喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的HPLC分析

李連強(qiáng)　權(quán)紅　蘭小中

摘要：建立HPLC測(cè)定喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]藥材中Boeravinone C含量的方法。色譜柱為Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水（70∶30，V/V），流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長294 nm。結(jié)果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2=0.999 9）；精確度和準(zhǔn)確度良好，平均回收率為97.2%。該方法快速、簡單，可用于喜馬拉雅紫茉莉藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

關(guān)鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色譜

中圖分類號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）22-5536-03

喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]為紫茉莉科植物，其根的藏藥名為“阿夏尕那哈”，是傳統(tǒng)藏藥的五根之一[1]。藏醫(yī)名著《藍(lán)琉璃》中記載“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒氣病、浮腫、黃水病，破結(jié)石、腫瘤”。Wang等[2]首先從紫茉莉（M. jalapa L.）根中分離得到了一種魚藤酮類化合物——Boeravinone C，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。范海霞[3]也從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了Boeravinone C，并證實(shí)Boeravinone C對(duì)肺癌細(xì)胞株A549、肝癌細(xì)胞株Hep G-2、宮頸癌細(xì)胞株Hela有較強(qiáng)的抑制作用。本課題組從2007年開始研究喜馬拉雅紫茉莉的人工種植，經(jīng)過近6年探索，已系統(tǒng)掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植、水肥管理、病蟲害防治等關(guān)鍵技術(shù)，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產(chǎn)量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現(xiàn)狀。Boeravinone C有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是測(cè)定藥用植物有效成分的常用方法[4-7]，本試驗(yàn)建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測(cè)定方法，以期為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供方法[8]，為相關(guān)的藏藥開發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

喜馬拉雅紫茉莉藥材于2012年9月10日采自西藏林芝地區(qū)八一鎮(zhèn)章麥村藏藥材人工種植與示范基地，經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。樣品保存于西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

Boeravinone C對(duì)照品由西南大學(xué)藥學(xué)院陳敏教授實(shí)驗(yàn)室自制（純度>98%）。甲醇（色譜純）購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，去離子水購于杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司

1.2 儀器

島津LC-20高效液相色譜儀（LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測(cè)器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、KQ5200型超聲波清洗儀、高速多功能粉碎機(jī)BL-200型。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；檢測(cè)波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.3.2 對(duì)照品溶液的配制 稱取烘干至恒重的對(duì)照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制對(duì)照品母液；取對(duì)照品母液1 mL，用色譜純甲醇定容至5 mL，得濃度為0.032 4 mg/mL的對(duì)照品工作液。

1.3.3 樣品前處理 取樣品粉碎，過100目篩，烘干至恒重，稱取1.000 g左右樣品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡數(shù)分鐘，超聲提取2次，每次30 min，過濾，合并濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，待測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)分析

取上述對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，其線性回歸方程為Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，線性范圍為0.032 4～0.486 0 μg。

取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次5 μL，以峰面積計(jì)算，其RSD為1.09%，表明精密度良好；取同一批樣品5份，按“1.3.3”制備樣品溶液并測(cè)定含量，其RSD為0.80%，表明重復(fù)性良好；取對(duì)照品溶液，分別于0～48 h進(jìn)樣5 μL，計(jì)算峰面積的RSD為1.95%，表明樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

稱取已知含量的喜馬拉雅紫茉莉根（同一批次）5份，加入對(duì)照品母液2.45 mL，按“1.3.3”處理，結(jié)果見表1。

2.2 樣品測(cè)定

喜馬拉雅紫茉莉根一般秋末采收，本試驗(yàn)采集的喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橐荒晟斯しN植幼苗，采收時(shí)間為2012年9月10日。按“1.3.3”制備樣品，并進(jìn)樣分析，對(duì)照品溶液及樣品溶液的HPLC圖見圖2。采用外標(biāo)峰面積法，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算，得樣品中Boeravinone C含量為0.397 mg/g。

3 小結(jié)與討論

喜馬拉雅紫茉莉產(chǎn)于西藏東部和四川西北部，基本呈零星分布，嚴(yán)重制約以喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橹饕系牟厮幍难芯颗c開發(fā)利用。索朗其美等[9]采用紫外分光光度法測(cè)定了野生和人工種植的喜馬拉雅紫茉莉中的黃酮含量，但黃酮類化合物廣泛存在于植物中，以總黃酮含量擬定喜馬拉雅紫茉莉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)略顯粗糙。本文建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測(cè)定方法。經(jīng)方法學(xué)考察，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系，具有較高的精確度和準(zhǔn)確度，平均回收率為97.2%，樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。該方法樣品制備方法簡單，分析時(shí)間較短（約20 min），可用于喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的檢測(cè)。近期研究表明，Boeravinone C可能是喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤的主要活性成分。該方法的建立，可為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量準(zhǔn)確評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳廣迪，馮慎遠(yuǎn).藏藥五根散對(duì)腦外傷后綜合征患者智能、記憶力影響的臨床觀察[J].中國中藥雜志，2003，28（1）：90-91.

