威靈仙化學成分及生物活性研究進展

張敏

(上海中醫藥大學附屬曙光醫院 中藥房，上海 201203)

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威靈仙化學成分及生物活性研究進展

張敏

(上海中醫藥大學附屬曙光醫院 中藥房，上海 201203)

威靈仙具有祛風除濕、通絡止痛的功效，一直是中醫臨床治療風濕痹痛的要藥。為了進一步研究和開發威靈仙，本文就其品種鑒定、炮制工藝、化學成分及藥理作用研究進展作如下綜述。

威靈仙；鑒定；炮制；化學成分；生物活性

威靈仙來源于毛莨科植物威靈仙ClematischinensisOsbeck、棉團鐵線蓮ClematishexapetalaPall.或東北鐵線蓮ClematismanshuriaRupr.的干燥根和根莖。秋季采挖，除去泥沙，曬干[1]。又名靈仙、九草階、百條根、青龍須、小黑藥等。在我國各地均有分布，主要產于滇、桂、蘇、皖、浙等地的山野、田埂及路邊的灌木叢中，現在也有人工培植，夏秋季采挖。

威靈仙入藥始于《新修本草》，本品辛、咸，溫，具有祛風濕，通經絡的功效。為臨床廣泛使用的中藥，多用于風濕痹痛，肢體麻木，筋脈拘攣，屈伸不利等癥，治療風濕性關節炎、類風濕關節炎、骨鯁咽喉、乳腺炎及癰瘡等[2]。隨著現代科學技術及診療技術的發展，威靈仙中的化學成分逐步清晰，醫家也發現威靈仙藥理作用除了具有上述作用外，還有抗腫瘤、降血糖、保肝及降血壓等作用[2]，并且日益引起醫家的興趣和重視，因此為了進一步研究和開發威靈仙，有必要就其品質鑒定、炮制工藝、化學成分及藥理作用研究進展作一綜述，為藥學領域學者提供參考。

1 品種鑒定

威靈仙屬于多基源藥用植物，在我國國內分布較廣泛，臨床應用較為廣泛。作為常用中藥，地區用藥習慣的差異性較大，導致威靈仙使用混亂現象比較嚴重，而且隨著威靈仙需求量的逐漸增加，市場上藥材混偽品數量和種類也越來越混雜,有必要對威靈仙以及混偽品進行鑒別研究。

馮杉杉等[3]利用DNA條形碼技術對中藥威靈仙及其偽品進行鑒別，綜合鑒別效率和擴增成功率，推薦使用psbA-trnH 序列作為威靈仙藥材及其偽品的鑒別序列。安蕊等[4]建立了聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性方法(single strand conformation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products，PCR-SSCP)技術快速、準確鑒別威靈仙藥材基原的方法。能夠快速、準確地鑒別威靈仙藥材基原。鄭安勇等[5]以核基因ITS2 片段為DNA 條形碼鑒定中藥材威靈仙，其3個基原植物為毛茛科威靈仙、東北鐵線蓮、棉團鐵線蓮，其序列長度分別為230、230、220 bp；威靈仙藥材正品來源的3種植物聚集為一枝，其支持率為83%；威靈仙與混偽品在二級結構上具有明顯的差異。說明核基因ITS2 片段作為DNA 條形碼能夠穩定以及準確地鑒別中藥材威靈仙以及混偽藥品。孟祥松等[6]從全國四大藥材市場安徽亳州、成都荷花池、河北安國、湖南廉橋等地采購威靈仙飲片40批，根據《中國藥典》(2010年版)[1]一部中規定的方法進行鑒別、檢查、浸出物和含量測定。結果40批市售威靈仙飲片中鑒別、水分均符合標準規定；總灰分有12批不符合標準規定，酸不溶性灰分有19批不符合標準規定，浸出物均不符合標準規定，含量測定僅有10批符合標準規定。可見有關行政職能部門尚須加大對中藥市場的監督和管理力度。李倩倩等[7]對不同品種威靈仙藥材進行質量調查。通過優化《中國藥典》2010年版威靈仙含量測定項[1]下方法，并測定威靈仙樣品中常春藤皂苷元和齊墩果酸的含量。所測30批樣品中僅有3 批威靈仙Clematischinensis藥材中常春藤皂苷元和齊墩果酸的含量符合《中國藥典》2010年版規定的標準；東北鐵線蓮C.manshurica藥材中齊墩果酸質量分數大于0.30%，但常春藤皂苷元含量極微；棉團鐵線蓮C.hexapetala中未檢測到常春藤皂苷。

2 炮制工藝

威靈仙傳統的炮制方法有酒制、醋制、麩炒等，現行主要為酒制，中醫認為酒制能引藥上行，增強威靈仙祛風除濕、通絡止痛的作用，用于風濕痹痛、肢體麻木、筋脈拘攣、屈伸不利等癥。臨床常用飲片有威靈仙、酒威靈仙等。

