卷煙煙氣水溶液及綠茶對斑馬魚的毒性作用

周露　徐遠剛　呂賀港　等

摘要：以斑馬魚（Danio rerio）為試驗材料，采用半靜態法在室內測定了卷煙煙氣水溶液的急性毒性并初步探討了綠茶水對其的減毒作用。結果表明，卷煙煙氣水溶液對斑馬魚的24、48、72、96 h的LC50分別為3.6%、3.2%、3.1%、3.0%。3%的綠茶水對3.3%的卷煙煙氣水溶液有減毒作用，9%和15%的綠茶水無該作用，且增強了3.3%卷煙煙氣水溶液對斑馬魚的致死作用。卷煙煙氣水溶液對斑馬魚有毒性致死影響，且該影響隨卷煙煙氣水溶液濃度的增大和作用時間的延長而增強，綠茶水對降低卷煙煙氣毒害具有明顯作用，但高濃度綠茶水可導致斑馬魚死亡。

關鍵詞：卷煙煙氣水溶液（WSCCS）；綠茶；斑馬魚（Danio rerio）；毒性

中圖分類號：S965.8；X503.225 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5483-04

卷煙煙支主要是由煙草、添加劑、卷煙紙、濾嘴等構成的，其中最重要的是煙草。當煙支在高溫條件下燃燒（或燃吸）時，內部化學成分發生一系列復雜變化從而形成卷煙煙氣。煙草作為一種天然材料，在燃燒過程中由于溫度和供氧量的不同，其燃燒機制不同，產生煙氣的化學成分也不同。煙氣中有數千種化合物，大約僅有1/3的化合物直接來自煙草，其余則是燃燒過程中產生的化合物，許多成分含量極微[1]，包括多種氧化劑、自由基及半醌基，這些化學物質打破了機體氧化抗氧化的平衡并能在肺中導致細胞內的損傷[2]。

斑馬魚（Danio rerio），又名斑馬擔尼魚（Brachydanio rerio）、藍條魚、花條魚、印度魚、印度斑馬魚、藍斑馬魚和黑斑刺鲃魚等，屬于輻鰭亞綱（Actinopterygii）鯉科（Cyprinidae）短擔尼魚屬（Danio）的一種硬骨魚，原產于印度東部、巴基斯坦、緬甸以及孟加拉國的小溪、稻田及恒河中游地區，是一種小型熱帶魚[3]。斑馬魚中存在許多與人類疾病相關的基因，且在蛋白質水平上，其關鍵部位的同源性幾乎是100%，所以可用斑馬魚來模擬人類疾病，這使其迅速成為脊椎動物中最適于做發育生物學和遺傳學研究的模式生物，同時也是最好的毒理模式脊椎動物[4]。20世紀70年代末，斑馬魚在國外開始被用于急性毒性試驗研究[5]；90年代初，斑馬魚開始用于急、慢性聯合毒性試驗[6]。斑馬魚是國際標準化組織（ISO）推薦使用的魚類毒性實驗動物，是一種敏感的水生模式生物，對多種有毒化學物質或環境污染物敏感，被國內外廣泛用于多種有毒化學物質的生態風險評估[7-10]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試卷煙 龍鳳呈祥，川渝中煙工業有限責任公司出品，焦油量 10 mg，煙氣一氧化碳11 mg，煙氣堿煙量1.0 mg。

1.1.2 供試魚 供試斑馬魚采購于成都青石橋花鳥魚市場，大小一致，體長（30±5） mm，體重（0.3±0.1） g。試驗前在實驗室馴養7 d以上，馴養期間死亡率不得超過10%，試驗前1 d停止喂食，試驗期間也不喂食。

1.1.3 試驗用水 經暴曬24 h去氯后的自來水[11]，pH 6.5～7.5；水曝氣至溶解氧濃度達到空氣飽和值（ASV）[12]。

1.2 方法

1.2.1 卷煙煙氣水溶液制備 根據參考文獻[13]收集方式，每400 mL清水抽吸8支卷煙，重復操作收集足夠用于試驗的卷煙煙氣水溶液作為母液Ⅰ。

1.2.2 卷煙煙氣水溶液對斑馬魚的毒性作用 試驗在水盆中進行，設5個濃度梯度，每個濃度梯度設置3次重復，如表1所示。每盆中所盛試液總體積2 000 mL，保證1.5 g魚每升水的要求[12]。按照該方案將母液Ⅰ稀釋為所需要的濃度和體積，用玻璃棒充分攪拌，使卷煙煙氣水溶液分布均勻，然后每個盆中放入10條斑馬魚。在12、24、48、72、96 h時檢查記錄斑馬魚的死亡情況，并計算死亡率。試驗過程中用增氧機增氧并且每12 h更換試液。試驗魚中毒后俯臥或側臥于盆底鰓蓋停止活動，用玻璃棒或小鑷子輕輕刺激尾部，5 min內無反應即可以確定為個體死亡[14]。

