ASCA P-ANCA及TB-DNA檢測在UC CD及腸結核疾病鑒別診斷中的應用

陳巖

ASCA P-ANCA及TB-DNA檢測在UC CD及腸結核疾病鑒別診斷中的應用

陳巖

目的 探討血清抗釀酒酵母抗體（ASCA），抗中性粒細胞胞漿抗體（核周型）（P-ANCA）及組織結核分枝桿菌DNA（TBDNA）檢測在潰瘍性結腸炎（UC）、克羅恩病（CD）及腸結核疾病鑒別診斷中的臨床應用價值。方法 選擇UC、CD和腸結核患者128例，另設健康對照組31例，采用聚合酶鏈反應（PCR）技術和間接免疫熒光薄片法分別檢測組織結核分枝桿菌DNA（TB-DNA）、血清ASCA和P-ANCA，比較分析以上指標的變化。結果 UC組的P-ANCA+ASCA-/P-ANCA+表達率與對照組比較明顯增高，差異有顯著性（P＜0.01）；而CD血清組與對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。UC組的ASCA+、ASCA+/P-ANCA-表達率與對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；而CD血清組與對照組比較差異有顯著性（P＜0.01）。腸結核組的組織TB-DNA+表達率與CD組織組比較差異有顯著性（P＜0.01），前者的TB-DNA+表達率顯著高于后者。結論 血清ASCA 和P-ANCA 可用于UC與CD的鑒別診斷，聯合檢測兩項標志物可作為鑒別UC與CD較好的輔助檢查。組織TB-DNA檢測可用于腸結核和CD的鑒別診斷。

潰瘍性結腸炎 克羅恩病 炎癥性腸病

炎癥性腸病（inflammatory bowel disease，IBD）是一類病因和發病機制尚不明確的腸道慢性炎癥性疾病，包括潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）和克羅恩病（crohn’s disease，CD）。急性暴發型，有并發癥及年齡＞60歲者預后不良，病程漫長者癌變風險增加［1］。確診IBD通常靠內鏡檢查及病理活檢［2，3］。但相當部分的IBD疑似病例仍然不能通過內鏡檢查確診［4］。CD的臨床表現，X線及內鏡所見與腸結核相似，臨床鑒別比較困難［1］。本文通過檢測UC、CD和腸結核患者血清抗釀酒酵母抗體（ASCA），抗中性粒細胞胞漿抗體（核周型）（P-ANCA）及組織結核分枝桿菌DNA（TB-DNA）的陽性表達率，探討其變化特點。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2011年10月至2014年10月在本院就診或住院的UC、CD及腸結核患者128例。依據內鏡及病理活檢分為UC組、CD血清組和對照組3組，UC組31例，男20例，女11例；平均年齡（39.3±7.9）歲。患者病變部位在直腸、左半結腸、全結腸及未知部位的病例分別為9例、5例、14例和3例。CD血清組33例，男23例，女10例，平均年齡（38.2±7.6）歲。病變部位在回腸、結腸、回結腸及未知部位的病例分別為6例、16例、9例和2例。對照組31例為本院同期體檢中心健康體檢者，男19例，女l2例；平均年齡（36.7±6.9）歲。腸結核及CD組織標本來源于本院病理科2007年9月至2014年9月檔案保存病例，所有標本通過HE染色，由病理學家重新讀片確定病理診斷。其中腸結核組34例，男21例，女13例；平均年齡（37.3±5.7）歲。CD組織組30例，男21例，女9例，平均年齡（36.3±6.3）歲。活動性結核患者的診斷標準符合我國1998年制定的中國結核病分類標準。IBD診斷采用 “2001年全國慢性非感染性腸道疾病學術研討會”擬訂的診斷標準。各組性別和年齡比較差異無統計學意義（P＞0.05）。所有受試對象均排除自身免疫疾病、遺傳性疾病家族史及現癥腹瀉者，無抗結核治療。本項目經本院倫理委員會批準，所有對象簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 ASCA、P-ANCA采用間接免疫熒光薄片法檢測，試劑購自德國歐蒙公司。腸結核和CD患者腸道組織DNA提取自石蠟包埋組織，采用QIAampR DNA Mini Kit 試劑盒。

