小兒止瀉巴布劑體外透皮吸收特征分析

陳琳　王京霞　高瑞蘭

小兒止瀉巴布劑體外透皮吸收特征分析

陳琳王京霞高瑞蘭

目的 分析小兒止瀉巴布劑體外透皮吸收動力學特征，并優選出最佳透皮促進劑。方法 采用高效液相色譜法測定小兒止瀉巴布劑不同時間點接收液中葛根素的濃度，采用Franz擴散池和大鼠腹部皮膚進行體外透皮擴散試驗分析葛根素累積釋放量與釋放時間的關系，找出符合小兒止瀉巴布劑透皮吸收的最佳動力學擬合方程。并且考察氮酮、冰片及其復合促滲劑對葛根素的體外透皮吸收的影響，以葛根素的滲透系數為判斷標準，優選出最佳透皮促進劑。結果 葛根素的單位面積累積滲透量（Q）與時間t1/2呈線性關系。單獨加入4%冰片使葛根素的滲透系數增加1.61倍，單獨加入4%氮酮使葛根素的滲透系數增加2.10倍，2%氮酮與2%冰片聯合使用使葛根素的滲透系數增加1.68倍。結論 小兒止瀉巴布劑的透皮吸收動力學符合Higuchi方程，氮酮為最佳透皮促進劑。

小兒止瀉巴布劑 透皮吸收 葛根素 氮酮

小兒止瀉巴布劑是一種用于治療小兒腹瀉的中藥外用復方制劑，對治療小兒非感染性腹瀉及小兒感染性腹瀉均具有一定的療效。該巴布劑是基于經典方藥七味白術散的基礎上研制而成，具有健脾除濕、扶正驅邪等功效。巴布劑作為一種經皮給藥新劑型，可以增強患兒的依從性、確保藥物的療效，為治療小兒腹瀉提供一種安全可靠、質量可控的新制劑。作者以小兒止瀉巴布劑中葛根素的單位面積累積滲透量作為評價指標，采用Franz擴散池和大鼠腹部皮膚進行體外透皮擴散試驗分析葛根素累積釋放量與釋放時間的關系，找出符合小兒止瀉巴布劑透皮吸收的最佳動力學擬合方程，并且考察氮酮、冰片及其復合促滲劑對葛根素的體外透皮吸收的影響，以葛根素的滲透系數為判斷標準，優選出最佳透皮促進劑。

1　材料與方法

1.1試劑與儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀；JJ200型電子天平（常熟市雙杰測試有限公司）；真空干燥箱DZF-6050型（上海精宏實驗設備有限公司）；TK-12D型透皮擴散試驗儀（上海楷凱科技貿易有限公司）；KQ3200型水洗超聲儀（上海昆山）；葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定研究院）；SD大鼠雌雄不限，購自浙江中醫藥大學實驗動物中心。

1.2透皮吸收試驗 （1）巴布劑樣品的制備：分別制備4種巴布劑樣品：不含氮酮和冰片的巴布劑、含4%氮酮（AZ）的巴布劑、4%冰片（BO）的巴布劑、含2%氮酮（AZ）+2%冰片（BO）的巴布劑［1，2］。（2）體外鼠皮的制備：將健康大鼠用電動剃毛刀剃毛后處死，取腹部皮膚，剝離，剃毛皮膚，小心剔除皮下組織和脂肪等粘連物質，用無菌生理鹽水反復沖洗干凈，置于無菌生理鹽水中，密封、置低溫冰箱中保存。試驗前自然恢復至室溫，并檢查鼠皮的完整性。（3）透皮吸收實驗：將大鼠皮于37℃、無菌生理鹽水中解凍后剪成大小適宜的4塊，將4種小兒止瀉巴布劑貼于鼠皮上，與皮膚角質層一側緊密接觸，不留空氣，分別固定在4套透皮吸收實驗裝置的擴散室與接收室之間（透過面積2.30cm2，接收液體積為6.5cm3），在接收室中注入30%乙醇-生理鹽水，記錄加入的液量，溫度（37±0.5）℃，轉速150r/min恒速攪拌，記錄裝入時間，在2、4、6、8、10、24 h時精密取出接受液5 ml，同時補加30%乙醇-生理鹽水并排凈氣泡。取出的接收液經微孔濾膜（孔徑0.22m）過濾后，棄去初濾液，收集續濾液，按已確定的色譜條件進樣5μl，測定葛根素的含量，并計算累積滲透量。

1.3色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：ODS色譜柱（4.6mm×150mm，5m）；流動相：甲醇-水 （27：73）；流速1.0ml/min；檢測波長250nm；柱溫25℃。理論板數按葛根素峰計算應≥4000；分別吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl注入液相色譜儀。結果表明，葛根素峰與其他峰分離完全。

1.4方法學考察 （1）線性關系考察：精密稱取葛根素對照品21.2mg，置50ml量瓶中，加30%乙醇溶解并稀釋至刻度，制成濃度為0.424mg/ml的對照品儲備液。分別精密稱取一定量標準對照品儲備液，用30%乙醇定容至刻度，搖勻，得濃度為84.8、127.2、169.6、212.0、254.4、296.8μg/ml的系列溶液，分別取5μl進樣測定。以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得葛根素回歸方程y=21.192x-51.944，相關系數r=0.9999（n=6）。結果表明，葛根素進樣量在0.424～1.484mg之間呈良好的線性關系。（2）精密度試驗：精密吸取濃度為0.212mg/ml的葛根素對照品溶液5μl，重復進樣5次，測定峰面積 計算得平均相對標準偏差RSD為0.15%（n=5），表明該方法精密度良好。（3）穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12h進樣測定，記錄峰面積。經計算葛根素峰面積值的RSD為3.82%（n=5）。結果表明葛根素在12h內基本穩定。（4）加樣回收率試驗：精密量取已知含量的接受液5 ml，共6份，各精密加入一定量的葛根素對照品溶液，用0.22m微孔濾膜濾過，取續濾液作為待測溶液，測定并計算回收率，平均回收率為98.61%，RSD為2.05%（n=6）。結果表明，該方法回收率良好。