[2] WANG Y F， CHEN J J， YANG Y Z， et al. New Rotenoids from Roots of Mirabilis jalapa[J]. Helvetica Chimica Acta， 2002， 85（8）： 2342-2348.

[3] 范海霞.喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤活性成分研究[D].重慶：西南大學(xué)，2012.

[4] 王治平，李衛(wèi)民，高 英，等.HPLC同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地葛根中6種主要異黃酮類成分的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013， 19（8）：125-128.

[5] 翟 瑤，鐘 文，林鵬程.UV法和HPLC法測(cè)定藏藥多腺懸鉤子中總黃酮及蘆丁的含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（9）：2144-2145.

[6] 黃秋潔，葉 勇，歐賢紅，等.HPLC法測(cè)定瑤族藤茶中沒食子酸的含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，52（24）：5764-5765.

[7] 李耀利，尚明英，耿長安，等.云南產(chǎn)青葉膽及其習(xí)用品藥材中5種成分的HPLC含量測(cè)定[J].中國中藥雜志，2013，38（9）： 1394-1400.

[8] 王 丹，張秋燕，楊興鑫，等.基于HPLC指紋圖譜的黃芩道地藥材與非道地藥材的鑒別研究[J].中國中藥雜志，2013，38（12）： 1951-1960.

[9] 索朗其美，達(dá)瓦潘多，劉 青，等.紫外分光光度法測(cè)定西藏野生和人工種植喜馬拉雅紫茉莉中總黃酮含量[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2012（4）：60-62.

（責(zé)任編輯 周有祥）endprint

摘要：建立HPLC測(cè)定喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]藥材中Boeravinone C含量的方法。色譜柱為Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水（70∶30，V/V），流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長294 nm。結(jié)果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2=0.999 9）；精確度和準(zhǔn)確度良好，平均回收率為97.2%。該方法快速、簡單，可用于喜馬拉雅紫茉莉藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

關(guān)鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色譜

中圖分類號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）22-5536-03

喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]為紫茉莉科植物，其根的藏藥名為“阿夏尕那哈”，是傳統(tǒng)藏藥的五根之一[1]。藏醫(yī)名著《藍(lán)琉璃》中記載“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒氣病、浮腫、黃水病，破結(jié)石、腫瘤”。Wang等[2]首先從紫茉莉（M. jalapa L.）根中分離得到了一種魚藤酮類化合物——Boeravinone C，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。范海霞[3]也從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了Boeravinone C，并證實(shí)Boeravinone C對(duì)肺癌細(xì)胞株A549、肝癌細(xì)胞株Hep G-2、宮頸癌細(xì)胞株Hela有較強(qiáng)的抑制作用。本課題組從2007年開始研究喜馬拉雅紫茉莉的人工種植，經(jīng)過近6年探索，已系統(tǒng)掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植、水肥管理、病蟲害防治等關(guān)鍵技術(shù)，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產(chǎn)量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現(xiàn)狀。Boeravinone C有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是測(cè)定藥用植物有效成分的常用方法[4-7]，本試驗(yàn)建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測(cè)定方法，以期為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供方法[8]，為相關(guān)的藏藥開發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

喜馬拉雅紫茉莉藥材于2012年9月10日采自西藏林芝地區(qū)八一鎮(zhèn)章麥村藏藥材人工種植與示范基地，經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。樣品保存于西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

Boeravinone C對(duì)照品由西南大學(xué)藥學(xué)院陳敏教授實(shí)驗(yàn)室自制（純度>98%）。甲醇（色譜純）購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，去離子水購于杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司

1.2 儀器

島津LC-20高效液相色譜儀（LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測(cè)器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、KQ5200型超聲波清洗儀、高速多功能粉碎機(jī)BL-200型。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；檢測(cè)波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.3.2 對(duì)照品溶液的配制 稱取烘干至恒重的對(duì)照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制對(duì)照品母液；取對(duì)照品母液1 mL，用色譜純甲醇定容至5 mL，得濃度為0.032 4 mg/mL的對(duì)照品工作液。

