γ-亞麻酸甲酯納米乳的制備及質量評價

郭義明，孫 錄，戴維群，李 忻

(吉林大學中日聯誼醫院，吉林 長春 130033)

γ-亞麻酸(全順式6，9，12 - 十八碳三烯酸)具有調節血脂、抗血栓、抗脂質過氧化以及增強人體免疫功能等重要的生理活性，直接參與體內一系列代謝和生理合成過程，有獨特的醫療和保健作用[1-2]，因此通常被制成高純度的γ-亞麻酸甲酯(Gamma-linolenic acid methyl ester，GLA)及適宜的制劑以保存和應用。目前，臨床使用的含γ-亞麻酸制劑以口服的月見草油膠丸、月見草油乳、月見草油軟膠囊為主，其中γ-亞麻酸含量低，需要劑量比較大，生物利用度低。納米乳是膠體分散系統，由油相、水相和表面活性劑組成的熱力學穩定體系，能提高難溶藥物的溶解度，粒徑小，能促進藥物吸收，提高藥物生物利用度。隨著納米乳化技術日趨成熟，納米乳在藥學領域中的應用日益廣泛[3-5]。筆者以γ-亞麻酸甲酯作油相，蒸餾水作水相、聚山梨酯80 為表面活性劑、聚乙二醇400 為助表面活性劑制備了水包油型γ-亞麻酸甲酯納米乳，分析了影響納米乳粒徑的因素，并對其結構、形態、分散性和穩定性等進行評價，以期尋找γ-亞麻酸甲酯的一種安全、穩定、高效的用藥系統，為研究γ-亞麻酸注射劑提供理論依據。

1 儀器與材料

FA25 型分散乳化機(上海弗魯克機電設備有限公司);Zetasizer3000HSA 型激光粒度分析儀(英國MALVERN 公司);Hitachi8100IV 型透射電子顯微鏡(TEM，日本Hitachi 公司);FTIR8400S 型紅外光譜儀(IR，日本SHIMADZU 公司);HP5890 -II 型氣相色譜儀(美國HP 公司)。γ-亞麻酸甲酯(參照文獻[5]合成，含量98.7%);聚山梨酯80(Tween 80，上海申宇醫藥化工有限公司);聚乙二醇400(PEG400，上海三浦化學試劑公司)。

2 方法與結果

2.1 制備[6]

以聚山梨酯80 作表面活性劑，PEG400 作助表面活性劑，γ-亞麻酸甲酯為油相，蒸餾水為水相，將聚山梨酯80 與γ-亞麻酸甲酯分別按質量比1 ∶10，2 ∶10，3 ∶10，4 ∶10，5 ∶10，6 ∶10，7 ∶10，8 ∶10，9 ∶10 混合，并加入PEG400(聚山梨酯80 與PEG400 質量比為5 ∶1)混勻，室溫下將混合液加入到分散乳化機攪拌下的水相中，水相逐漸變成乳白色，繼續攪拌20 min 后變成透明的水包油型γ-亞麻酸甲酯納米乳，用激光粒度分析儀測定粒徑，結果見圖1。聚山梨酯80 的含量對納米乳的粒徑有顯著影響，當γ-亞麻酸甲酯在乳液中含量為25%，聚山梨酯80 與γ-亞麻酸甲酯重量比為5 ∶10 時，得到了粒徑小于100 nm 的γ-亞麻酸甲酯納米乳。

圖1 聚山梨酯80 對納米乳粒徑的影響

2.2 結構分析

在4 000 ～400 cm-1波長范圍內，用溴化鉀壓片法測定γ-亞麻酸甲酯和γ-亞麻酸甲酯納米乳的紅外光譜，結果見圖2。γ-亞麻酸甲酯的紅外光譜(IR)圖2 顯示，在3 500 ～3 200 cm-1范圍內的強峰屬于羥基和分子內氫鍵結合峰;在1 740 cm-1的特征強吸收屬于酯羰基官能團;在1 170 cm-1處的吸收峰屬于羰基甲酯官能團;在2 800 ～3 000 cm-1的3 個尖峰和1 500 cm-1附近的尖銳峰帶是由于烴鏈的C—H 伸展產生的。紅外光譜在715 cm-1和1 620 cm-1處的特征吸收帶表明了雙鍵的存在。上述特征吸收峰在γ -亞麻酸甲酯納米乳的IR 圖2 中均能觀察到。在1 245 cm-1和940 cm-1處的吸收峰是由于聚山梨酯80 存在而產生的，可歸于C—O—C 的對稱帶和不對稱帶引起的伸縮震動。IR圖譜證明，乳化后γ-亞麻酸甲酯的特征吸收峰沒有發生任何移動，表明γ-亞麻酸甲酯沒有發生化學結構變化。

