細辛炮制前后的藥效學及毒理學研究

王 雪 李連坤 張彥飛 貢濟宇 蔡廣知 趙躍剛

吉林省長春中醫藥大學，吉林長春 130117

細辛為馬兜鈴科植物北細辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidt var. maudshuricum（Maxim.）Kitag.、漢城細辛A. sieboldii Miq. var. seouleuse Na-kai 或華細辛A.sieboldii Miq.的干燥根及根莖[1]。 細辛性溫味辛，具有祛風止痛、解表散寒、通竅、溫肺化飲的功效，主要用于治療風寒感冒、頭痛、風濕痹痛、痰飲喘咳[2]。現代藥理學研究證明細辛具有抗炎鎮痛作用[3]，臨床上常用于治療頭痛、坐骨神經痛、牙痛和類風濕性關節炎等疾病[4]。 現代研究表明馬兜鈴科植物大多含有馬兜鈴酸[5]。 馬兜鈴酸對人體有腎毒作用，因此，降低細辛中馬兜鈴酸的含量并保證其藥效已成為現代中藥研究的重點內容，藥材炮制對細辛的藥效有無影響也是研究的重點內容。 本實驗就以上問題進行相關研究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

ICR 小鼠，SP 級，雌雄各半，平均體重為（20±2）g，由吉林大學實驗中心提供， 許可證號：SCXK11-00-0009。 動物均飼養于溫度（22±1）℃，相對濕度（60±5）%的標準環境中，人工光照，12 h 明暗周期，給予標準小鼠鼠糧飼養。

1.2 試藥與制備

選取吉林省的北細辛，經長春中醫藥大學藥物分析實驗室人員（蔡廣知，中級）鑒定后，細辛品質優良，屬馬兜鈴科植物北細辛。

藥物制備：生品和炮制品（采用碳酸氫鈉堿制后的炮制品）均以8 倍量水浸泡30 min，煎煮至沸騰后再持續加熱30 min，將水煎液倒出，藥渣繼續以6 倍量水煎煮，方法同上[6]。合并2 次提取液后并濃縮至每毫升含生藥21.3 g，得到兩者的水煎液。

1.3 試劑

0.9%氯化鈉注射液（生理鹽水，浙江美森進出口有限公司，批號：639003），阿司匹林腸溶片（貴州同濟堂制藥有限公司，批號：080411），醋酸（北京化工廠，批號：20071015），二甲苯（北京化工廠，批號：20061209）。

1.4 儀器

YLS26 B 智能熱板儀，YLS2 Q4 耳腫打孔器（山東省醫學科學院設備站），AB135-S 電子天平（梅特勒-托利多公司）。

1.5 方法

1.5.1 醋酸扭體實驗 取ICR 小鼠，按雌雄各半，將小鼠隨機分為6 組，每組10 只。生理鹽水組（20 mL/kg），阿司匹林組（0.02 g/kg），細辛生品和炮制品的水煎液高、低劑量組（生藥量3.0、0.5 g/kg），預實驗結果顯示增加劑量并不能顯著提高細辛抗炎鎮痛作用，因此選擇3.0 g/kg 為高劑量組。 實驗前小鼠禁食12 h，各組小鼠采取灌胃給藥，一次性給予生理鹽水、阿司匹林、細辛生品水煎液、細辛炮制品水煎液[7-9]，給藥2 h 后腹腔注射0.6%醋酸0.2 mL。 記錄小鼠初次出現醋酸樣疼痛反應時間（疼痛潛伏期）以及10 min 內的扭體次數作為疼痛反應的指標。

1.5.2 熱板實驗 調節熱板溫度至55℃， 以小鼠舔后足、跳躍反應為觀察指標，記錄小鼠自放入熱板儀到初次出現舔后足的時間，以此作為小鼠的痛閾值[6]。選擇痛閾值在6～60 s 范圍內的小鼠作為實驗動物使用。 將小鼠按痛閾值分別分到上述各組，給藥方案及給藥劑量同“1.5.1”，各組于給藥后1、2 h 記錄小鼠的足腫脹度。

1.5.3 二甲苯致耳廓腫脹實驗 選取實驗用ICR 小鼠，雌雄各半，隨機分組，每組10 只。分組情況、給藥方法和給藥劑量同“1.5.1”。 各組動物于給藥40 min 后，在小鼠右耳廓內外各涂30 μL 二甲苯致炎， 于給藥后15 min 處死小鼠并剪下雙耳，用直徑6 mm 的打孔器打下左右等大的耳片稱重。 記錄稱重數據，左耳重量作自身對照， 以左右耳片重量之差作為炎癥的腫脹度。耳廓腫脹度（mg）=右耳片質量-左耳片質量。炎癥抑制率=（生理鹽水組耳廓腫脹度-用藥組耳廓腫脹度）/生理鹽水組耳廓腫脹度×100%。

