膽囊癌組織中Survivin蛋白的表達變化及其與Bcl-2、p53表達的關系

劉誼，李強

(1天津市兒童醫院，天津300074;2天津市腫瘤醫院)

膽囊癌是肝外膽道中最常見的惡性腫瘤，在我國消化道腫瘤中居第5位。膽囊癌的發生發展是多基因改變、多階段的復雜過程，聯合應用手術、放療、化療、生物治療等各種手段用于膽囊癌患者，但其預后并無明顯改善。Survivin蛋白是一種新型凋亡抑制因子，其基因位于染色體17 q25上，在幾乎所有的惡性腫瘤組織中均廣泛的表達。Bcl-2和p53是迄今為止研究的最深入、廣泛的腫瘤相關基因，與細胞凋亡密切相關，二者與Survivin的相關性是近來研究的熱點。本研究采用免疫組化法檢測膽囊癌、正常膽囊、膽囊息肉、膽囊炎組織中Survivin的表達，研究其與膽囊癌臨床特征的關系，并探討其與Bcl-2、p53表達的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇天津醫科大學附屬腫瘤醫院1995年1月～2005年1月收治的臨床及病理資料完整的原發性膽囊癌患者56例，其中男19例、女37例，年齡25～76歲、平均56.3歲。臨床 Nevin(1976)分期:Ⅰ期1例，Ⅱ期9例，Ⅲ期17例，Ⅳ期19例，Ⅴ期10例。組織學分化:高分化9例，中分化18例，中低分化14例，低分化15例。局部淋巴結轉移25例，伴有膽囊結石27例。所有患者均行根治術或擴大根治術，術前均未接受過放療或化療等任何治療。同時隨機選取膽囊炎患者15例、膽囊良性息肉患者15例、正常者10例作為對照。所有病例均經病理證實。

1.2 Survivin、Bcl-2、p53蛋白檢測 從病理科調取全部入組患者存檔的術后原始病理組織蠟塊，重新進行切片、制片，采用SP法［1］對切片進行預處理、涂膠、免疫組化染色，并選用已知陽性肝癌切片作陽性對照，用 PBS代替一抗作陰性對照，檢測 Survivin、Bcl-2、突變型p53蛋白。結果判定:Survivin和Bcl-2均表達于細胞質，p53表達于細胞核，細胞質或細胞核被染為淡黃色至棕黃色，染色強度明顯高于背景者為Survivin、Bcl-2或p53表達陽性;細胞質或細胞核無黃色染色或顯色強度與背景無明顯差別者為表達陰性。

1.3 隨訪方法 采用門診復查、電話及書信進行隨訪。生存時間為自手術治療之日至末次隨訪日或死亡的時間，以月為單位計算總體生存率，隨訪滿5 a截止。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。計數資料比較用χ2檢驗，生存率采用Kaplan-Meier方法計算;各變量與預后的關系采用單因素方差分析;相關分析采用Spearman相關分析法。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

Survivin蛋白在膽囊癌組織中的表達陽性率為73.2%(41/56)，在膽囊炎、膽囊良性息肉、正常膽囊組織中均無Survivin表達。與膽囊炎、膽囊良性息肉、正常膽囊組織比較，膽囊癌Survivin表達增強(P均＜0.05)。膽囊癌組織中Survivin蛋白表達與臨床病理特征的關系見表1。膽囊癌中Survivin的表達與患者的年齡、性別、臨床分期、組織學分化、是否有淋巴結轉移、是否伴有膽囊結石等均無相關性(P均＞0.05)。56例膽囊癌中29例p53蛋白陽性表達，陽性率為51.8%。p53表達陽性者中Survivin蛋白表達陽性率為86.2%(25/29)，p53表達陰性者中為59.3%(16/27)，兩者比較，P ＜0.05。56 例膽囊癌中34例 Bcl-2蛋白陽性表達，陽性率為60.7%。Bcl-2表達陽性者中Survivin蛋白陽性率為85.3%(29/34);Bcl-2表達陰性者中為54.5%(12/22)，兩者比較，P＜0.05。膽囊癌患者Survivin蛋白陽性表達的生存時間為(16.7±1.9)個月，中位生存時間(15.0±2.3)個月，其1、3年生存率分別為58.5%和4.9%。而Survivin蛋白陰性表達的生存時間為(26.5 ±4.3)個月，中位生存時間(27.0±5.8)個月，其 1、3 年生存率分別為 73.3% 和13.3%。兩者相比，Survivin陽性表達的膽囊癌患者1、3年生存率低于 Survivin陰性者(P均 ＜0.05)。詳見圖1。

