血尿康膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1 含量測定

李冬云，李霞莉

(1. 陜西省西安市雁塔區中醫醫院，陜西 西安 710061; 2. 清華德人西安幸福制藥有限公司，陜西 西安 710043)

血尿康膠囊為醫院制劑，由三七、地黃、發酵蟲草菌粉(Cs-4)、墨旱蓮、琥珀、白及等組方，主治慢性腎炎或其他各種腎病引起的以腎小球源性血尿為主的疾病，方中三七為主藥，人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1是三七的主要化學成分或特征成分。該藥臨床療效顯著，但原標準無定量檢測方法。為提高該制劑的質量標準，本研究中應用高效液相色譜(HPLC)法對血尿康膠囊中上述3 種成分的含量進行了測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

日立L-2000 型液相色譜儀，D2000 型色譜工作站(日本日立公司);AG285 型電子天平(梅特勒公司);KQ-100DE 型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。人參皂苷Rg1對照品(批號為110703-200711)，人參皂苷Rb1對照品(批號為110704-200623)，三七皂苷R1對照品(批號為110745-200725)，均由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用;血尿康膠囊(西安同濟醫院，批號分別為121003，121005，121008，121101，121102，121104);乙腈(TEDA 公司)為色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-水溶液，梯度洗脫見表1;流速:1.0 mL /min;柱溫:25 ℃;檢測波長:203 nm;進樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1對照品適量，用甲醇溶解并制成每1 mL 分別含0.4 mg 人參皂苷Rb1、0.4 mg 人參皂苷Rg1和0.1 mg 三七皂苷R1的對照品溶液。取本品膠囊10 粒，倒出內容物，混勻，取2.25 g，精密稱定，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，超聲處理(250 W，頻率50 kHz)30 min，取出，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液[2]。按處方比例稱取除三七外的原料，按成品工藝法制備缺三七的空白制劑，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:按擬訂色譜條件，分別對供試品溶液、對照品溶液和陰性對照品溶液進行分析。結果，陰性對照品溶液在與對照品溶液相同位置上，無相應色譜峰出現(見圖1)，表明陰性對照無干擾。

線性關系考察:精密稱取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1對照品適量，用甲醇溶解并制成每1 mL 分別含0.450 2 mg人參皂苷Rg1、0.404 8 mg 人參皂苷Rb1和0.099 8 mg 三七皂苷R1的對照品溶液，分別精密吸取各對照品溶液2，4，8，12，16，20 μL，按擬訂色譜條件進樣測定峰面積，以進樣量(X)為橫坐標、峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程，人參皂苷Rg1為Y=289.22 X+2.21，r=0.999 7(n=6)，進樣量線性范圍為0.900 4 ～9.004 μg;人參皂苷Rb1為 Y =215.4 X -3.21，r=0.999 7(n=6)，進樣量線性范圍為0.809 6 ～8.096 μg;三七皂苷R1為Y=270.04 X-7.1，r=0.999 9(n=6)，進樣量線性范圍為0.199 6 ～1.996 μg。

表1 流動相梯度洗脫表

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:取同一供試品溶液，重復進樣6 次。結果峰面積的RSD 人參皂苷Rg1為1.51%(n=6)，人參皂苷Rb1為1.43%(n=6)，三七皂苷R1為1.23%(n=6)，表明該方法精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品(批號為121003)6 份，每份1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定含量。結果三七總皂苷含量平均值為14.6 mg/g，RSD 為0.89%(n=6)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，于室溫下放置0，4，12，24，48 h后，分別進樣10 μL，按擬訂色譜條件進樣測定。結果供試品溶液在48h 內峰面積積分值的變化是由測定誤差引起，測定誤差的RSD＜2%，符合定量分析要求，說明供試品溶液在48 h 內基本穩定。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為121003，含三七皂苷R11.458 mg/g，人參皂苷Rg16.905 mg/g、人參皂苷Rb16.302 mg/g)0.6 g，共9 份，每3 份樣品為1 組，共3 組，置具塞錐形瓶中，每組分別加入含三七皂苷R1(0.099 8 g/L)、人參皂苷Rg1(0.450 2 g/L)人參皂苷Rb1(0.404 8 g/L)對照品甲醇溶液8，10，12 mL，照2.2 項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率，結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取6 批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定含量，結果見表3。

3 討論

血尿康膠囊中三七為君藥，故對其含量進行控制可以更好地保證臨床療效。

參照2010 年版《中國藥典(一部)》中三七的含量測定方法及相關文獻，初步確定了相關的色譜條件并進行試驗，結果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1能與雜質很好分離，且陰性樣品無干擾，分離效果滿意。

2010 年版《中國藥典(一部)》中，樣品提取采用的是回流提取，經查閱有關資料，超聲提取效果與回流提取相當，同時雜質峰較回流提取少，且省時省力。在試驗過程中對該品種提取的超聲時間進行了比對，發現超聲提取30 min 后，提取物含量變化不大，故確定提取時間為30 min。

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄Ⅱ.

[2] 程 靜，梅 群，何繼祥，等.HPLC 梯度洗脫法同時測定紫丹活血片中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量[J]. 中成藥，2008，30(6):864 -868.