1.3.3 樣品前處理 取樣品粉碎，過100目篩，烘干至恒重，稱取1.000 g左右樣品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡數(shù)分鐘，超聲提取2次，每次30 min，過濾，合并濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，待測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)分析

取上述對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，其線性回歸方程為Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，線性范圍為0.032 4～0.486 0 μg。

取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次5 μL，以峰面積計(jì)算，其RSD為1.09%，表明精密度良好；取同一批樣品5份，按“1.3.3”制備樣品溶液并測(cè)定含量，其RSD為0.80%，表明重復(fù)性良好；取對(duì)照品溶液，分別于0～48 h進(jìn)樣5 μL，計(jì)算峰面積的RSD為1.95%，表明樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

稱取已知含量的喜馬拉雅紫茉莉根（同一批次）5份，加入對(duì)照品母液2.45 mL，按“1.3.3”處理，結(jié)果見表1。

2.2 樣品測(cè)定

喜馬拉雅紫茉莉根一般秋末采收，本試驗(yàn)采集的喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橐荒晟斯しN植幼苗，采收時(shí)間為2012年9月10日。按“1.3.3”制備樣品，并進(jìn)樣分析，對(duì)照品溶液及樣品溶液的HPLC圖見圖2。采用外標(biāo)峰面積法，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算，得樣品中Boeravinone C含量為0.397 mg/g。

3 小結(jié)與討論

喜馬拉雅紫茉莉產(chǎn)于西藏東部和四川西北部，基本呈零星分布，嚴(yán)重制約以喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橹饕系牟厮幍难芯颗c開發(fā)利用。索朗其美等[9]采用紫外分光光度法測(cè)定了野生和人工種植的喜馬拉雅紫茉莉中的黃酮含量，但黃酮類化合物廣泛存在于植物中，以總黃酮含量擬定喜馬拉雅紫茉莉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)略顯粗糙。本文建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測(cè)定方法。經(jīng)方法學(xué)考察，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系，具有較高的精確度和準(zhǔn)確度，平均回收率為97.2%，樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。該方法樣品制備方法簡單，分析時(shí)間較短（約20 min），可用于喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的檢測(cè)。近期研究表明，Boeravinone C可能是喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤的主要活性成分。該方法的建立，可為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量準(zhǔn)確評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳廣迪，馮慎遠(yuǎn).藏藥五根散對(duì)腦外傷后綜合征患者智能、記憶力影響的臨床觀察[J].中國中藥雜志，2003，28（1）：90-91.

[2] WANG Y F， CHEN J J， YANG Y Z， et al. New Rotenoids from Roots of Mirabilis jalapa[J]. Helvetica Chimica Acta， 2002， 85（8）： 2342-2348.

[3] 范海霞.喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤活性成分研究[D].重慶：西南大學(xué)，2012.

[4] 王治平，李衛(wèi)民，高 英，等.HPLC同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地葛根中6種主要異黃酮類成分的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013， 19（8）：125-128.

[5] 翟 瑤，鐘 文，林鵬程.UV法和HPLC法測(cè)定藏藥多腺懸鉤子中總黃酮及蘆丁的含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（9）：2144-2145.

[6] 黃秋潔，葉 勇，歐賢紅，等.HPLC法測(cè)定瑤族藤茶中沒食子酸的含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，52（24）：5764-5765.

[7] 李耀利，尚明英，耿長安，等.云南產(chǎn)青葉膽及其習(xí)用品藥材中5種成分的HPLC含量測(cè)定[J].中國中藥雜志，2013，38（9）： 1394-1400.

[8] 王 丹，張秋燕，楊興鑫，等.基于HPLC指紋圖譜的黃芩道地藥材與非道地藥材的鑒別研究[J].中國中藥雜志，2013，38（12）： 1951-1960.

[9] 索朗其美，達(dá)瓦潘多，劉 青，等.紫外分光光度法測(cè)定西藏野生和人工種植喜馬拉雅紫茉莉中總黃酮含量[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2012（4）：60-62.