1.2.3 綠茶水溶液對斑馬魚的影響 稱取1.0 g綠茶溶解于250 mL燒沸的清水中，浸泡30 min，用玻璃棒輕輕攪拌，然后冷卻至室溫，作為母液Ⅱ備用。采取相同的方法制備足夠試驗所需的量，按照表2方案設置9個體積分數（3%、5%、7%、9%、11%、13%、15%、17%、19%），每盆中放入5條斑馬魚，按照上述試驗方法記錄數據。

1.2.4 卷煙煙氣水溶液和綠茶的互作效應 根據前兩次試驗結果，設計了卷煙煙氣水溶液和綠茶的互作效應試驗。試驗方法同上，每盆放5條斑馬魚。設A、B、C 3個混合液處理和去離子水對照（CK）， 各處理的溶液配比方案如表3所示。

1.2.5 數據處理 試驗數據用DPS v14.10數據處理軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 不同濃度卷煙煙氣水溶液對斑馬魚的毒性

由圖1可以看出，用不同濃度卷煙煙氣水溶液（3.1%、3.2%、3.3%、3.4%、3.5%）處理斑馬魚，發現斑馬魚的死亡率與卷煙煙氣水溶液濃度和處理時間呈明顯的正相關。母液Ⅰ濃度越大，斑馬魚死亡率越高。3.1%母液Ⅰ處理后，斑馬魚的死亡率均在70%以下（包括70%）。當濃度小于3.4%時，在24 h內斑馬魚死亡率均低于40%；當濃度大于3.3%時，在96 h內斑馬魚的死亡率均為100%。對照組所有斑馬魚在整個試驗過程中泳動、呼吸、對外界刺激（輕敲盆壁）無明顯變化。在3.5%的處理組中，斑馬魚在試驗開始30 min之內全部失去平衡，尾巴略垂，出現亂竄。隨著時間延長，在水面上出現側翻，鰓蓋外掀，呼吸加劇，肚子朝上，5 h后開始逐漸死亡，至72 h全部死亡。其他處理組斑馬魚的癥狀與上述癥狀相似，只是出現各癥狀的時間較為推遲。

由表4可以看出，卷煙煙氣水溶液對斑馬魚的毒性作用隨時間的延長而提高。不同母液Ⅰ處理斑馬魚的LC50隨時間的延長而降低； WSCCS 對受試斑馬魚的24、48、72、96 h的LC50分別是3.46%、3.23%、3.13%和3.05%，LC90分別是3.78%、3.60%、3.48%和3.26%，急性毒性相對較高。

2.2 綠茶水溶液對斑馬魚的影響

由圖2和圖3可以看出，經不同體積分數（CK、11%、13%、15%、17%、19%）綠茶水溶液處理的斑馬魚死亡率隨濃度的增大而增大。經11%、13%、15%母液Ⅱ處理的斑馬魚在24 h時死亡數都不超過2尾，死亡率不高于40%。經17%、19%母液Ⅱ處理的斑馬魚均在5 h內全部死亡。11%、13%、15%母液Ⅱ處理組分別在31、28、17 h出現死亡。此后又設置了3%、5%、7%、9%、17%、19%的濃度梯度，其中3%～9%濃度處理在96 h內斑馬魚沒有出現死亡，17%和19%的濃度處理在24 h內斑馬魚全部死亡。

