杜仲葉提取物滴丸質(zhì)量控制及穩(wěn)定性考察＊

王柏強(qiáng)，劉 福，江承平，何效平，曾芝蘭

(1. 川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，四川 南充 637000; 2. 川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川 南充 637000)

杜仲葉提取物滴丸是將杜仲葉經(jīng)提取、純化后再利用固體分散技術(shù)制備的滴丸制劑[1]，是《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第11 冊(cè))》收載的杜仲平壓片[2]的改劑型品種，具有服用劑量小、速效、攜帶方便等優(yōu)點(diǎn)，能降血壓、強(qiáng)筋健骨，主要用于高血壓、頭暈?zāi)垦！⒀ニ嵬础⒔罟丘糗浀茸C[3]。為了有效地控制該制劑質(zhì)量，保證臨床療效，本試驗(yàn)中采用薄層色譜(TLC)法對(duì)制劑中的綠原酸進(jìn)行了定性鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)制劑中綠原酸進(jìn)行了含量測(cè)定，并對(duì)其在室溫和加速條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察[4]。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

SPD-10A 型高效液相色譜儀(日本島津公司);SPD-10A 型紫外檢測(cè)器(日本島津);溶劑過濾器(大連依利特科學(xué)儀器有限公司);SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵(鞏義市英峪予華儀器廠);TP-114 型電子分析天平(德國(guó)賽多利斯股份有限公司);760CRT 型雙光束可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)。綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0753 -200111);杜仲葉提取物滴丸(自制，批號(hào)分別為050926，050927，050928);乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

取杜仲葉對(duì)照藥材1 g，加50%甲醇25 mL，于50 ℃超聲提取1 h，放冷，濾過，濾液作為對(duì)照藥材溶液。稱取綠原酸對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。取20 粒杜仲葉提取物滴丸研細(xì)，稱取約0.2 g，加50%甲醇5 mL 溶解，作為供試品溶液。照2010 年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB 薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各10 μL、對(duì)照品溶液5 μL，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水(7 ∶2.5 ∶2.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下檢視[5]。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)(見圖1)。

2.2 綠原酸含量測(cè)定

2.2.1 溶液制備

稱取干燥至恒重的綠原酸對(duì)照品約25 mg，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取溶液12.5 mL，置50 mL 棕色容量瓶中，加50%甲醇液稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液，避光低溫保存。取20 粒滴丸，研細(xì)，稱取約40 mg，精密稱定，置25 mL 容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。取適量不含藥的空白滴丸，加50%甲醇溶解并用0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得陰性對(duì)照品溶液。

2.2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Hypersic C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.4% 磷酸溶液(13 ∶87);流速:1.0 mL /min;檢測(cè)波長(zhǎng):327 nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:20 μL。在此色譜條件下的色譜圖見圖2。可見，陰性對(duì)照品溶液不干擾測(cè)定，供試品溶液色譜與對(duì)照品溶液色譜上保留時(shí)間一致的峰可確定為綠原酸峰，保留時(shí)間約9 min，理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品溶液0，1，3，5，8，10 mL，置10 mL 容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，各取續(xù)濾液20 μL 注入高效液相色譜儀，重復(fù)3 次，記錄色譜圖，計(jì)算平均峰面積。以平均峰面積值(A)對(duì)進(jìn)樣質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=31 860 C+27 633，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，綠原酸質(zhì)量濃度在1.3 ～130 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液20 μL，連續(xù)測(cè)定5次，記錄峰面積值。結(jié)果的RSD 為0.94% ( n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液20 μL，于0，2，4，6，8 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD 為1.33% ( n=5)，表明供試品溶液在8 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品5 份，依法制備供試品溶液，并按擬訂方法測(cè)定。結(jié)果平均含量為每丸0.263 mg，RSD 為0.71%(n=5)，表明方法的重復(fù)性良好。

圖1 薄層色譜圖

圖2 高效液相色譜圖

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的綠原酸滴丸20 粒，研細(xì)，取細(xì)粉約40 mg，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，分別精密加入綠原酸對(duì)照品溶液6.0，3.2，1.0 mL，按供試品溶液制備方法操作，并量取續(xù)濾液20 μL，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取3 批杜仲葉提取物滴丸，制備供試液，按擬訂方法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中綠原酸含量。結(jié)果3 批樣品每丸含綠原酸量分別為0.256，0.260，0.263 mg。

2.3 穩(wěn)定性考察[6 -7]

取模擬上市包裝中試樣品3 批進(jìn)行加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)。加速試驗(yàn)條件為溫度(40 ±2)℃、相對(duì)濕度(75 ±5)%(氯化鈉飽和溶液)，放置6 個(gè)月，分別于第0，1，2，3，6 個(gè)月取樣。長(zhǎng)期試驗(yàn)條件為溫度(25 ±2)℃、相對(duì)濕度(60±10)%(亞硝酸鈉飽和溶液)，放置12 個(gè)月，分別于第0，3，6，9，12 個(gè)月取樣。結(jié)果在加速試驗(yàn)及長(zhǎng)期試驗(yàn)條件下，滴丸性狀均為棕褐色圓球，無明顯變化，溶散時(shí)限及含量見表2。可見，制劑中綠原酸含量雖有所下降，但均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。

表2 加速試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

采用薄層色譜法對(duì)杜仲葉提取物滴丸中杜仲葉進(jìn)行定性鑒別，在薄層色譜中能檢出綠原酸的特征斑點(diǎn)，斑點(diǎn)分離清晰，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可作為杜仲葉提取物滴丸制劑的有效鑒別方法。

采用HPLC 法測(cè)定制劑中綠原酸時(shí)，比較了不同比例的甲醇-水、甲醇-0.4%磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-0.4%磷酸溶液等流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果以乙腈-0.4%磷酸溶液(13 ∶87)為流動(dòng)相，不僅峰形良好，且保留時(shí)間適中，并具有良好的重復(fù)性。

在滴丸穩(wěn)定性試驗(yàn)中，除對(duì)性狀、溶散時(shí)限、含量測(cè)定進(jìn)行了考察外，還分別進(jìn)行了薄層鑒別、微生物限度等檢查，結(jié)果均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

[1] 王柏強(qiáng)，劉 福，江承平，等. 正交試驗(yàn)優(yōu)選杜仲葉滴丸成型工藝[J].中國(guó)藥房，2012，23(7):616 -618.

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[7] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M]:北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄199.