粒體12SrRNA基因突變較為少見。

新生兒 耳聾基因 突變

聽力障礙是常見的出生缺陷，位于五大殘疾之首。聽力障礙病因學研究顯示，全球范圍內大約60%的耳聾患者與遺傳因素有關，而遺傳因素導致的聽力損失在兒童聽力損失患者中高達50%甚至60%以上[1]。近年來我國大規模耳聾分子流行病學研究表明，大部分耳聾由為數不多的幾個基因突變引起，如GJB2、SLC26A4、GJB3及線粒體12SrRNA，這為臨床上規模化開展耳聾基因診斷和遺傳咨詢奠定了重要的理論基礎[2]。本研究應用耳聾基因檢測技術，對在我院出生的1 814例新生兒上述4個常見耳聾基因20個熱點突變位點進行了檢測，并對其臨床應用價值作一探討，現報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 2014年2月至2015年6月在湖州市婦幼保健院出生的活產新生兒1 814例，其中男989例，女825例。所有受檢新生兒均由監護人簽署知情同意書。

1.2 方法 采集新生兒臍帶血于特殊濾紙卡，2～8℃條 件下保存并及時送檢。利用飛行時間質譜技術對耳聾基因進行檢測，包括GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體12SrRNA 4個耳聾基因的 20個熱點突變位點。突變位點為GJB2基因的235delC、299_300delAT、35delG、176_191del16、167delT突變，SLC26A4基因的 IVS7-2A＞G、c.2168A＞G、c.1174A＞T、c.1229C＞T、c.1226G＞A、c.2027T＞A、c.2162C＞T、c.281C＞T、c.589G＞A、c. 1975G＞C、IVS15+5G＞A突變，GJB3基因的538C＞T、547G＞A突變，線粒體12SrRNA基因的1494C＞T、1555A＞G突變。

1.3 統計學處理 采用SPSS18.0統計軟件，計數資料以構成比表示，男女新生兒耳聾基因篩查陽性率比較采用χ2檢驗。

2 結果

本組新生兒中92例（5.07%）耳聾基因篩查陽性，其中男新生兒50例（54.35%），女新生兒42例（45.65%），男女新生兒耳聾基因陽性率比較無統計學差異（P＞0.05）。本組新生兒耳聾基因突變位點分布情況見表1，其中幾種常見突變位點類型的基因檢測陽性峰圖見圖1。

表1 1 814例新生兒耳聾基因突變位點分布情況[例（%）]

圖1 幾種常見新生兒耳聾基因突變位點類型的基因檢測陽性峰圖

3 討論

耳聾嚴重影響人類的生活質量，是造成終生殘疾的最主要問題之一。遺傳性聾是繼發于基因或染色體異常等遺傳缺陷導致的聽力障礙[3]。通過基因篩查不僅可以發現遺傳性聾患者，更重要的是發現藥物敏感性和遲發性聾基因攜帶者，從而早期對耳聾患者實施干預和康復，使其聾而不啞；還可對耳聾基因攜帶者進行預警及耳聾防治知識的宣教，有效預防和減少耳聾的發生；并且通過進一步的耳聾遺傳咨詢，可以避免生育聾兒。目前，對新生兒進行普遍的耳聾基因篩查理念正逐漸被人們接受，國內針對新生兒進行的耳聾基因篩查項目越來越多。2011年，王秋菊等[4]報道了針對14 913例中國新生兒耳聾基因檢測，共發現306例攜帶至少1條突變等位基因，突變率為2.05%，遠高于經聽力篩查確認的聽力障礙率0.1%～0.3%。而本組新生兒耳聾基因突變率達5.07%，明顯高于文獻報道，可能與本研究篩查的耳聾基因位點較多有關。

GJB2基因突變是最常見的耳聾基因突變類型，為常染色體隱性遺傳；GJB2基因突變有地域性，在歐美地區突變率比較高的是35delG，地中海地區突變率比較高的是167delT，在我國突變率比較高的是235delC，其次為299_300delAT、176_191del16[5]。本組新生兒GJB2基因突變也集中在這3個位點，未檢測到 35delG、167delT突變。SLC26A4基因突變是引起遺傳性耳聾的第二大原因，為常染色體隱性遺傳；SLC26A4基因與大前庭水管綜合征（EVAS）有關，IVS7-2A＞G突變類型在國人EVAS患者中最常見[6]，本組新生兒該基因也是IVS7-2A＞G突變檢出率最高；及時檢測出SLC26A4基因突變可以指導家長在日常生活中注意患兒的防護，避免一些過度運動、感冒、頭部外傷等因素導致耳聾發生。另外，GJB3和線粒體12SrRNA基因突變率雖然不高，分別為0.66%和0.11%，但它們的臨床意義重大。本組新生兒GJB3 547G＞A雜合突變8例、538C＞T雜合突變4例，這些患兒有發生遲發性聽力損失的可能。因此，即使通過聽力篩查患兒仍需長期監測其聽力情況，觀察聽力變化，盡早發現異常。而線粒體12SrRNA1555A＞G同質突變2例，為致病突變,此基因檢測結果的獲知對新生兒及其家系所有母系成員均起到預警作用，禁止使用氨基糖苷類藥物，避免“一針致聾”的悲劇發生。