2.3 卷煙煙氣水溶液與綠茶水溶液的混合物對斑馬魚的影響

本試驗選取了沒有導致斑馬魚死亡的綠茶水溶液濃度3%（A）和9%（B）以及出現死亡現象的15%（C）分別與能造成斑馬魚死亡的3.3%的卷煙煙氣水溶液互作，觀察其對斑馬魚死亡率的互作效應，結果如圖4和圖5所示。其中能明顯看出，當3.3%的卷煙煙氣水溶液與未出現死亡現象的9%和出現死亡現象的15%綠茶水溶液互作時，供試斑馬魚均在當天3 h內全部死亡；而當該濃度卷煙煙氣水溶液與3%的綠茶水溶液互作時，供試斑馬魚在第四天才全部死亡且出現死亡現象的時間點連線的總體趨勢較B、C平緩；與之前3.3%卷煙煙氣水溶液單獨作用結果相比，較高濃度的綠茶水溶液對卷煙煙氣水溶液毒性效應有促進作用，而較低濃度的綠茶水溶液對其毒性有降低作用。

在此次試驗的基礎上，將供試斑馬魚的條數由5尾擴大至10尾，重復處理A，記為處理E并與清水和重復之前3.3%卷煙煙氣水溶液處理組作對照比較，試驗結果如圖6所示。3%的綠茶水溶液與3.3%的卷煙煙氣水溶液互作時比單獨的3.3%的卷煙煙氣水溶液處理組對斑馬魚的毒性作用小。因此，低濃度的綠茶水溶液對卷煙煙氣水溶液有降低毒性的作用，為利用綠茶來降低卷煙的有害性提供了科學依據，并為卷煙的減害降焦研究提供了新的方式。

3 小結與討論

生物體暴露在污染的環境中，有毒物質可以通過各種途徑進入體內，首先產生一系列生化反應，而后引起一系列病理、生理的繼發反應，此時便可觀察到機體的毒性反應[15]。在急性暴露試驗的3.5% 卷煙煙氣水溶液中，斑馬魚在30 min之內即出現中毒癥狀，卷煙煙氣水溶液對受試魚的96 h LC50是3.05%，表明該種卷煙煙氣水溶液的水質綜合毒性較高。也說明了斑馬魚對卷煙煙氣水溶液毒性的敏感性，用斑馬魚作為毒性試驗材料評價卷煙煙氣水溶液毒性是可行的。卷煙煙氣水溶液對斑馬魚有毒性作用，且毒性作用隨濃度的增大和時間的延長而增強。低濃度綠茶水溶液對卷煙煙氣的毒性有降低作用，高濃度對其具有增強的效應。這可能是由于新鮮的綠茶水溶液中的抗氧化物質（如多酚類、維生素類、微量元素類、類胡蘿卜素及其衍生物、抗壞血酸等）可降低卷煙煙氣水溶液中的自由基和有毒物質并防止其更多的產生。其中茶葉中的多酚類物質是一種重要的抗氧化劑，占茶葉總量的25%～30%。茶多酚可選擇性地降低香煙主、側流煙氣中的苯并（a）芘含量[16]。本試驗結果與黃天輝等[17]對茉莉花提取物降低煙氣中有害成分有一定的效果的結果相符。同時姚二民等[18]之前研究發現，與普通濾嘴型卷煙相比，茶質濾嘴型卷煙煙氣中NNN、NAT、NAB、NNK、亞硝胺總量有明顯減少。綜上所述，綠茶對降低卷煙煙氣中有害物質含量具有重要作用。

參考文獻：

[1] 王瑞新.煙草化學[M].北京：中國農業出版社，2003.

[2] 周問渠，李 冰，洪 瑋.香煙煙霧對人支氣管上皮細胞氧化應激作用研究[J].中國現代醫生，2010，48（6）：24-25.

[3] 劉在平，張松林.斑馬魚在環境檢測領域中的應用[J].環境監控與預警，2011，3（1）：17-20.

[4] 姜 瑋，王新敏，唐于平，等.甘遂不同提取物對斑馬魚急性毒性的初步觀察[J].南京中醫藥大學學報，2012，28（1）：53-55.

[5] VITOZZI L， ANGELIS D G A. Critical review of comparative-acute toxicity data on freshwater fish[J]. Aquat Toxicol，1991，19（3）：167-204.

[6] ENSENBACH U，NAGEL R. Toxicity complex chemical mixtures： Acute and long-term effects on diffrernt life stages zebra fish （Brachydaniorerio）[J]. Ecotoxicology and Environmental Safety， 1995，30（2）：151-157.

[7] 徐 娟，陶 核，吳南翔.4種農藥對斑馬魚的急性毒性與安全評價[J].職業與健康，2010，26（23）：2777-2778.