張余生等[8]采用小鼠扭體法、熱板法進行鎮痛作用研究，以鎮痛、抗炎為指標，對威靈仙不同炮制品進行分析研究，發現不同炮制品均具鎮痛、抗炎作用，其中以酒炙威靈仙的作用較強；趙紅巖等[9]研究發現威靈仙、仙茅生品和酒炙品藥性的顯著變化正是其化學成分整體變化所導致的，有效成分溶出增加，毒性成分降低；由于中藥成分復雜，郝寧等[10]以威靈仙中的齊墩果酸、常春藤皂苷元以及總皂苷含量的總評歸一值為質量控制指標，采用正交設計，考察黃酒濃度、黃酒用量、悶潤時間、切段長度對炮制工藝的影響，優選威靈仙的最佳炮制工藝為：切短段(15～20 mm)、加入14 ℃的黃酒、每100 g藥材使用25 mL的黃酒、悶潤45 min、使用文火炒制炮制品的總評歸一值為最高。

3 化學成分

3.1 揮發性成分 藥理研究表明，威靈仙所含的揮發性成分是其發揮藥理作用的主要物質基礎之一[11]。威靈仙揮發性成分較多，中藥威靈仙3種原植物中揮發性成分主要是棕櫚酸和亞油酸，2者占總揮發性成分的50%左右。

江濱[12]鑒定了棉團鐵線蓮揮發油包含有棕櫚酸、3-羥-4-甲氧基苯甲醛和二十碳烷等為主要成分的61種化學成分。何明等[13]采用水蒸汽蒸餾法和超臨界CO2流體萃取技術分別從威靈仙中提取出揮發性成分，其主要成分為有機酸、有機酸酯、苯丙素、倍半萜、酚類。辛廣等[14]對千山東北鐵線蓮花揮發油成分進行分析，鑒定出山崳酸甲酯等7種成分。楊美林等[15]對東北鐵線蓮果的揮發油成分進行了分析，其揮發性成分主要為棕櫚酸、二十二烷、十六酸乙酯等。Zeng YX等[16]比較了鐵線蓮屬5種植物莖、葉揮發性成分的種類及含量。其中鑒定出威靈仙揮發性成分69種，含量占總揮發性成分百分比不低于0.1%的化合物有54種；棉團鐵線蓮揮發性成分67種，含量不低于0.1%的化合物有42種。

3.2 非揮發性成分 威靈仙中含有的非揮發性成分主要有三萜及其苷類、黃酮及多元酚類、內酯類和生物堿類等[11]。

3.2.1 三萜及皂苷類化合物：威靈仙中所含皂苷均為五環三萜類齊墩果烷型，有齊墩果酸，常春藤皂苷元，所結合的糖主要為鼠李糖、核糖、葡萄糖、阿拉伯糖。早在20世紀70年代，日本學者Haruhisa Kizu和Tsuayoshi Tomimor就從威靈仙根總皂苷的KOH水解物中分離出威靈仙皂苷CP0,CP1,CP2等[17]。Shao BP等[18-19]從威靈仙乙醇提取物中分離得到11個三萜苷和2個三萜苷元，其中3個三萜苷為新的天然產物：Clematichinenoside A、B、C。董彩霞等[20]從棉團鐵線蓮分離得到了木栓酮(friedelin)。李淑子等[21]從東北鐵線蓮莖葉的乙醇溶液中分離得到了3-O-乙酰基齊墩果酸-12-烯(3-O-acetyl-12-en oleanlin acid)和18α-齊墩果酸(18α-oleanlic acid)。Mimaki Y等[22]從威靈仙中分離得到8個三萜皂苷，其中5個新皂苷，其苷元均以齊墩果酸為基本母核。Shi SP等[23]從東北鐵線蓮中分離得到7個三萜皂苷，其中4個為新化合物。董彩霞等[20]從棉團鐵線蓮分離得到了木栓酮(friedelin)。He M等[24]從水蒸氣蒸餾提取后的藥渣中分得一種新的皂苷Clemaphenol A。史記等[25]考察不同采收期東北鐵線蓮藥材中靈仙新苷( Clematichinenoside AR) 含量，發現東北鐵線蓮藥材的最佳采收期為8 月下旬到9 月中旬。

3.2.2 黃酮及多元酚類：Shi SP等[26]從東北鐵線蓮中分離到3個新的酚苷化合物：Clemomandshuricosides A、B、C。此外還有1個簡單酚酸類化合物。Dong CX[27]等從棉團鐵線蓮中分離得到了12個黃酮類化合物,染料木素(genistein)、鳶尾苷(tectoridin)等。

