微波—超聲波聯(lián)合提取青錢柳總黃酮和總?cè)铺崛」に?/h1>
2015-01-20 11:58:37黃元河潘喬丹唐海燕等
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年22期 關(guān)鍵詞：黃酮
黃元河 潘喬丹 唐海燕 等
摘要：研究青錢柳[Cyclocarya paliurus （Batal.） Iljinskaja]總黃酮和總?cè)频奈⒉?超聲波聯(lián)合提取工藝，試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化青錢柳中總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛」に嚒＝Y(jié)果表明，青錢柳總黃酮的最佳條件為70%乙醇，液料比（m/V，g：mL）為1∶30，微波800 W-超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min；總?cè)铺崛〉淖罴褩l件為80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下微波-超聲波聯(lián)合提取青錢柳總黃酮和總?cè)破骄崛÷史謩e為4.379%和2.998%。
關(guān)鍵詞：青錢柳[Cyclocarya paliurus （Batal.） Iljinskaja]；總黃酮；總?cè)疲晃⒉?超聲波聯(lián)合
中圖分類號：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5515-03
青錢柳[Cyclocarya paliurus （Batal.） Iljinskaja]又名青錢李、山麻柳、一串錢、甜茶樹、搖錢樹等，為胡桃科植物，是國家重點(diǎn)保護(hù)的瀕危植物之一，屬三類保護(hù)植物。民間常取其葉片制作茶飲料，有清熱解暑，降壓降糖等功效。青錢柳主要成分有三萜皂苷、黃酮、甾體、有機(jī)酸等，具有降血糖、降血脂、降血壓、增強(qiáng)免疫力、抗氧化防衰老等藥理活性[1]。其中黃酮類可能具有多種保健功能，而三萜類具有降糖、降壓、降血脂的等功能活性[2-4]。雖有微波或超聲波青錢柳總黃酮或總?cè)铺崛」に嚨膱蟮繹4，5]，但有關(guān)微波-超聲波聯(lián)合提取總黃酮和總?cè)频膱蟮垒^少見。微波-超聲波聯(lián)合提取具有用時短、既簡便又快速的特點(diǎn)，綜合了微波和超聲波的優(yōu)點(diǎn)，因此本研究以青錢柳為原料，總黃酮和總?cè)坪繛橹笜?biāo)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)選青錢柳總黃酮和總?cè)频奈⒉?超聲波聯(lián)合提取工藝，旨在為青錢柳產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步開發(fā)和綜合利用提供理論依據(jù)和參考。
1 材料與方法
1.1 材料與試劑
青錢柳枝葉采于廣西隆林，干燥粉碎后備用；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為100080-200707；齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110709-200505；其他試劑均為分析純。
1.2 試驗(yàn)儀器
DF-15型臺式連續(xù)投料粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司），TU-1800型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），XH-300A型微波超聲波組合合成萃取儀（北京祥鵠科技發(fā)展有限公司），F(xiàn)A1104型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司），KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮儀器廠）。
1.3 試驗(yàn)方法
1.3.1 樣品提取 稱取青錢柳粉末0.5 g，分別按照單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)設(shè)計的條件進(jìn)行提取，濃縮蒸干后得到提取浸膏，再用70%乙醇定容至25 mL，即得供試溶液。含量測定前，采用試管預(yù)試法[6]和薄層硅膠法檢驗(yàn)，結(jié)果都顯陽性，表明青錢柳中含有黃酮類和三萜類化合物。
1.3.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，配制不同濃度梯度，采用三氯化鋁顯色法[7]，運(yùn)用分光光度計于409 nm處測吸光度，以吸光度（A）與濃度（C）進(jìn)行直線回歸，得回歸方程為A1=22.833C1 +0.006，r=0.999 8。
1.3.3 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品配制不同濃度梯度，采用香草醛-高氯酸顯色法[8]，運(yùn)用分光光度計于549 nm處測吸光度，以吸光度（A）與濃度（C）進(jìn)行直線回歸，得回歸方程為A2=71.264C2 -0.021 3，r=0.999 8。
2 結(jié)果與分析
2.1 單因素試驗(yàn)
2.1.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對提取率的影響 固定微波功率700 W，料液比（m/V，g∶mL，下同）1∶25，時間10 min，超聲波功率800 W，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)在50%～90%范圍內(nèi)對提取效果的影響，結(jié)果見圖1。從圖1可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%左右時總黃酮和總?cè)频奶崛÷首罡撸虼诉x擇60%～80%的體積分?jǐn)?shù)范圍進(jìn)行正交試驗(yàn)。