1.5數據處理方法 按公式Q=（Cn×V1+∑Ci×V2）/S……（i=1…n-1）計算單位面積累積滲透量［Q，（mg/ cm2）］。式中，Cn：第n個取樣點測得的藥物質量濃度（mg/ml）；Ci：第i（i=n-1）個取樣點測得的藥物質量濃度（mg/ml）；V1：接收液體積（6.5cm3）；V2：取樣體積（5.0cm3）；S：有效透皮面積（2.30cm2）。對4種小兒止瀉巴布劑以單位面積累計釋放量（Q）對t1/2作圖，進行回歸，該直線的斜率為滲透系數［Kp，mg/（cm2?h1/2）］。

2　結果

按上述測定方法，測定4種小兒止瀉巴布劑中葛根素的透皮釋放量，以Q對t1/2作圖，進行回歸，得出擬合方程及相關系數，并計算出滲透系數。結果顯示：葛根素的Q與時間t1/2呈線性關系。4%氮酮的滲透系數為不含滲透促進劑的2.1046倍；4%冰片的滲透系數為不含滲透促進劑的1.6117倍； 2%氮酮+2%冰片滲透系數為不含滲透促進劑的1.6788倍。實驗表明：小兒止瀉巴布劑的經皮滲透符合Higuchi方程，4%氮酮對小兒止瀉巴布劑中的葛根素有較好的促滲透作用，氮酮是小兒止瀉巴布劑的最佳透皮促進劑。

3　討論

體外透皮吸收試驗中接收介質的選擇：分別以生理鹽水、30%乙醇-生理鹽水溶液及pH為 7.4的磷酸鹽緩沖液［3～5］為接收介質，考察小兒止瀉巴布劑中葛根素經過大鼠腹部離體皮膚在不同接收介質中透皮滲透情況。結果顯示，pH 7.4磷酸鹽緩沖液組中體外透皮滲透量在0～24 h均未檢測到葛根素，說明pH 7.4磷酸鹽緩沖液不宜作為小兒止瀉巴布劑中葛根素的透皮吸收試驗接收介質。而30%乙醇-生理鹽水溶液與生理鹽水溶液相比，葛根素在30%乙醇-生理鹽水溶液中體外透皮滲透量有顯著性增加（P＜0.01）。因此本實驗選擇30%乙醇-生理鹽水溶液作為接收介質。同時對攪拌速度和水浴溫度進行了考察，結果發現磁力攪拌速度為150 r/min，水浴恒溫至（37±0.5）℃時即可滿足要求。

藥物透皮吸收的動力學擬合模型的選擇：藥物經皮滲透是符合菲克擴散定律的被動擴散過程，以濃度差為滲透原動力，本試驗分別采用Ⅰ級、○級、Higuchi方程進行擬合［6，7］，以相關系數r作為判斷標準。結果表明，葛根素的相關系數（r）大小順序為：Higuchi方程擬合＞一級方程擬合＞○級方程擬合。葛根素的Q與時間t1/2呈線性關系，小兒止瀉巴布劑的透皮吸收動力學符合Higuchi方程，含4%氮酮小兒止瀉巴布劑的滲透系數為0.6781 mg/（cm2?h1/2）。

巴布劑中的透皮促進劑的選擇：本試驗以葛根素的滲透系數為判斷標準，結果表明氮酮對小兒止瀉巴布劑中的葛根素有較好的促滲透作用。有文獻報道，氮酮對親水、親油性藥物均可增加其透皮吸收，尤其對親水性化合物的促滲透效果更佳。其機制是通過溶解角質細胞間和細胞內脂質，增加角質層的通透性，減少藥物擴散阻力，同時角質層的含水量也會提高，促進藥物經水性通道滲透［8］。

1趙桂福，李雁.中藥透皮吸收促進劑的研究進展.上海中醫藥雜志，2009，43（9）：82.

2李智勇，羅霄山，孫冬梅，等.痹痛巴布劑中多元復合透皮吸收促進劑的優選. 中國實驗方劑學雜志，2019，19（10）：42～45.

3郭偉英，王雨.葛根芩連巴布劑的制備與體外透皮研究.醫藥導報，2009， 28（3）： 351～353.

4秦海軍，馬玲，張毅，等.透皮吸收促進劑對小兒腹瀉凝膠膏經皮滲透性的影響.中國實驗方劑學雜志，2014，20（3）：39～41.

5王霞，吳勝林，曾凡波，等.布洛芬巴布劑的制備與體外釋放研究.醫藥導報，2011，30（10）：1345～1346.

6Figen Timaksiz，Zeynep Yuce.Development of transdermal system containing nicotine by using sustained release dosage design.Farmaco，2005， 60（9）：763.

7Dam Fitzpatrick，John Corish.Release characteristics of anionic drug compounds from liquid crystalline gels.Passive release across non-ratelimiting membranes.Inter J Pharm， 2005，301（1～2）：226.

8Williams A C，Barry B W.Penetration enhancers.Adv Drug Deliv Rev，2004，56（5）：603～618.

310006 浙江省中醫院