3.2.3 生物堿類化合物：Shi SP等[28]從東北鐵線蓮的根中分離得到3個新的生物堿:甲基7-乙氧基-3-吲哚碳酸鹽、甲基7-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基3-吲哚碳酸鹽和α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基3-吲哚碳酸鹽。

3.2.4 其他類成分：威靈仙還含有阿魏酸(Ferulic acid)、香草酸(Vanillic acid)[26]、棕櫚酸(Palmitia acid)、亞油酸(Linoleci acid)、異阿魏酸(Isoferulic acid)[24]、丁香酸(Syringic acid)[29]等小分子有機酸類化合物。

宋文猗[30]采用原子吸收分光光度法測定威靈仙中含有Zn、Ca、Fe、Ni、Mg等微量元素。何明等[31]利用硅膠柱色譜分離純化得到2種新化合物Clemapenol A和氫-4-基-5-甲基-2(3H)-呋喃酮；Shao B等[32]從威靈仙中分離獲得酚類化合物。

4 藥理作用

4.1 鎮痛抗炎作用 威靈仙注射劑能顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹，能顯著抑制紙片引起的大鼠肉芽組織生長[33]。于舒雁等[34]通過對威靈仙的外用實驗研究，發現3種威靈仙水煎液均能改善大鼠痔瘡模型肛周潰瘍癥狀，加速痔瘡創面修復，促進愈合，減輕肛周腫脹；減輕大鼠關節炎模型足跖腫脹，改善關節腫脹及屈伸不利癥狀，降低血清炎癥因子IL-1β，TNF-α水平。苗明三等[35]證明威靈仙能減輕大鼠足跖度腫脹度，明顯減輕小鼠的耳腫脹度，提高小鼠痛閾值，外用具有好的抗炎鎮痛作用。徐先祥等[36]發現威靈仙總皂苷可改善佐劑性關節炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠的踝關節組織病理改變。劉光耀等[37]證明威靈仙不同提取部位的抗炎作用效果不同，抑制炎癥因子的分泌和釋放可能是威靈仙發揮抗炎作用機制之一。鄧龍飛等[38]發現威靈仙總皂苷(TSC)降低AA 大鼠JAK2、STAT3 mRNA表達并抑制p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3相對表達，抑制JAK2/STAT3信號通路。汪永忠等[39]研究證實威靈仙總皂苷對AA大鼠具有較好的治療效果，其機制可能與抑制IL-6和提高IL-10的含量，抑制p-JAK2、p-STAT3 蛋白的表達，從而調控JAK2/STAT3通路有關。孫必強等[40]研究表明威靈仙關節腔離子導入可能具有抑制炎癥相關因子NO、PGE2的釋放和增強SOD的活性來減緩OA的病變過程。

4.2 抗腫瘤作用 邱光清等[41]對威靈仙不同部位的提取物進行了抗癌活性研究，發現其總皂苷的抗癌活性較好。趙英等[42]證實威靈仙總皂苷對小鼠移植性肉瘤S180，肝癌腹水型HepA、白血病腹水型P388腫瘤均表現出明顯的抑制作用。Lee SW等[43]研究發現，東北鐵線蓮30%乙醇提取物的正丁醇層可以抑制由癌基因抑活藥誘導引起的大鼠軟骨細胞的多種Bcl-2抗凋亡家族蛋白Bcl-xl和Bcl-2的下調以及Bcl-2促凋亡家族蛋白Bax的上調，同時也抑制癌基因抑活藥誘導引起的大鼠軟骨細胞線粒體前體抗凋亡蛋白14-3-3的下調，起到抑制由癌基因抑活藥誘導引起的大鼠軟骨細胞的凋亡的作用。張杰等[44]研究證明威靈仙多糖促進BGC-823細胞凋亡，其機制可能與抑制Survivin基因表達有關。李俊妍等[45]研究發現威靈仙多糖對人舌鱗癌細胞Tca-8113的生長具有明顯的抑制作用，隨著威靈仙多糖濃度的增大或作用時間延長，抑制作用逐漸增強，呈一定的劑量和時間依賴關系。張杰等發現威靈仙多糖能促進Bel7402細胞凋亡[46]，還發現威靈仙多糖能抑制MCF-7細胞增殖，促進其細胞凋亡，其機制可能與激活Fas、抑制Bcl-2的基因表達有關[47]。

4.3 抗微生物作用 威靈仙抗菌抑菌活性成分主要是白頭翁素和原白頭翁素。原白頭翁素不穩定，易聚合為白頭翁素；白頭翁素具有顯著的抗菌作用，對葡萄球菌、鏈球菌、白喉桿菌的抑菌濃度為1:12 500，對結核桿菌為1:50 000，對大腸肝菌也有類似抑菌作用，對革蘭陰性菌有效，與鏈霉素有協調作用，且有強的殺真菌活性的作用[48]。

