TTF-1、SPA表達與Ⅱ期肺腺癌患者術后復發及生存關系的研究

呂昕 王悅紅 周建英

TTF-1、SPA表達與Ⅱ期肺腺癌患者術后復發及生存關系的研究

呂昕 王悅紅 周建英

目的 探討甲狀腺轉錄因子-1（TTF-1）、肺表面活性物質A（SPA）的表達與Ⅱ期肺腺癌患者術后復發及生存的相關性。方法 收集經根治手術治療的104例Ⅱ期原發性肺腺癌患者資料，采用免疫組化法綜合染色強度和陽性細胞所占比例進行半定量測定腫瘤組織的TTF-1、SPA表達，分析兩者與患者術后復發及生存的相關性。結果 TTF-1陽性表達患者術后2年復發率較陰性表達患者低[61.2%（60/98）vs 83.3%（5/6）]，術后生存期較長[（26.00±1.89）個月vs（22.00±8.76）個月]，但差異均無統計學意義（均P＞0.05）。SPA陽性表達患者術后2年復發率較陰性表達患者明顯為低[54.8%（34/62）vs 79.2%（19/24）]，術后生存期明顯較長[（30.00±1.41）個月vs（21.00±2.18）個月]，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。結論 SPA陽性表達預示Ⅱ期原發性肺腺癌患者術后2年復發率低，生存期長。TTF-1表達與Ⅱ期肺腺癌患者術后復發及生存有一定的相關性。

肺腺癌 甲狀腺轉錄因子1 表面活性物質蛋白A 復發

可經手術治療的Ⅱ期非小細胞肺癌（NSCLC），尤其是肺腺癌，術后仍有較高的復發率。如何發現并確認一些為數不多的分子標志物，以期來評估預后、預測治療療效一直是研究的熱點。作為肺腺癌的特異性標志蛋白的甲狀腺轉錄因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）已受到廣泛關注，其參與調控表面活性物質A（surfactant protein-A，SPA）表達。目前TTF-1、SPA與肺腺癌患者手術治療預后相關性的研究報道不多。為了評價兩者與Ⅱ期肺腺癌患者術后復發與生存的關系，我們對本院近年來收治的104例患者進行隨訪和研究，現將結果報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 2007年9月至2011年8月在本院接受根治手術治療并符合下述納入標準的原發性肺腺癌患者共104例：（1）手術組織病理診斷明確為原發性肺腺癌；（2）參照UICC/IASLC第7版非小細胞肺癌指南進行術后TNM分期為Ⅱ期；（3）手術治療前未進行化療或放療等抗腫瘤治療；（4）有TTF-1和/或SPA的免疫組化檢測結果記錄。104例患者中，男56例，女48例，年齡35～78(61.23±9.72)歲；末次隨訪時間為2013年8月或術后60個月或出現死亡終點事件。術后復發判斷均經影像學檢查證實。

1.2 TTF-1、SPA表達檢測 采用免疫組化SP法測定肺腺癌組織標本中TTF-1、SPA的表達。由兩位高年資的病理科醫師對免疫組化結果進行核實。TTF-1以細胞核染為棕黃色或棕褐色為陽性細胞（圖1），SPA以細胞質出現棕黃色顆粒為陽性細胞（圖2）。每個切片隨機觀察5個高倍視野，按陽性細胞百分比以及染色的強弱兩部分來判讀結果，陽性細胞≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分；染色程度無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；兩項指標的評分相乘，0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），4～6分為中度陽性(++)，7～9分為強陽性（+++）。0～1分判為陰性組，2～9分判為陽性組。104例手術標本均進行了TTF-1檢測，86例同時有SPA檢測結果。

圖1 肺腺癌TTF-1陽性（免疫組化SP法，×100）

圖2 肺腺癌SPA陽性（免疫組化SP法，×100）

1.3 統計學處理 采用SPSS 17.0統計軟件，計量資料以表示，組間比較采用t檢驗；率的比較采用χ2檢驗；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，單因素分析采用log-rank檢驗，多因素分析采用Cox比例風險回歸模型進行。