表1 Survivin蛋白表達與膽囊癌患者臨床病理特征的關系

圖1 Survivin蛋白表達與膽囊癌患者生存率的關系

3 討論

細胞凋亡異常在許多人體惡性腫瘤的發病學上占有十分重要的地位。早在1967年，Iversen［2］就提出腫瘤的生長并不僅是生長迅速，同時其細胞的凋亡率也明顯減少。正常機體處在細胞增殖和凋亡的動態平衡中，二者的動態平衡被打破時就會形成腫瘤。Survivin在多種腫瘤中均可見其表達［3～9］。本研究采用免疫組化SP法檢測膽囊癌組織中Survivin的表達，結果表明Survivin在膽囊癌組織中高度表達，陽性率為73.2%，而在非腫瘤的膽囊組織中未檢測到表達，提示Survivin對膽囊癌的發生發展起重要作用。本研究顯示，Survivin的表達與膽囊癌患者的年齡、性別、臨床分期、組織學分化、是否伴有淋巴結轉移以及是否伴有膽道結石均無明顯相關性。Nigam等［3］定量評估了 Survivin在膽囊癌中的表達，血清Survivin蛋白濃度在109 pg/mL時診斷膽囊癌的敏感性為82.05%，特異性為93.33%。推斷Survivin的表達上調出現在膽囊癌發生的早期階段，通過抑制細胞凋亡促進腫瘤的發生、發展。研究Survivin在膽囊癌中的表達對膽囊癌的診斷和治療有重要的現實意義。同樣，檢測血清中抗Survivin抗體及膽汁脫落細胞的Survivin表達水平將有助于膽囊癌的早期診斷。另外，由于Survivin具有很強的抗凋亡作用，對其阻滯可能成為膽囊癌基因治療的新靶點［10］。

本研究結果顯示，膽囊癌組織中Bcl-2的表達與Survivin蛋白表達有密切關系。Bc1-2基因定位于染色體18q21，Survivin基因定位于染色體17q25上，此位點不穩定時可能涉及t(14;18)(q24;q21)易位，使Bcl-2基因轉位到14號染色體免疫球蛋白重鏈JH片段，導致Bcl-2基因轉錄激活而表達失控;而且Survivin和Bc1-2基因均能通過富含鳥嘌呤和胞嘧啶的啟動子調節，并在增生活躍的細胞中轉錄。推測Survivin和Bcl-2可能有共同的轉錄激活機制，兩者協同發揮抗凋亡效應。本研究還表明，p53可負性調節Survivin表達。在體內外多種致DNA損傷因素的作用下，p53-Survivin信號轉導途徑被激活，使細胞周期停滯在G1/S期并誘發細胞凋亡。但在轉化細胞中，由于p53基因發生突變，其功能喪失，致使Survivin表達增高，細胞周期停滯在G2/M期，細胞凋亡減少，最終導致腫瘤的發生。目前，這一推測在急性淋巴細胞白血病中已經得到了證實［11］。此外，在胰腺癌、胃癌、結腸癌中也有類似報道［4，5，12］。

本研究發現Survivin蛋白陽性表達的膽囊癌患者1、3年生存率明顯低于 Survivin陰性表達者。Nigam等［3］的研究也得出了相似的結論。但目前關于Survivin的生物學特性及其具體調控機制還不十分明確，針對Survivin的靶向基因治療所采用的分子拮抗劑、所需載體、轉移途徑和療效方面還需進一步研究。相信隨著分子生物學和生物工程學等各種學科的發展，針對Survivin的靶向基因治療可能會為腫瘤的治療帶來新的生機。

［1］陳罡，侯巧燕，陳峰，等.免疫組化SP法操作程序的規范和改良［J］.醫學文選，2004，23(4):419-421.

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