4.4 抗腎間質纖維化作用 張翠薇等[49]研究發現威靈仙對UUO 模型大鼠腎小管間質具有保護作用，可能與降低腎間質中α-SMA 的表達和改善模型大鼠的血液流變學異常有關。

4.5 抗實驗性肝纖維化作用 向虹等[50]證實威靈仙能有效干預實驗性肝纖維化，且與虎杖、丹參、易善復無明顯差異。

4.6 降壓延緩老年斑形成作用 威靈仙中黃酮類、酚類等天然產物含量較少，但具有較強的酪氨酸酶抑制活性，限制酪氨酸向黑色素的轉化，從而減少雀斑、黃褐斑、老人斑等形成[51]。

4.7 利膽排石作用 威靈仙的醇提物不僅可促進狗膽汁的分泌，而且能松弛狗總膽管末端括約肌，證明其具有較好的利膽作用[52]。威靈仙配以硝石沖服，可能對于結石基質的膠體具有一定溶解作用[53]。

4.8 降血尿酸 林鳳平等[54]發現，威靈仙制劑不僅能顯著降低血尿酸，而且具有極強的抗炎作用，故而能有效地保護腎臟。

4.9 降血糖作用 威靈仙浸劑對正常大鼠有明顯增強葡萄糖同化的作用，故可能有降血糖的作用[55]。

4.10 降血清膽固醇作用 威靈仙大劑量組(20%煎劑0.5mL)給金黃地鼠灌胃，能降低血清膽固醇的水平[56]。

4.11 抗白血病作用 黃莉等[57]研究發現威靈仙總皂苷可有效抑制NB4 細胞增殖，但對NB4 細胞無明顯的誘導分化作用，還發現[58]提取威靈仙總皂苷，體外作用于急性早幼粒細胞白血病HL60細胞，可以在體外可有效抑制HL60 細胞增殖，并誘導HL60細胞凋亡，但對HL60細胞無明顯的誘導分化作用。

4.12 改善血液微循環作用 楊文雁等[59]發現威靈仙不同部位具有改善小鼠耳廓微循環作用，其作用強弱依次為: 正丁醇部位、乙酸乙酯部位、石油醚部位和水部位，其機制可能與抑制腎上腺遞質所激活的信號通路有關。

4.13 安全性研究 大多數文獻記載威靈仙為有毒之品，在大劑量或長期用藥的情況下，出現毒性。廖海浪等[60]研究發現威靈仙及其地方習用品的急性毒性較低，對肝腎的損傷程度為：山木通<柱果鐵線蓮<威靈仙。表明威靈仙對小鼠的肝腎組織有一定損傷，提示《中國藥典》2010 年版記載威靈仙為無毒之品，值得商榷。

5 結語

威靈仙屬于多基源的常用臨床中藥品種，其化學成分及生物活性研究已日趨豐富。尚有許多問題需要進一步研究:①關于威靈仙的品種鑒別，2015版中國藥典一部公示后，中檢院反映，在所測威靈仙樣品中未檢出常春藤皂苷元，也有企業提出，按照藥典標準買不到合格的藥材，建議取消含量測定項下“常春藤皂苷元”。通過本文綜述，歸納目前有不少基于分子生物學水平的威靈仙品種鑒定技術，建議進一步將相關技術簡化，便于操作，使之適用于藥檢所及企業的質檢。②目前威靈仙部分生物活性研究還不夠深入，如抗腫瘤研究涉及的腫瘤種類較少, 作用機制也不夠深入。③威靈仙的功效已眾所周知，但也具有一定的毒性，藥學工作者及臨床醫師應更加重視其安全性研究。綜上所述，威靈仙具有豐富多樣的生物活性，其在臨床和實驗方面還需進一步的深入研究，為其在臨床的廣泛應用提供充足的依據和堅實的基礎。

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(編校：王儼儼)

Research advances on chemical constitutes and biological activities of Radix et Rhizoma Clematidis

ZHANG Min

(TCM Dispensary, Shanghai Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China)

Radix et Rhizoma Clematidis as a key traditional Chinese medicine with function of wind-dampness-dispelling and stasis-resolving has been widely used in clinical of Chinese medicine.For the further study and development of Radix et Rhizoma Clematidis, we reviewed the identification, processing, chemical constitutes and biological activities in this article.

Radix et Rhizoma Clematidis; identification; processing; chemical constitutes; biological activities

張敏，女，大專，藥師，研究方向：傳統中藥藥性研究，E-mail：kongzhangmin@163.com。

R284

A

1005-1678(2015)07-0165-04