2 結果

2.1 不同TTF-1、SPA表達患者術后復發率的比較 104例患者中TTF-1表達陽性98例（94.2%），86例有SPA檢測結果的患者中，SPA表達陽性62例（72.1%）。72例（69.2%）完成術后輔助化療2～6個周期，方案均為聯合鉑類兩藥化療（Pemetrexed、Gemcitabine、Docetaxel等）。104例患者中，65例（62.5%）術后2年內復發，其中TTF-1陽性組復發率為61.2%（60/98），TTF-1陰性組復發率為83.3%（5/6），兩組復發率的差異無統計學意義（連續校正χ2=0.424，P＞0.05）。86例有SPA檢測結果的患者中53例（61.6%）術后2年內復發，其中SPA陽性組復發率為54.8%（34/62），SPA陰性組復發率為79.2%（19/24），兩組復發率的差異有統計學意義（χ2= 4.330，P＜0.05）。

2.2 不同TTF-1、SPA表達的術后復發患者術后生存期比較 65例術后復發患者中男36例，女29例，年齡35～76（62.80±8.80）歲；術后生存時間為4～54個月。其中55例患者隨訪至死亡終點，有完整生存資料。TTF-1陽性組生存時間為（26.00±1.89）個月，TTF-1陰性組為（22.00±8.76）個月，兩組的差異無統計學意義（χ2= 1.516，P＞0.05）。SPA陽性組生存時間為（30.00±1.41）個月，SPA陰性組為（21.00±2.18）個月，兩組的差異有統計學意義（χ2=12.087，P＜0.05）。

2.3 不同TTF-1、SPA表達的術后復發患者生存分析 不同TTF-1表達的術后復發患者的生存曲線見圖3，不同SPA表達的術后復發患者的生存曲線見圖4。

圖3 不同TTF-1表達的術后復發患者的生存曲線

圖4 不同SPA表達的術后復發患者的生存曲線

由圖3可見，TTF-1陰性組生存曲線較TTF-1陽性組下移，但兩組比較差異無統計學意義（χ2=1.516，P＞0.05）；由圖4可見，SPA陰性組生存曲線明顯降低，兩組比較差異有統計學意義（χ2=12.087，P＜0.05）。在調整了年齡、性別、腫瘤大小和N分期等病理特征后，Cox比例風險回歸模型分析顯示，SPA陰性表達是預后不良的預測因素。

3 討論

TTF-1也稱為NKX2.1，主要存在于肺泡Ⅱ型上皮細胞以及Clara細胞中，參與調控SPA、SPB的表達，在甲狀腺、肺、前腦的發育過程中發揮重要作用。目前，在臨床上已將其作為肺腺癌組織特異性標志蛋白，用于鑒別肺腺癌與鱗癌，以及原發性與轉移性肺癌[1-2]，大部分（70%～100%）原發性肺腺癌中TTF-1表達陽性，本組患者TTF-1陽性表達率為94.2%。

已有研究發現TTF-1與NSCLC預后相關，但無明確定性[3-4]，但大部分研究傾向于TTF-1陽性表達是NSCLC患者有利的預后因素[4-5]。有4項研究發現，早期NSCLC患者TTF-1染色與肺腺癌較長生存期相關[6-9]。Barlési等[10]分析了106例Ⅰ～Ⅳ期肺腺癌患者的資料后發現，TTF-1強陽性與總生存期密切相關。本研究中，TTF-1陽性表達患者復發率低于TTF-1陰性表達患者（61.2%vs83.3%），生存期長也長于后者[（26.00±1.89）個月vs（22.00±8.76）個月]，雖然差異無統計學意義（可能本研究樣本數較少之故），但似有一定的趨勢。關于TTF-1表達與肺癌生存期關系的機制尚不清楚，基礎研究顯示，TTF-1的轉錄靶向因子肌球蛋白結合蛋白能抑制Rock1基因并且負向調節肌動球蛋白的結構，減少單個細胞的游動，增加集體細胞的遷移，最終減少細胞的侵襲力和轉移[11]。也有研究顯示，TTF-1能抑制Ki-67的表達，并且誘導細胞調亡[12]。