2.1.2 料液比對提取率的影響 固定乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，微波功率700 W，超聲波功率800 W，時間10 min的條件下考察料液比對提取效果的影響，結(jié)果見圖2。從圖2可知，總黃酮和總?cè)圃诹弦罕葹?∶25之后吸光度變化不大，因此選擇料液比為1∶（20～30）的范圍進(jìn)行正交試驗(yàn)。
2.1.3 微波功率對提取率的影響 固定乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1∶25，超聲波功率800 W，時間10 min的條件下考察微波功率在200～800 W范圍內(nèi)對提取效果的影響，結(jié)果見圖3。從圖3可知，總黃酮和總?cè)圃谖⒉üβ蕿?00 W左右提取率最高，因此選擇600～800 W的范圍進(jìn)行正交試驗(yàn)。
2.1.4 提取時間對提取率的影響 考察提取時間在4～20 min范圍內(nèi)對提取效果的影響，結(jié)果見圖4。從圖4可知，總黃酮和總?cè)圃谔崛r間為4 min時已達(dá)到一定值之后吸光度變化不大，因此正交試驗(yàn)時固定提取時間為4 min。
2.1.5 超聲波功率對提取率的影響 固定乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1∶25，微波功率700 W，時間4 min的條件下考察超聲波功率在400～1 200 W范圍內(nèi)對提取效果的影響，結(jié)果見圖5。從圖5可知，總黃酮在微波功率為800 W左右提取率最高，而總?cè)? 000 W左右提取率最高，因此選擇600～1000 W的功率范圍進(jìn)行正交試驗(yàn)。
2.2 正交設(shè)計優(yōu)化提取工藝
根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率、超聲波功率等作為考察因素，選用L9（34）正交表安排試驗(yàn)。正交試驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果分析見表1。由極差分析表明，4個因素影響總黃酮提取率的順序依次為A、C、B、D，影響總?cè)铺崛÷实捻樞蛞来螢锽、C、D、A。總黃酮的最佳提取條件為A2B3C3D3，即70%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W、超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min；總?cè)频淖罴烟崛l件為A3B3C3D2，即80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min。取青錢柳5份，每份0.5 g，均在最佳提取條件下進(jìn)行驗(yàn)證，實(shí)際測得青錢柳中總黃酮和總?cè)频钠骄崛÷史謩e為4.379%和2.998%。
2.3 精密度試驗(yàn)
精密吸取青錢柳同一供試品溶液6份，按照總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛》椒y提取率，RSD分別為1.0%、1.1%（n=6），說明精密度良好。
2.4 重復(fù)性試驗(yàn)
取青錢柳粉末各5份，按供試品溶液制備方法制備青錢柳供試品溶液，進(jìn)行總黃酮和總?cè)茰y定，RSD分別為0.98%、1.3%（n=5）。
2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取一定量青錢柳供試品，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)方法操作，顯色后60 min內(nèi)，每隔10 min測定1次吸光度，總黃酮和總?cè)频奶崛÷实腞SD分別為1.1%、1.3%（n=7），表明顯色后的溶液在60 min內(nèi)穩(wěn)定。
2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)
分別向已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的樣品提取液中加入一定量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液和齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示平均加標(biāo)回收率分別為100.17%、99.31%，RSD分別為1.2%、0.84%（n=5），表明該法回收率良好。
3 結(jié)論
微波-超聲波是目前采用的較為先進(jìn)的藥用植物提取方法，其綜合克服了常規(guī)超聲波和微波萃取之不足，具有速度快、耗能小、溶劑用量小、回收率高等優(yōu)點(diǎn)[9]。本試驗(yàn)應(yīng)用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化青錢柳中總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛」に嚒Ｇ噱X柳總黃酮的最佳條件為70%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總黃酮提取率為4.379%，高于文獻(xiàn)[10，11]報道的提取率；青錢柳總?cè)频淖罴烟崛l件為80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總?cè)铺崛÷蕿?.998%。因此，采用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，總黃酮和總?cè)铺崛÷瘦^高，且試驗(yàn)用時較少，既經(jīng)濟(jì)又省時，值得推廣。
參考文獻(xiàn)：
[1] 王克全，曹 瑩.青錢柳化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展[J].黑龍江醫(yī)學(xué)，2007，31（8）：577-579.