1.5.4 急性毒性實驗 選取實驗用小鼠，于實驗前14 h禁食，不禁水，隨機分為正常組和對照組，細辛生品水煎 液84.34、112.50、150.13、200.40、267.20 g/（kg·d）（分 別 相 當 于 臨 床 日 用 劑 量 的9.38、12.40、16.80、22.20、29.80 倍）5 個不同劑量組和細辛炮制品水煎液474.70、632.83、843.76、1125.10、1500.30 g/（kg·d）（分別 相 當 于 臨 床 日 用 劑 量 的52.74、70.50、93.60、125.10、166.60 倍）5 個不同劑量組[10]，雌雄各半，每組10 只。 分別于每天上、下午分次灌胃給藥，間隔6 h，給藥40 mL/（kg·次），連續給藥7 d，觀察給藥后7 d內小鼠的狀態、死亡情況以及死亡分布時間。 解剖死亡動物，觀察內部臟器變化[11]。

1.6 統計學方法

采用SPSS 16.0 統計軟件對數據進行分析和處理，計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用單因素方差分析或重復測量的方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t 檢驗，以P ＜0.05 為差異有統計學意義。 小鼠急性毒性LD50實驗采用概率單位法計算。

2 結果

2.1 細辛炮制前后水煎液對藥效學的影響

2.1.1 對小鼠醋酸扭體實驗的影響 與生理鹽水組比較，其他5 組小鼠疼痛潛伏期均延長，扭體次數均減少，差異有統計學意義（P ＜0.05 或P ＜0.01）。細辛生品水煎液高劑量組扭體次數多于炮制品水煎液高劑量組，差異有統計學意義（P ＜0.05）。 見表1。2.1.2 對小鼠熱板實驗的影響 與生理鹽水組比較，其他5 組小鼠足腫脹度均降低，差異有統計學意義（P ＜0.05 或P ＜0.01）。 細辛生品水煎液高劑量組給藥后1、2 h 足腫脹度高于細辛炮制品水煎液高劑量組，差異有統計學意義（P ＜0.05）。 見表2。

表1 細辛炮制前后水煎液對小鼠醋酸扭體實驗的影響（±s，n = 10）

表1 細辛炮制前后水煎液對小鼠醋酸扭體實驗的影響（±s，n = 10）

注：與生理鹽水組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01；與細辛生品水煎液高劑量組比較，△P ＜0.05

組別 疼痛潛伏期（s） 扭體次數（次）生理鹽水組阿司匹林組細辛生品水煎液低劑量組細辛生品水煎液高劑量組細辛炮制品水煎液低劑量組細辛炮制品水煎液高劑量組286.20±114.70 810.20±210.40**317.80±116.60*356.50±101.50*328.10±150.60*394.70±172.40*19.51±2.32 5.31±2.18**14.91±2.03*11.01±2.83*13.11±2.54*8.71±2.04**△

表2 細辛炮制前后水煎液對小鼠熱板實驗的影響（mg，±s，n = 10）

表2 細辛炮制前后水煎液對小鼠熱板實驗的影響（mg，±s，n = 10）

注：與生理鹽水組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01；與細辛生品水煎液高劑量組比較，△P ＜0.05

組別 給藥后1 h 足腫脹度 給藥后2 h 足腫脹度生理鹽水組阿司匹林組細辛生品水煎液低劑量組細辛生品水煎液高劑量組細辛炮制品水煎液低劑量組細辛炮制品水煎液高劑量組25.00±8.23 8.00±2.16**18.00±2.56*13.00±1.86**17.00±1.91*9.00±1.99**△28.00±5.86 9.00±1.77**19.00±1.80*14.00±2.30**18.00±1.79*10.00±2.30**△

2.1.3 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗的影響 與生理鹽水組比較，其他5 組小鼠耳廓腫脹度均降低，差異有統計學意義（P ＜0.05 或P ＜0.01）。 細辛生品水煎液低劑量組耳廓腫脹度高于細辛炮制品水煎液低劑量組，差異有統計學意義（P ＜0.05）。 細辛生品水煎液低劑量組炎癥抑制率低于細辛炮制品水煎液低劑量組（P＜0.05）。 見表3。