圖2 紅外光譜圖

2.3 形態觀察

將γ-亞麻酸甲酯納米乳室溫下放置6 個月，用透射電子顯微鏡觀察γ-亞麻酸甲酯納米乳的形貌，結果見圖3。可見，納米乳液滴呈球形，平均直徑約為60 nm。

圖3 γ-亞麻酸甲酯納米乳透射電鏡圖

2.4 穩定性

將γ-亞麻酸甲酯納米乳室溫下放置6 個月，外觀、粒徑均無明顯變化，置離心機中，以10 000 r/min 的速度離心30 min 進行加速實驗，溶液沒有相分離發生。用氣相色譜法測定納米乳中的γ-亞麻酸甲酯含量[7]，結果未發生明顯變化，表明將γ-亞麻酸甲酯制成納米乳后質量穩定，納米乳載體能保持γ-亞麻酸甲酯的穩定性。

2.5 分散性

用激光粒度分析儀分別測定新鮮制備及室溫貯存6 個月的γ-亞麻酸甲酯納米乳粒徑，粒徑分布見圖4。結果貯存6 個月的γ-亞麻酸甲酯納米乳粒子粒徑分布雖有微弱變化，但依然介于40 ～100 nm 之間，有很好的分散性，平均粒徑約60 nm。

圖4 γ-亞麻酸甲酯納米乳粒徑分布圖

3 討論

γ-亞麻酸中含有3 個不飽和雙鍵，對熱敏感、容易氧化、在堿性條件下易發生雙鍵位置及構型異構化反應，形成共軛多烯酸，失去生理活性。故制備時應選擇在室溫下進行。留樣試驗結果表明，水包油型γ-亞麻酸甲酯納米乳室溫貯存6 個月后各項檢查指標未發生明顯變化。

納米乳制備工藝是由納米乳的微觀結構和特有的理化性質決定的，與表面活性劑類型、油相的性質及藥物的油水分配系數等因素有關，本試驗中表面活性劑聚山梨酯80 的用量對載藥量影響最明顯，乳滴的粒徑及其分布也取決于聚山梨酯80 的用量。PEG400 做助表面活性劑有助于納米乳的自發形成。

γ-亞麻酸甲酯納米乳的制備為γ-亞麻酸的應用開拓了新的途徑，基于本試驗結果可以認為，這種納米乳系統可以無須化學修飾而用于制備γ-亞麻酸甲酯的非腸道給藥注射劑型。

[1] 喬 冬，龐廣昌，李 楊. γ-亞麻酸對小鼠免疫系統的調節作用[J].食品科學，2011，32(21):254 -259.

[2] 周同永，任 飛，鄧 黎，等. γ -亞麻酸及其生理生化功能研究進展[J]. 貴州農業科學，2011，39(3) :53 -58.

[3] 李艷萍，張志榮. 納米乳的研究進展及其應用[J]. 華西藥學雜志，2010，25(4): 485 -488.

[4] 李 蔚，王春洪. 自微乳及其在中藥制劑中的應用[J]. 中國藥業，2012，21(6):94 -96.

[5] 郭義明，王 虹，郭 宇.γ-亞麻酸乙酯的合成研究[J]. 中國生化藥物雜志，2004，25(2):88 -90.

[6] 黨 慶，魏希穎. 連翹種子油納米乳的制備及體外評價[J]. 藥物生物技術，2011，18(2)：155 -159.

[7] 劉春靜，陳月坤，劉榮榮，等. 月見草油γ -亞麻酸絕對含量的測定[J]. 中國油脂，2012，37(1)：69 -71.