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[8] 蔡亞玲，阮金蘭，蘇 群，等.紫背鼠尾草中總?cè)扑岬暮繙y定[J].中藥材，2008，31（5）：692-693.
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[10] 謝明勇，王遠(yuǎn)興，溫輝粱，等.青錢柳中黃酮甙和維生素含量的測定[J].食品科學(xué)，2001，22（1）：66-68.
[11] 朱賁峰，賀肇東，王政峰，等.不同產(chǎn)地青錢柳的總黃酮含量比較[J].海峽藥學(xué)，2004，16（3）：88-89.
（責(zé)任編輯 龍小玲）
2.3 精密度試驗(yàn)
精密吸取青錢柳同一供試品溶液6份，按照總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛》椒y提取率，RSD分別為1.0%、1.1%（n=6），說明精密度良好。
2.4 重復(fù)性試驗(yàn)
取青錢柳粉末各5份，按供試品溶液制備方法制備青錢柳供試品溶液，進(jìn)行總黃酮和總?cè)茰y定，RSD分別為0.98%、1.3%（n=5）。
2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取一定量青錢柳供試品，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)方法操作，顯色后60 min內(nèi)，每隔10 min測定1次吸光度，總黃酮和總?cè)频奶崛÷实腞SD分別為1.1%、1.3%（n=7），表明顯色后的溶液在60 min內(nèi)穩(wěn)定。
2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)
分別向已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的樣品提取液中加入一定量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液和齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示平均加標(biāo)回收率分別為100.17%、99.31%，RSD分別為1.2%、0.84%（n=5），表明該法回收率良好。
3 結(jié)論
微波-超聲波是目前采用的較為先進(jìn)的藥用植物提取方法，其綜合克服了常規(guī)超聲波和微波萃取之不足，具有速度快、耗能小、溶劑用量小、回收率高等優(yōu)點(diǎn)[9]。本試驗(yàn)應(yīng)用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化青錢柳中總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛」に嚒Ｇ噱X柳總黃酮的最佳條件為70%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總黃酮提取率為4.379%，高于文獻(xiàn)[10，11]報道的提取率；青錢柳總?cè)频淖罴烟崛l件為80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總?cè)铺崛÷蕿?.998%。因此，采用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，總黃酮和總?cè)铺崛÷瘦^高，且試驗(yàn)用時較少，既經(jīng)濟(jì)又省時，值得推廣。
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（責(zé)任編輯 龍小玲）
2.3 精密度試驗(yàn)
精密吸取青錢柳同一供試品溶液6份，按照總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛》椒y提取率，RSD分別為1.0%、1.1%（n=6），說明精密度良好。
2.4 重復(fù)性試驗(yàn)
取青錢柳粉末各5份，按供試品溶液制備方法制備青錢柳供試品溶液，進(jìn)行總黃酮和總?cè)茰y定，RSD分別為0.98%、1.3%（n=5）。
2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取一定量青錢柳供試品，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)方法操作，顯色后60 min內(nèi)，每隔10 min測定1次吸光度，總黃酮和總?cè)频奶崛÷实腞SD分別為1.1%、1.3%（n=7），表明顯色后的溶液在60 min內(nèi)穩(wěn)定。
2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)
分別向已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的樣品提取液中加入一定量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液和齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示平均加標(biāo)回收率分別為100.17%、99.31%，RSD分別為1.2%、0.84%（n=5），表明該法回收率良好。
3 結(jié)論
微波-超聲波是目前采用的較為先進(jìn)的藥用植物提取方法，其綜合克服了常規(guī)超聲波和微波萃取之不足，具有速度快、耗能小、溶劑用量小、回收率高等優(yōu)點(diǎn)[9]。本試驗(yàn)應(yīng)用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化青錢柳中總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛」に嚒Ｇ噱X柳總黃酮的最佳條件為70%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總黃酮提取率為4.379%，高于文獻(xiàn)[10，11]報道的提取率；青錢柳總?cè)频淖罴烟崛l件為80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總?cè)铺崛÷蕿?.998%。因此，采用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，總黃酮和總?cè)铺崛÷瘦^高，且試驗(yàn)用時較少，既經(jīng)濟(jì)又省時，值得推廣。