[8] 蔡寶祥.動物傳染病診斷學[M].第2版.南京：江蘇科學技術出版社，1993.

[9] 辛朝安.禽病學[M].第2版.北京：中國農業出版社，2003.228-229.

[10] 陳杖榴.獸醫藥理學[M].第2版.北京：中國農業出版社，2002.244-247.

[11] 趙 于，徐敦明，劉賢進，等.10種農藥對斑馬魚的毒性與安全評價[J].安徽農業科學，2007，35（22）：6801-6802.

[12] GB/T 13267-1991，水質物質對淡水魚（斑馬魚）急性毒性測定方法[S].

[13] 江 鴻，葉賢文.卷煙煙氣及綠茶對蠶豆根尖細胞微核的誘導作用[J].安徽農業科學，2010，38（27）：14852-14853.

[14] 陳建明，何月平，張玨鋒，等.夾竹桃葉乙醇提取物對斑馬魚的毒性評價[J].水生生物學報，2011，35（5）：835-840.

[15] 梅 丹，周少奇.垃圾滲濾液對斑馬魚的毒性及抗氧化酶活性的影響[J].生態環境學報，2012，21（5）：902-906.

[16] 禹利君，胥錦樺，肖文軍，等.茶多酚作為保健型香煙添加劑的綜合開發[J].茶葉，2011，37（1）：3-5.

[17] 黃天輝，黃泰松，鄒克興，等.茉莉花茶提取物降低卷煙煙氣中有害成分的研究[J].安徽農業科學，2011，39（23）：14367-14368.

[18] 姚二民，張峻松，戴建國，等.茶質濾嘴降低卷煙煙氣中亞硝胺的效果[J].中國農學通報，2007，23（5）：125-128.

（責任編輯 屠 晶）

由表4可以看出，卷煙煙氣水溶液對斑馬魚的毒性作用隨時間的延長而提高。不同母液Ⅰ處理斑馬魚的LC50隨時間的延長而降低； WSCCS 對受試斑馬魚的24、48、72、96 h的LC50分別是3.46%、3.23%、3.13%和3.05%，LC90分別是3.78%、3.60%、3.48%和3.26%，急性毒性相對較高。

2.2 綠茶水溶液對斑馬魚的影響

由圖2和圖3可以看出，經不同體積分數（CK、11%、13%、15%、17%、19%）綠茶水溶液處理的斑馬魚死亡率隨濃度的增大而增大。經11%、13%、15%母液Ⅱ處理的斑馬魚在24 h時死亡數都不超過2尾，死亡率不高于40%。經17%、19%母液Ⅱ處理的斑馬魚均在5 h內全部死亡。11%、13%、15%母液Ⅱ處理組分別在31、28、17 h出現死亡。此后又設置了3%、5%、7%、9%、17%、19%的濃度梯度，其中3%～9%濃度處理在96 h內斑馬魚沒有出現死亡，17%和19%的濃度處理在24 h內斑馬魚全部死亡。

2.3 卷煙煙氣水溶液與綠茶水溶液的混合物對斑馬魚的影響

本試驗選取了沒有導致斑馬魚死亡的綠茶水溶液濃度3%（A）和9%（B）以及出現死亡現象的15%（C）分別與能造成斑馬魚死亡的3.3%的卷煙煙氣水溶液互作，觀察其對斑馬魚死亡率的互作效應，結果如圖4和圖5所示。其中能明顯看出，當3.3%的卷煙煙氣水溶液與未出現死亡現象的9%和出現死亡現象的15%綠茶水溶液互作時，供試斑馬魚均在當天3 h內全部死亡；而當該濃度卷煙煙氣水溶液與3%的綠茶水溶液互作時，供試斑馬魚在第四天才全部死亡且出現死亡現象的時間點連線的總體趨勢較B、C平緩；與之前3.3%卷煙煙氣水溶液單獨作用結果相比，較高濃度的綠茶水溶液對卷煙煙氣水溶液毒性效應有促進作用，而較低濃度的綠茶水溶液對其毒性有降低作用。