1.3 PCR 引物測序 擴增出目的條帶的PCR擴增產物，由華大基因測序，采用雙向測序。PCR 產物測序所得基因序列在GenBankR 數據庫中比對。

1.4 統計學方法 采用SPSS 18.0統計軟件。計量資料采用（x±s）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病例組與對照組血清ASCA、 P-ANCA及組織TBDNA陽性表達率比較 UC組的P-ANCA +及ASCA-/ P-ANCA+表達率與對照組比較明顯增高，差異有顯著性（P＜0.01）；而CD血清組與對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。UC組的ASCA+、ASCA+/P-ANCA-表達率與對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；而CD血清組與對照組比較差異有顯著性（P＜0.01）。

2.2 病例組間的血清ASCA、 P-ANCA及組織TBDNA陽性表達率比較 UC組的ASCA+、 P-ANCA+、

ASCA-/P-ANCA+和ASCA+/P-ANCA-表達率分別與CD血清組比較，差異有顯著性（P＜0.01）。UC組P-ANCA+、 ASCA-/P-ANCA+表達率明顯增高；CD血清組ASCA+、ASCA+/P-ANCA-表達率明顯增高。腸結核組的組織TB-DNA+表達率與CD組織組比較差異有顯著性（P＜0.01），腸結核組TB-DNA+表達率高于CD組織組。

2.3 ASCA+、P-ANCA+、ASCA+/P-ANCA-、ASCA-/ P-ANCA+及TB-DNA+的靈敏性、特異性比較 與聯合檢測ASCA+/P-ANCA-、ASCA-/P-ANCA+比較，單獨檢測ASCA、P-ANCA在診斷UC和CD中的靈敏性差異無統計學意義（P＞0.05），而特異性比較明顯增高（P＜0.01）。TB-DNA+在診斷腸結核和CD中的靈敏性和特異性分別為44.1%和100%。

3 討論

目前對于IBD及腸結核的診斷依據臨床表現、實驗室及放射學檢查、內鏡和病理學檢查等。當結腸鏡檢查無法確診或患者存在結腸鏡檢查禁忌證時，血清學抗體標志物P-ANCA、ASCA 及組織TB-DNA等檢測有助于它們的鑒別。血清ASCA、 P-ANCA陽性表達率在UC和CD的鑒別診斷中有重要價值，ASCA檢測對CD特異性較高，P-ANCA檢測對UC特異性高。有20%～85%的UC患者體內可檢測到P-ANCA［5］。國內有報道認為CD患者中有39%～76%的血清中存在ASCA，而15%的UC患者及5%的健康人群血清中亦有ASCA［6］。值得注意的是在一些自身免疫性肝炎患者血清中亦存在ASCA、ANCA［7，8］，故單獨檢測P-ANCA或ASCA對診斷IBD的價值有限。2010 年世界胃腸病學實踐指南明確指出聯合檢測 ASCA 和P-ANCA 指標作為鑒別 UC 與 CD的輔助檢查， 即P-ANCA陽性/ ASCA陰性者提示UC，ASCA 陽性/P-ANCA陰性者提示CD［9］。本資料顯示P-ANCA陽性、ASCA陰性/ P-ANCA陽性在UC中的表達率明顯增高（P＜0.01），ASCA陽性、ASCA陽性/P-ANCA陰性在CD中的表達率明顯增高（P＜0.01）；提示單項檢測和聯合檢測對鑒別診斷UC和CD者有較高的價值。聯合檢測ASCA+/ P-ANCA-和ASCA-/P-ANCA+對診斷CD和UC的靈敏性與單項檢測無差異（P＞0.05），但特異性比較有明顯差異（P＜0.01），提示聯合檢測 ASCA 和P-ANCA 可作為鑒別 UC 與 CD較好的輔助檢查。

腸結核與CD的臨床表現相似，病理上均有肉芽腫形成，臨床上較難鑒別，結核分枝桿菌DNA PCR技術已成為目前的研究熱點［10］。國內的研究機構認為TB-DNA PCR 技術的靈敏性＞60%［11，12］，國外的報道認為，其敏感性在21.6%～45.0%，而特異性＞80%［13～15］。本資料結果顯示TB-DNA PCR的靈敏性和特異性分別為44.1%和100%。提示DNA PCR法可作為確診腸結核以及研究腸結核和CD鑒別診斷的一種快捷的輔助診斷方法。

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