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（責(zé)任編輯 龍小玲）
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黃元河 潘喬丹 唐海燕 等
摘要：研究青錢柳[Cyclocarya paliurus （Batal.） Iljinskaja]總黃酮和總?cè)频奈⒉?超聲波聯(lián)合提取工藝，試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化青錢柳中總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛」に嚒＝Y(jié)果表明，青錢柳總黃酮的最佳條件為70%乙醇，液料比（m/V，g：mL）為1∶30，微波800 W-超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min；總?cè)铺崛〉淖罴褩l件為80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下微波-超聲波聯(lián)合提取青錢柳總黃酮和總?cè)破骄崛÷史謩e為4.379%和2.998%。
關(guān)鍵詞：青錢柳[Cyclocarya paliurus （Batal.） Iljinskaja]；總黃酮；總?cè)疲晃⒉?超聲波聯(lián)合
中圖分類號：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5515-03
青錢柳[Cyclocarya paliurus （Batal.） Iljinskaja]又名青錢李、山麻柳、一串錢、甜茶樹、搖錢樹等，為胡桃科植物，是國家重點(diǎn)保護(hù)的瀕危植物之一，屬三類保護(hù)植物。民間常取其葉片制作茶飲料，有清熱解暑，降壓降糖等功效。青錢柳主要成分有三萜皂苷、黃酮、甾體、有機(jī)酸等，具有降血糖、降血脂、降血壓、增強(qiáng)免疫力、抗氧化防衰老等藥理活性[1]。其中黃酮類可能具有多種保健功能，而三萜類具有降糖、降壓、降血脂的等功能活性[2-4]。雖有微波或超聲波青錢柳總黃酮或總?cè)铺崛」に嚨膱蟮繹4，5]，但有關(guān)微波-超聲波聯(lián)合提取總黃酮和總?cè)频膱蟮垒^少見。微波-超聲波聯(lián)合提取具有用時短、既簡便又快速的特點(diǎn)，綜合了微波和超聲波的優(yōu)點(diǎn)，因此本研究以青錢柳為原料，總黃酮和總?cè)坪繛橹笜?biāo)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)選青錢柳總黃酮和總?cè)频奈⒉?超聲波聯(lián)合提取工藝，旨在為青錢柳產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步開發(fā)和綜合利用提供理論依據(jù)和參考。
1 材料與方法
1.1 材料與試劑
青錢柳枝葉采于廣西隆林，干燥粉碎后備用；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為100080-200707；齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110709-200505；其他試劑均為分析純。
1.2 試驗(yàn)儀器
DF-15型臺式連續(xù)投料粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司），TU-1800型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），XH-300A型微波超聲波組合合成萃取儀（北京祥鵠科技發(fā)展有限公司），F(xiàn)A1104型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司），KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮儀器廠）。
1.3 試驗(yàn)方法
1.3.1 樣品提取 稱取青錢柳粉末0.5 g，分別按照單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)設(shè)計的條件進(jìn)行提取，濃縮蒸干后得到提取浸膏，再用70%乙醇定容至25 mL，即得供試溶液。含量測定前，采用試管預(yù)試法[6]和薄層硅膠法檢驗(yàn)，結(jié)果都顯陽性，表明青錢柳中含有黃酮類和三萜類化合物。
1.3.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，配制不同濃度梯度，采用三氯化鋁顯色法[7]，運(yùn)用分光光度計于409 nm處測吸光度，以吸光度（A）與濃度（C）進(jìn)行直線回歸，得回歸方程為A1=22.833C1 +0.006，r=0.999 8。
1.3.3 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品配制不同濃度梯度，采用香草醛-高氯酸顯色法[8]，運(yùn)用分光光度計于549 nm處測吸光度，以吸光度（A）與濃度（C）進(jìn)行直線回歸，得回歸方程為A2=71.264C2 -0.021 3，r=0.999 8。
2 結(jié)果與分析
2.1 單因素試驗(yàn)
2.1.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對提取率的影響 固定微波功率700 W，料液比（m/V，g∶mL，下同）1∶25，時間10 min，超聲波功率800 W，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)在50%～90%范圍內(nèi)對提取效果的影響，結(jié)果見圖1。從圖1可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%左右時總黃酮和總?cè)频奶崛÷首罡撸虼诉x擇60%～80%的體積分?jǐn)?shù)范圍進(jìn)行正交試驗(yàn)。