在此次試驗的基礎上，將供試斑馬魚的條數由5尾擴大至10尾，重復處理A，記為處理E并與清水和重復之前3.3%卷煙煙氣水溶液處理組作對照比較，試驗結果如圖6所示。3%的綠茶水溶液與3.3%的卷煙煙氣水溶液互作時比單獨的3.3%的卷煙煙氣水溶液處理組對斑馬魚的毒性作用小。因此，低濃度的綠茶水溶液對卷煙煙氣水溶液有降低毒性的作用，為利用綠茶來降低卷煙的有害性提供了科學依據，并為卷煙的減害降焦研究提供了新的方式。

3 小結與討論

生物體暴露在污染的環境中，有毒物質可以通過各種途徑進入體內，首先產生一系列生化反應，而后引起一系列病理、生理的繼發反應，此時便可觀察到機體的毒性反應[15]。在急性暴露試驗的3.5% 卷煙煙氣水溶液中，斑馬魚在30 min之內即出現中毒癥狀，卷煙煙氣水溶液對受試魚的96 h LC50是3.05%，表明該種卷煙煙氣水溶液的水質綜合毒性較高。也說明了斑馬魚對卷煙煙氣水溶液毒性的敏感性，用斑馬魚作為毒性試驗材料評價卷煙煙氣水溶液毒性是可行的。卷煙煙氣水溶液對斑馬魚有毒性作用，且毒性作用隨濃度的增大和時間的延長而增強。低濃度綠茶水溶液對卷煙煙氣的毒性有降低作用，高濃度對其具有增強的效應。這可能是由于新鮮的綠茶水溶液中的抗氧化物質（如多酚類、維生素類、微量元素類、類胡蘿卜素及其衍生物、抗壞血酸等）可降低卷煙煙氣水溶液中的自由基和有毒物質并防止其更多的產生。其中茶葉中的多酚類物質是一種重要的抗氧化劑，占茶葉總量的25%～30%。茶多酚可選擇性地降低香煙主、側流煙氣中的苯并（a）芘含量[16]。本試驗結果與黃天輝等[17]對茉莉花提取物降低煙氣中有害成分有一定的效果的結果相符。同時姚二民等[18]之前研究發現，與普通濾嘴型卷煙相比，茶質濾嘴型卷煙煙氣中NNN、NAT、NAB、NNK、亞硝胺總量有明顯減少。綜上所述，綠茶對降低卷煙煙氣中有害物質含量具有重要作用。

參考文獻：

[1] 王瑞新.煙草化學[M].北京：中國農業出版社，2003.

[2] 周問渠，李 冰，洪 瑋.香煙煙霧對人支氣管上皮細胞氧化應激作用研究[J].中國現代醫生，2010，48（6）：24-25.

[3] 劉在平，張松林.斑馬魚在環境檢測領域中的應用[J].環境監控與預警，2011，3（1）：17-20.

[4] 姜 瑋，王新敏，唐于平，等.甘遂不同提取物對斑馬魚急性毒性的初步觀察[J].南京中醫藥大學學報，2012，28（1）：53-55.

[5] VITOZZI L， ANGELIS D G A. Critical review of comparative-acute toxicity data on freshwater fish[J]. Aquat Toxicol，1991，19（3）：167-204.

[6] ENSENBACH U，NAGEL R. Toxicity complex chemical mixtures： Acute and long-term effects on diffrernt life stages zebra fish （Brachydaniorerio）[J]. Ecotoxicology and Environmental Safety， 1995，30（2）：151-157.

[7] 徐 娟，陶 核，吳南翔.4種農藥對斑馬魚的急性毒性與安全評價[J].職業與健康，2010，26（23）：2777-2778.

[8] 蔡寶祥.動物傳染病診斷學[M].第2版.南京：江蘇科學技術出版社，1993.

[9] 辛朝安.禽病學[M].第2版.北京：中國農業出版社，2003.228-229.

[10] 陳杖榴.獸醫藥理學[M].第2版.北京：中國農業出版社，2002.244-247.

[11] 趙 于，徐敦明，劉賢進，等.10種農藥對斑馬魚的毒性與安全評價[J].安徽農業科學，2007，35（22）：6801-6802.

[12] GB/T 13267-1991，水質物質對淡水魚（斑馬魚）急性毒性測定方法[S].

[13] 江 鴻，葉賢文.卷煙煙氣及綠茶對蠶豆根尖細胞微核的誘導作用[J].安徽農業科學，2010，38（27）：14852-14853.