SPA是肺呼吸上皮細胞分泌的一種糖蛋白，屬于膠凝素家族的重要成員，參與維持肺表面活性物質功能及調節免疫功能等，也是臨床診斷腺癌的特異性標志物，與腫瘤分化程度相關[2]。Jiang等[13]的研究表明，Ⅰ期NSCLC患者SPA低表達提示術后復發時間短，預后差。Tsutsumida等[14]的研究顯示，SPA低表達的微乳頭腺癌預后差。本研究結果顯示，SPA陽性表達患者復發率明顯低于SPA陰性表達患者（54.8%vs79.2%），差異有統計學意義。術后復發患者的生存分析同樣顯示SPA陽性表達患者較SPA陰性表達患者生存期長[（30.00± 1.41）個月vs（21.00±2.18）個月]。因此，SPA可作為Ⅱ期術后肺腺癌患者預后良好的指標。但關于SPA表達與生存期相關的具體機制有待進一步研究。

有文獻報道肺癌患者的局部復發多發生在術后2年內，本研究結果顯示：Ⅱ期肺腺癌術后2年內復發率在60%左右。這可能與納入本研究的患者中30.8%未行術后輔助化療有關。Ⅱ期肺腺癌患者較高的術后復發率應引起臨床醫師的高度關注。TTF-1、SPA表達陰性患者傾向于更高的術后2年復發率和較短的術后復發生存時間，應密切隨訪處理，以便為患者爭取到更多的生存時間。由于本研究樣本量較小，上述結論還需要進一步擴大樣本數進行前瞻性研究來驗證。

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Correlation between expression of TTF-1 and SPA and the recurrence and prognosis in postoperative stageⅡlung adenocarcinomas

LV Xin,WANG Yuehong,ZHOU Jianying.
Department of Respiratory,the First Affiliated Hospital,Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310003,China

Objective To investigate the correlation between exp ression of thyroid transcrip tion factor-1 and surfactant p rotein-A in tumor tissues and the recurrence and p rognosis in postoperative stageⅡlung adenocarcinomas.Methods A totalof 104 stageⅡlung adenocarcinoma patients after rad ical operation were analyzed.Exp ression TTF-1 and SPA in Tumor tissues were analyzed by immunohistochem istry,inc luding staining intensity and percentage of positive cells.Afterwards we evaluateed the correlation between both of them and the recurrence rate of postoperation and the survival time.Results Patients w ith positive TTF-1 exp ression had lower 2-year recurrence rate than the negative ones[61.2%（60/98)vs 83.3%(5/6）]and had longer survivalbenefits(26.00±1.89mo vs 22.00±8.76mo),butboth of the difference were notstatistically significant(P＞0.05). Patients w ith positive SPA exp ression significantly had lower 2-year recurrence rate than the negative ones[54.8%(34/62)vs 79.2%(19/24)]and had much longer survivalbenefits(30.00±1.41mo vs 21.00±2.18mo).Both of the difference were statistically significant(P＜0.05).Conclusion For the postoperative stageⅡlung adenocarcinomas,the patients w ith positive SPA exp ression had the lower 2-year recurrence rate and longer suvival time.Also there was a certain correlation between exp ression of TTF-1 and the recurrence and survivalin postoperative stageⅡlung adenocarcinomas.

Lung adenocarcinoma Thyroid transc rip tion factor-1 Surfactantp rotein-A Recurrence

2013-08-15）

（本文編輯：沈叔洪）

浙江省衛生廳科研基金（2013KYB187）；浙江省中醫藥管理局科研基金（2013ZQ 014）

310003杭州，浙江大學醫學院附屬第一醫院呼吸內科（呂昕系在職碩士研究生，現在浙江中醫藥大學附屬第一醫院工作）

周建英E-mail：zjyhz@zju.edu.cn