2.1.2 料液比對提取率的影響 固定乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，微波功率700 W，超聲波功率800 W，時間10 min的條件下考察料液比對提取效果的影響，結(jié)果見圖2。從圖2可知，總黃酮和總?cè)圃诹弦罕葹?∶25之后吸光度變化不大，因此選擇料液比為1∶（20～30）的范圍進(jìn)行正交試驗(yàn)。
2.1.3 微波功率對提取率的影響 固定乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1∶25，超聲波功率800 W，時間10 min的條件下考察微波功率在200～800 W范圍內(nèi)對提取效果的影響，結(jié)果見圖3。從圖3可知，總黃酮和總?cè)圃谖⒉üβ蕿?00 W左右提取率最高，因此選擇600～800 W的范圍進(jìn)行正交試驗(yàn)。
2.1.4 提取時間對提取率的影響 考察提取時間在4～20 min范圍內(nèi)對提取效果的影響，結(jié)果見圖4。從圖4可知，總黃酮和總?cè)圃谔崛r間為4 min時已達(dá)到一定值之后吸光度變化不大，因此正交試驗(yàn)時固定提取時間為4 min。
2.1.5 超聲波功率對提取率的影響 固定乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1∶25，微波功率700 W，時間4 min的條件下考察超聲波功率在400～1 200 W范圍內(nèi)對提取效果的影響，結(jié)果見圖5。從圖5可知，總黃酮在微波功率為800 W左右提取率最高，而總?cè)? 000 W左右提取率最高，因此選擇600～1000 W的功率范圍進(jìn)行正交試驗(yàn)。
2.2 正交設(shè)計優(yōu)化提取工藝
根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率、超聲波功率等作為考察因素，選用L9（34）正交表安排試驗(yàn)。正交試驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果分析見表1。由極差分析表明，4個因素影響總黃酮提取率的順序依次為A、C、B、D，影響總?cè)铺崛÷实捻樞蛞来螢锽、C、D、A。總黃酮的最佳提取條件為A2B3C3D3，即70%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W、超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min；總?cè)频淖罴烟崛l件為A3B3C3D2，即80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min。取青錢柳5份，每份0.5 g，均在最佳提取條件下進(jìn)行驗(yàn)證，實(shí)際測得青錢柳中總黃酮和總?cè)频钠骄崛÷史謩e為4.379%和2.998%。
2.3 精密度試驗(yàn)
精密吸取青錢柳同一供試品溶液6份，按照總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛》椒y提取率，RSD分別為1.0%、1.1%（n=6），說明精密度良好。
2.4 重復(fù)性試驗(yàn)
取青錢柳粉末各5份，按供試品溶液制備方法制備青錢柳供試品溶液，進(jìn)行總黃酮和總?cè)茰y定，RSD分別為0.98%、1.3%（n=5）。
2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取一定量青錢柳供試品，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)方法操作，顯色后60 min內(nèi)，每隔10 min測定1次吸光度，總黃酮和總?cè)频奶崛÷实腞SD分別為1.1%、1.3%（n=7），表明顯色后的溶液在60 min內(nèi)穩(wěn)定。
2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)
分別向已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的樣品提取液中加入一定量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液和齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示平均加標(biāo)回收率分別為100.17%、99.31%，RSD分別為1.2%、0.84%（n=5），表明該法回收率良好。
3 結(jié)論
微波-超聲波是目前采用的較為先進(jìn)的藥用植物提取方法，其綜合克服了常規(guī)超聲波和微波萃取之不足，具有速度快、耗能小、溶劑用量小、回收率高等優(yōu)點(diǎn)[9]。本試驗(yàn)應(yīng)用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化青錢柳中總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛」に嚒Ｇ噱X柳總黃酮的最佳條件為70%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總黃酮提取率為4.379%，高于文獻(xiàn)[10，11]報道的提取率；青錢柳總?cè)频淖罴烟崛l件為80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總?cè)铺崛÷蕿?.998%。因此，采用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，總黃酮和總?cè)铺崛÷瘦^高，且試驗(yàn)用時較少，既經(jīng)濟(jì)又省時，值得推廣。
參考文獻(xiàn)：
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[10] 謝明勇，王遠(yuǎn)興，溫輝粱，等.青錢柳中黃酮甙和維生素含量的測定[J].食品科學(xué)，2001，22（1）：66-68.