[14] 陳建明，何月平，張玨鋒，等.夾竹桃葉乙醇提取物對斑馬魚的毒性評價[J].水生生物學報，2011，35（5）：835-840.

[15] 梅 丹，周少奇.垃圾滲濾液對斑馬魚的毒性及抗氧化酶活性的影響[J].生態環境學報，2012，21（5）：902-906.

[16] 禹利君，胥錦樺，肖文軍，等.茶多酚作為保健型香煙添加劑的綜合開發[J].茶葉，2011，37（1）：3-5.

[17] 黃天輝，黃泰松，鄒克興，等.茉莉花茶提取物降低卷煙煙氣中有害成分的研究[J].安徽農業科學，2011，39（23）：14367-14368.

[18] 姚二民，張峻松，戴建國，等.茶質濾嘴降低卷煙煙氣中亞硝胺的效果[J].中國農學通報，2007，23（5）：125-128.

（責任編輯 屠 晶）

由表4可以看出，卷煙煙氣水溶液對斑馬魚的毒性作用隨時間的延長而提高。不同母液Ⅰ處理斑馬魚的LC50隨時間的延長而降低； WSCCS 對受試斑馬魚的24、48、72、96 h的LC50分別是3.46%、3.23%、3.13%和3.05%，LC90分別是3.78%、3.60%、3.48%和3.26%，急性毒性相對較高。

2.2 綠茶水溶液對斑馬魚的影響

由圖2和圖3可以看出，經不同體積分數（CK、11%、13%、15%、17%、19%）綠茶水溶液處理的斑馬魚死亡率隨濃度的增大而增大。經11%、13%、15%母液Ⅱ處理的斑馬魚在24 h時死亡數都不超過2尾，死亡率不高于40%。經17%、19%母液Ⅱ處理的斑馬魚均在5 h內全部死亡。11%、13%、15%母液Ⅱ處理組分別在31、28、17 h出現死亡。此后又設置了3%、5%、7%、9%、17%、19%的濃度梯度，其中3%～9%濃度處理在96 h內斑馬魚沒有出現死亡，17%和19%的濃度處理在24 h內斑馬魚全部死亡。

2.3 卷煙煙氣水溶液與綠茶水溶液的混合物對斑馬魚的影響

本試驗選取了沒有導致斑馬魚死亡的綠茶水溶液濃度3%（A）和9%（B）以及出現死亡現象的15%（C）分別與能造成斑馬魚死亡的3.3%的卷煙煙氣水溶液互作，觀察其對斑馬魚死亡率的互作效應，結果如圖4和圖5所示。其中能明顯看出，當3.3%的卷煙煙氣水溶液與未出現死亡現象的9%和出現死亡現象的15%綠茶水溶液互作時，供試斑馬魚均在當天3 h內全部死亡；而當該濃度卷煙煙氣水溶液與3%的綠茶水溶液互作時，供試斑馬魚在第四天才全部死亡且出現死亡現象的時間點連線的總體趨勢較B、C平緩；與之前3.3%卷煙煙氣水溶液單獨作用結果相比，較高濃度的綠茶水溶液對卷煙煙氣水溶液毒性效應有促進作用，而較低濃度的綠茶水溶液對其毒性有降低作用。

在此次試驗的基礎上，將供試斑馬魚的條數由5尾擴大至10尾，重復處理A，記為處理E并與清水和重復之前3.3%卷煙煙氣水溶液處理組作對照比較，試驗結果如圖6所示。3%的綠茶水溶液與3.3%的卷煙煙氣水溶液互作時比單獨的3.3%的卷煙煙氣水溶液處理組對斑馬魚的毒性作用小。因此，低濃度的綠茶水溶液對卷煙煙氣水溶液有降低毒性的作用，為利用綠茶來降低卷煙的有害性提供了科學依據，并為卷煙的減害降焦研究提供了新的方式。