表3 細辛炮制前后水煎液對二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗的影響（n=10）

2.2 對毒理學的影響

細辛生品水煎液的LD50為145.45 g/kg，其95%置信區間為128.50～166.75 g/kg；細辛炮制品水煎液的LD50為846.16 g/kg，其95%置信區間為707.19～1012.39 g/kg，細辛生品水提物的毒性是炮制品的5.82 倍， 提示細辛生品炮制后毒性顯著降低。給藥后第4 天小鼠集中死亡。解剖后，可觀察到小鼠的腎臟明顯腫大，并伴有白色，其他器官無明顯變化，腎毒性明顯。

3 討論

本文通過醋酸扭體實驗、熱板實驗以及二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗研究細辛炮制前后的藥效學，結果表明，炮制后的細辛可顯著提高小鼠的痛閾值[12-14]，鎮痛作用明顯增強；炮制后的細辛水煎液低劑量組炎癥抑制率為22.80%， 明顯高于生品水煎液低劑量組17.30%，抗炎作用顯著增強；細辛炮制前后的藥效學研究證明，生品經堿制后，毒性明顯降低，且藥效增強。 這為臨床上規范炮制目的提供了示范。

小鼠急性毒性實驗研究結果表明，細辛生品的急性毒性顯著高于炮制品[15-16]，因此經過堿制后的細辛毒性明顯降低，細辛主要對腎臟有急性毒性，腎衰竭是引發小鼠死亡的主要原因。本實驗為臨床上細辛的安全用藥提供了依據。

現代藥理研究及臨床實踐均證明細辛有毒，隨著煎煮時間的延長可使細辛中的揮發油揮發，細辛水煎液在臨床應用中有安全性和有效性兩種特性， 因此，在臨床上應用細辛入藥時， 應在正確辨證的情況下，選擇合適的劑型，若服用的復方湯劑中含有大劑量細辛，應盡量延長煎煮時間達到減毒的目的，以確保用藥安全。

[1] 王根輩，曹晶，馬曉慧，等.淺談美國FDA 對植物藥制劑臨床前毒理研究的要求[J].中草藥，2013，44（1）：116-119.

[2] 譚玉柱，董婷婷，趙高瓊，等.基于“一測多評”法對大黃地上部位提取物的質量控制研究[J].中草藥，2013，44（9）：1190-1194.

[3] 楊光成.麻黃附子細辛湯治療竇性心動過緩60 例[J].中國中醫藥科技，2013，20（1）：88-89.

[4] 覃桂革.中醫古方麻黃附子細辛湯加減合參麥注射液治療緩慢型心律失常臨床觀察[J].醫學信息，2013，26（4）：147.

[5] 周智恩.中西醫結合治療緩慢性心律失常的臨床研究[J].光明中醫，2013，28（7）：1414-1416.

[6] 耿乃志，才振國，杜春波，等.麻黃附子細辛湯加味治療頻發室早合并竇緩30 例[J].中醫藥信息，2012，29（6）：81-82.

[7] 魏文康，劉紅艷.麻黃附子細辛湯治療緩慢型心律失常30 例[J].中國老年學雜志，2012，32（24）：5533-5534.

[8] 苗靜琨，陳啟雄，李春，等.α-細辛醚抗癲癇作用的實驗研究[J].中國臨床藥理學雜志，2013，29（1）：38-41.

[9] 王曉麗，金禮吉，續繁星，等.中草藥細辛研究進展[J].亞太傳統醫藥，2013，9（7）：68-71.

[10] 侯平，楊麗，劉寧，等.麻黃堿、β-細辛醚和去甲烏藥堿對大鼠心肌細胞鈣離子濃度和細胞膜鈣通道的影響[J].中國醫科大學學報，2013，42（3）：201-203.

[11] 胡竟一，邱春燕，雷玲，等.細辛的鎮痛和抗炎作用[J].中國藥理與臨床，2011，27（2）：67-69.

[12] 潘金火，嚴國俊，宋娟.關木通小同炮制品中馬兜鈴酸A 的含量測定及其對大鼠腎功能的急性損傷試驗[J].中藥材，2010，33（8）：1228-1233.

[13] 劉雅婧，李春杰，周英亮，等.不同產地細辛中有效成分與馬兜鈴酸Ⅰ含量差異比較[J].中國執業藥師，2010，7（12）：29-33.

[14] 曹蕊，王錚，張春紅，等.RP-HPLC 法測定不同方法炮制關木通中馬兜鈴酸A 的含量[J].亞太傳統醫藥，2009，5（7）：28-30.

[15] 孫秀巖，孫啟時，賈凌云.HPLC 法測定種子經處理后種植的遼細辛中馬兜鈴酸A 的含量[J].沈陽藥科大學學報，2009，26（4）：299-302.

[16] 熊玉蘭，荊宇，尚明英，等.細辛非揮發性提取物抗炎鎮痛作用研究[J].中國中藥雜志，2009，34（17）：2252.