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（責(zé)任編輯 龍小玲）
2.3 精密度試驗(yàn)
精密吸取青錢柳同一供試品溶液6份，按照總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛》椒y提取率，RSD分別為1.0%、1.1%（n=6），說明精密度良好。
2.4 重復(fù)性試驗(yàn)
取青錢柳粉末各5份，按供試品溶液制備方法制備青錢柳供試品溶液，進(jìn)行總黃酮和總?cè)茰y定，RSD分別為0.98%、1.3%（n=5）。
2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取一定量青錢柳供試品，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)方法操作，顯色后60 min內(nèi)，每隔10 min測定1次吸光度，總黃酮和總?cè)频奶崛÷实腞SD分別為1.1%、1.3%（n=7），表明顯色后的溶液在60 min內(nèi)穩(wěn)定。
2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)
分別向已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的樣品提取液中加入一定量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液和齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示平均加標(biāo)回收率分別為100.17%、99.31%，RSD分別為1.2%、0.84%（n=5），表明該法回收率良好。
3 結(jié)論
微波-超聲波是目前采用的較為先進(jìn)的藥用植物提取方法，其綜合克服了常規(guī)超聲波和微波萃取之不足，具有速度快、耗能小、溶劑用量小、回收率高等優(yōu)點(diǎn)[9]。本試驗(yàn)應(yīng)用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化青錢柳中總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛」に嚒Ｇ噱X柳總黃酮的最佳條件為70%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總黃酮提取率為4.379%，高于文獻(xiàn)[10，11]報道的提取率；青錢柳總?cè)频淖罴烟崛l件為80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總?cè)铺崛÷蕿?.998%。因此，采用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，總黃酮和總?cè)铺崛÷瘦^高，且試驗(yàn)用時較少，既經(jīng)濟(jì)又省時，值得推廣。
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2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取一定量青錢柳供試品，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)方法操作，顯色后60 min內(nèi)，每隔10 min測定1次吸光度，總黃酮和總?cè)频奶崛÷实腞SD分別為1.1%、1.3%（n=7），表明顯色后的溶液在60 min內(nèi)穩(wěn)定。
2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)
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微波-超聲波是目前采用的較為先進(jìn)的藥用植物提取方法，其綜合克服了常規(guī)超聲波和微波萃取之不足，具有速度快、耗能小、溶劑用量小、回收率高等優(yōu)點(diǎn)[9]。本試驗(yàn)應(yīng)用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化青錢柳中總黃酮和總?cè)频淖罴烟崛」に嚒Ｇ噱X柳總黃酮的最佳條件為70%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波1 000 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總黃酮提取率為4.379%，高于文獻(xiàn)[10，11]報道的提取率；青錢柳總?cè)频淖罴烟崛l件為80%乙醇，液料比為1∶30，微波800 W-超聲波800 W聯(lián)合處理4 min，在此條件下青錢柳總?cè)铺崛÷蕿?.998%。因此，采用微波-超聲波聯(lián)用技術(shù)，總黃酮和總?cè)铺崛÷瘦^高，且試驗(yàn)用時較少，既經(jīng)濟(jì)又省時，值得推廣。
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（責(zé)任編輯 龍小玲）
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