3 小結與討論

生物體暴露在污染的環境中，有毒物質可以通過各種途徑進入體內，首先產生一系列生化反應，而后引起一系列病理、生理的繼發反應，此時便可觀察到機體的毒性反應[15]。在急性暴露試驗的3.5% 卷煙煙氣水溶液中，斑馬魚在30 min之內即出現中毒癥狀，卷煙煙氣水溶液對受試魚的96 h LC50是3.05%，表明該種卷煙煙氣水溶液的水質綜合毒性較高。也說明了斑馬魚對卷煙煙氣水溶液毒性的敏感性，用斑馬魚作為毒性試驗材料評價卷煙煙氣水溶液毒性是可行的。卷煙煙氣水溶液對斑馬魚有毒性作用，且毒性作用隨濃度的增大和時間的延長而增強。低濃度綠茶水溶液對卷煙煙氣的毒性有降低作用，高濃度對其具有增強的效應。這可能是由于新鮮的綠茶水溶液中的抗氧化物質（如多酚類、維生素類、微量元素類、類胡蘿卜素及其衍生物、抗壞血酸等）可降低卷煙煙氣水溶液中的自由基和有毒物質并防止其更多的產生。其中茶葉中的多酚類物質是一種重要的抗氧化劑，占茶葉總量的25%～30%。茶多酚可選擇性地降低香煙主、側流煙氣中的苯并（a）芘含量[16]。本試驗結果與黃天輝等[17]對茉莉花提取物降低煙氣中有害成分有一定的效果的結果相符。同時姚二民等[18]之前研究發現，與普通濾嘴型卷煙相比，茶質濾嘴型卷煙煙氣中NNN、NAT、NAB、NNK、亞硝胺總量有明顯減少。綜上所述，綠茶對降低卷煙煙氣中有害物質含量具有重要作用。

參考文獻：

[1] 王瑞新.煙草化學[M].北京：中國農業出版社，2003.

[2] 周問渠，李 冰，洪 瑋.香煙煙霧對人支氣管上皮細胞氧化應激作用研究[J].中國現代醫生，2010，48（6）：24-25.

[3] 劉在平，張松林.斑馬魚在環境檢測領域中的應用[J].環境監控與預警，2011，3（1）：17-20.

[4] 姜 瑋，王新敏，唐于平，等.甘遂不同提取物對斑馬魚急性毒性的初步觀察[J].南京中醫藥大學學報，2012，28（1）：53-55.

[5] VITOZZI L， ANGELIS D G A. Critical review of comparative-acute toxicity data on freshwater fish[J]. Aquat Toxicol，1991，19（3）：167-204.

[6] ENSENBACH U，NAGEL R. Toxicity complex chemical mixtures： Acute and long-term effects on diffrernt life stages zebra fish （Brachydaniorerio）[J]. Ecotoxicology and Environmental Safety， 1995，30（2）：151-157.

[7] 徐 娟，陶 核，吳南翔.4種農藥對斑馬魚的急性毒性與安全評價[J].職業與健康，2010，26（23）：2777-2778.

[8] 蔡寶祥.動物傳染病診斷學[M].第2版.南京：江蘇科學技術出版社，1993.

[9] 辛朝安.禽病學[M].第2版.北京：中國農業出版社，2003.228-229.

[10] 陳杖榴.獸醫藥理學[M].第2版.北京：中國農業出版社，2002.244-247.

[11] 趙 于，徐敦明，劉賢進，等.10種農藥對斑馬魚的毒性與安全評價[J].安徽農業科學，2007，35（22）：6801-6802.

[12] GB/T 13267-1991，水質物質對淡水魚（斑馬魚）急性毒性測定方法[S].

[13] 江 鴻，葉賢文.卷煙煙氣及綠茶對蠶豆根尖細胞微核的誘導作用[J].安徽農業科學，2010，38（27）：14852-14853.

[14] 陳建明，何月平，張玨鋒，等.夾竹桃葉乙醇提取物對斑馬魚的毒性評價[J].水生生物學報，2011，35（5）：835-840.

[15] 梅 丹，周少奇.垃圾滲濾液對斑馬魚的毒性及抗氧化酶活性的影響[J].生態環境學報，2012，21（5）：902-906.

[16] 禹利君，胥錦樺，肖文軍，等.茶多酚作為保健型香煙添加劑的綜合開發[J].茶葉，2011，37（1）：3-5.

[17] 黃天輝，黃泰松，鄒克興，等.茉莉花茶提取物降低卷煙煙氣中有害成分的研究[J].安徽農業科學，2011，39（23）：14367-14368.

[18] 姚二民，張峻松，戴建國，等.茶質濾嘴降低卷煙煙氣中亞硝胺的效果[J].中國農學通報，2007，23（5）：125-128.

（責任編輯 屠 晶）