值得注意的是，隨著耳聾分子遺傳學的研究進展和越來越多的耳聾基因的發現，耳聾的分子診斷已經應用于臨床。分子檢測結果中存在眾多的不確定性和難以解釋的因素，如某個基因的多態和單一位點的雜合突變，僅有基因檢測的結果不能準確說明新生兒的聽力狀況和預后[7]，需聯合聽力篩查情況綜合分析。對于聽力篩查通過而基因篩查未通過的新生兒要進行進一步的基因診斷、遺傳咨詢以及聽力學監控和隨訪；對于聽力篩查未通過而基因篩查通過的則仍要行進一步的聽力學和基因診斷；對于聽力和基因篩查均通過的進入目前成熟

的聽力篩查流程,但是不排除其它基因導致的遲發性聽力減退的情況。另一方面，不要過度夸大基因篩查的作用和意義，因技術限制和成本效益比的考慮，供篩查的目標突變數量有限，能夠普遍開展的是耳聾易感基因熱點突變位點的篩查,而不是基因診斷[8]。目前基因篩查的費用仍較高，雖然臨床意義較大，但如聽力篩查一樣全面鋪開，仍有一定難度，尤其是在欠發達地區。隨著科學技術不斷進步，筆者相信會有越來越多經濟實用的基因檢測技術應用于臨床，服務于患者。

[1] 韓德民.新生兒聽力及耳聾基因聯合篩查[J].中國醫學文摘耳鼻咽喉科學,2012,27(6):290-292.

[2] Lu Y J,Dai D C,Chen Z B,et al.Molecular screening of patients with nonsyndromic hearing loss from Nanjing city of China[J].J Biomed Res,2011,25(5):309-318.

[3] Drummond M C,Belyantseva I A,Friderici K H,et al.Actin in hair cells and hearing loss[J].Hear Res,2012,288(1-2):89-99．

[4] Wang Q J,Zhao YL,Rao S Q,et al.Newborn hearing concurrent gene screening can improve care for hearing loss:a study on 14,913 Chinese newborns[J].Int J Pediatr Otorhinolaryngol,2011, 75（4）:535-542.

[5] 李磊,楊濤,吳皓,等.耳聾基因的篩查與診斷[J].診斷學理論與實踐, 2010,9(5):409-412.

[6] 張東紅,邱海濤,馬秀嵐,等.新生兒聾病基因GJB2、SLC26A4、線粒體12SrRNA的分子流行病學研究[J].中國醫科大學學報,2010,39(8): 649-651.

[7] 韓冰,李倩,縱亮,等.新生兒聽力及基因聯合篩查臨床實踐及篩查模式研究[J].中華耳科學雜志,2013,11(3):380-383.

[8] 韓冰,王秋菊.新生兒聽力和基因聯合篩查研究現狀[J].中華耳科學雜志,2013,1(2):309-312.

Screening for neonatal deafness-related gene mutation sites

XIN Rong，GU Chunjian,LOU Zhiwu,et al.Department of Otolaryngology,Huzhou Maternal&Child Health Care Hospital,Huzhou 313000,China

【 Abstract】 Objective To screen neonatal deafness-related gene mutation sites. Methods Twenty mutation sites of 4 deafness susceptibility genes(GJB2,SLC26A4,GJB3 and mitochondria 12SrRNA)were examined with time-of-flight mass spectrometer in 1814 newborns from Huzhou area of Zhejiang Province. Results Among 1814 newborns，GJB2,SLC26A4, GJB3 and 12SrRNA mitochondrial gene mutations were detected in 54(2.98%),24(1.32%),12(0.66%)and 2(0.11%)newborns, respectively. Conclusion GJB2 and SLC26A4 gene mutation rates are in newborns without family history of hearing loss in Huzhou area.

Newborns Deafness gene Mutation

2015-07-21）

（本文編輯：李媚）

湖州市科學技術局公益性技術應用研究項目（2014GYB16）

313000 湖州市婦幼保健院耳鼻咽喉科（忻蓉、婁志武），兒科（顧春健），產前診斷中心(沈學萍)

忻蓉，E-mail:xinrong200509@aliyun.com