（責(zé)任編輯 周有祥）endprint

摘要：建立HPLC測(cè)定喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]藥材中Boeravinone C含量的方法。色譜柱為Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水（70∶30，V/V），流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長294 nm。結(jié)果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2=0.999 9）；精確度和準(zhǔn)確度良好，平均回收率為97.2%。該方法快速、簡單，可用于喜馬拉雅紫茉莉藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

關(guān)鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色譜

中圖分類號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）22-5536-03

喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]為紫茉莉科植物，其根的藏藥名為“阿夏尕那哈”，是傳統(tǒng)藏藥的五根之一[1]。藏醫(yī)名著《藍(lán)琉璃》中記載“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒氣病、浮腫、黃水病，破結(jié)石、腫瘤”。Wang等[2]首先從紫茉莉（M. jalapa L.）根中分離得到了一種魚藤酮類化合物——Boeravinone C，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。范海霞[3]也從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了Boeravinone C，并證實(shí)Boeravinone C對(duì)肺癌細(xì)胞株A549、肝癌細(xì)胞株Hep G-2、宮頸癌細(xì)胞株Hela有較強(qiáng)的抑制作用。本課題組從2007年開始研究喜馬拉雅紫茉莉的人工種植，經(jīng)過近6年探索，已系統(tǒng)掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植、水肥管理、病蟲害防治等關(guān)鍵技術(shù)，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產(chǎn)量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現(xiàn)狀。Boeravinone C有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是測(cè)定藥用植物有效成分的常用方法[4-7]，本試驗(yàn)建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測(cè)定方法，以期為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供方法[8]，為相關(guān)的藏藥開發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

喜馬拉雅紫茉莉藥材于2012年9月10日采自西藏林芝地區(qū)八一鎮(zhèn)章麥村藏藥材人工種植與示范基地，經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。樣品保存于西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

Boeravinone C對(duì)照品由西南大學(xué)藥學(xué)院陳敏教授實(shí)驗(yàn)室自制（純度>98%）。甲醇（色譜純）購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，去離子水購于杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司

1.2 儀器

島津LC-20高效液相色譜儀（LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測(cè)器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、KQ5200型超聲波清洗儀、高速多功能粉碎機(jī)BL-200型。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；檢測(cè)波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.3.2 對(duì)照品溶液的配制 稱取烘干至恒重的對(duì)照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制對(duì)照品母液；取對(duì)照品母液1 mL，用色譜純甲醇定容至5 mL，得濃度為0.032 4 mg/mL的對(duì)照品工作液。

1.3.3 樣品前處理 取樣品粉碎，過100目篩，烘干至恒重，稱取1.000 g左右樣品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡數(shù)分鐘，超聲提取2次，每次30 min，過濾，合并濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，待測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)分析

取上述對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，其線性回歸方程為Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，線性范圍為0.032 4～0.486 0 μg。

取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次5 μL，以峰面積計(jì)算，其RSD為1.09%，表明精密度良好；取同一批樣品5份，按“1.3.3”制備樣品溶液并測(cè)定含量，其RSD為0.80%，表明重復(fù)性良好；取對(duì)照品溶液，分別于0～48 h進(jìn)樣5 μL，計(jì)算峰面積的RSD為1.95%，表明樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

稱取已知含量的喜馬拉雅紫茉莉根（同一批次）5份，加入對(duì)照品母液2.45 mL，按“1.3.3”處理，結(jié)果見表1。

2.2 樣品測(cè)定

喜馬拉雅紫茉莉根一般秋末采收，本試驗(yàn)采集的喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橐荒晟斯しN植幼苗，采收時(shí)間為2012年9月10日。按“1.3.3”制備樣品，并進(jìn)樣分析，對(duì)照品溶液及樣品溶液的HPLC圖見圖2。采用外標(biāo)峰面積法，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算，得樣品中Boeravinone C含量為0.397 mg/g。

3 小結(jié)與討論

喜馬拉雅紫茉莉產(chǎn)于西藏東部和四川西北部，基本呈零星分布，嚴(yán)重制約以喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橹饕系牟厮幍难芯颗c開發(fā)利用。索朗其美等[9]采用紫外分光光度法測(cè)定了野生和人工種植的喜馬拉雅紫茉莉中的黃酮含量，但黃酮類化合物廣泛存在于植物中，以總黃酮含量擬定喜馬拉雅紫茉莉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)略顯粗糙。本文建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測(cè)定方法。經(jīng)方法學(xué)考察，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系，具有較高的精確度和準(zhǔn)確度，平均回收率為97.2%，樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。該方法樣品制備方法簡單，分析時(shí)間較短（約20 min），可用于喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的檢測(cè)。近期研究表明，Boeravinone C可能是喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤的主要活性成分。該方法的建立，可為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量準(zhǔn)確評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

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（責(zé)任編輯 周有祥）endprint