豬人工授精技術的操作規程

李 杰

(杭州大觀山種豬育種有限公司，浙江杭州311115)

豬人工授精技術是養豬生產中經濟有效的技術措施之一，是種豬培育和商品豬生產的有效方法，也是實現養豬生產現代化的重要手段。

人工授精技術的最大優點是可以明顯減少公豬的飼養數量，增加優良公豬的利用機會，從而提高豬群的整體質量。

1 后備公豬的調教

1.1 調教要求

一是后備公豬達7 ～8月齡，體重120 kg 以上，健康無病、營養良好、精力充沛，并已經有過與母豬接觸訓練者，方可開始采精調教。調教宜在早上喂食前(如已喂食，則不能馬上調教，需休息0.5 h 以后進行)，盡量選擇晴天更好。調教前任公豬在室外適當運動對調教工作有一定好處。

二是采精欄要清掃干凈，移去一切能影響公豬注意力或可能妨礙調教的雜物，然后將公豬趕入采精欄調教。調教前應剪除公豬包皮外長毛，擠去包皮內積尿，用0.1%高錳酸鉀溶液擦拭消毒包皮周圍和腹下部位，用清水洗凈擦干。

三是采精人員要使公豬集中精力于采精臺并誘導其爬跨。調教時間以10 ～20 min 為宜，一次不成第2 d 再進行;在調教中如若發現公豬有厭煩、對臺豬無興趣或爬跨受挫、情緒不佳時應立即停止本次調教。在整個調教過程中切忌對公豬粗暴鞭打和大聲呵斥，爬跨姿勢不當要耐心幫助糾正。適當保持與公豬的距離，以防公豬攻擊。公豬如果調教成功，應隔天再采精，以鞏固調教效果。以后每周采精1次，堅持1 個月。

1.2 調教措施

一是采精臺上可潑灑適量發情母豬尿液、其他公豬的精液或唾沫，通過強烈氣味刺激公豬性欲和爬跨。

二是公豬包皮外按摩陰莖有促使勃起的作用，或站在采精臺一側，與公豬相對誘導其爬跨。

三是在其他公豬采精時讓被調教公豬隔柵觀摩以激起其性欲，但要注意隔離，不能任兩頭公豬直接接觸而發生斗毆。

四是采精時可先采已調教好的公豬，完畢后再趕入需調教公豬，讓其嗅聞前一頭公豬在采精臺上留下的強烈氣味，以激起性欲。

五是將一頭發情旺盛的母豬帶至采精臺旁，任被調教公豬爬跨，經過數次爬跨公豬性欲達到高潮時趕離母豬，轉而引導公豬爬跨采精臺。

2 采精前準備

2.1 采精欄和采精臺清掃 采精欄和采精臺要打掃干凈，移去一切可能影響公豬注意力或妨礙采精的雜物，但不能用水沖洗，防止地面濕滑。采精欄內不能抽煙和留有煙味及其他異味。

2.2 采精用品準備 采精用品包括采精杯，玻璃棒，溫度計，載玻片，蓋玻片，濾紙，橡皮筋，一次性保鮮袋及手套，光學顯微鏡等。直接接觸精液的物品均須嚴格消毒，使用前放入40℃的恒溫鼓風干燥箱中干燥和預熱。

2.3 稀釋液制備 應用蒸餾水器制備足夠雙蒸水，倒入1000 mL 放有磁珠的燒杯中，一般加入一包稀釋粉，然后放置攪拌器上攪拌，待燒杯中稀釋液完全澄清后(一般需15 ～30 min)停止攪拌，最后將稀釋液倒入消毒后的干凈瓶內(如500 mL 生理鹽水玻璃瓶)，置于35 ～36℃的恒溫水浴鍋內加熱。新配制的稀釋液應靜置1 h 左右以穩定pH 值和滲透壓，方可用于稀釋精液。

3 采精技術

3.1 徒手法采精 徒手法采精由于不需器械，方法簡便，可分段收集精液，因此已被世界各國普遍采用。將準備采精公豬趕入采精欄內，等待其爬跨。一般需跨上爬下數次，待性欲旺盛后方才穩定，采精人員可從側后接近公豬進行采精。采精人員一手戴上雙層一次性手套，一手拿套有濾紙的采精杯。用帶有手套的手擠去包皮內的積尿和污垢，用0.1%高錳酸鉀溶液擦拭消毒包皮周圍和腹下部位，再用清水洗凈擦干。當公豬爬上采精臺，等豬后軀連續幾次挺出陰莖時，摘掉外面的臟手套，迅速用手握住陰莖龜頭螺旋部分，拇指輕輕按摩龜頭頂端，四指適當施壓，壓力由小到大，緊隨陰莖的抽動不放手，隨著進一步勃起順勢拉出陰莖。在整個過程中要避免陰莖部位碰到采精臺或公豬體表部位，以防陰莖特別是龜頭部位擦傷和避免可能存在的污染。射精開始后即移開拇指，仍然保持節律性施壓，另一手用采精杯接住射出的精液。采精時盡可能使陰莖保持水平狀態或略微朝上，以防包皮積尿流入采精杯而污染精液。

公豬射精后，開始射出的多為清亮精清，因比較臟，不宜接入集精杯內。然后射出稍稠、乳白色、富含精子的精液。以后射出的精液或稀或稠交替出現，膠粒會伴著精液一同射出，數量以膠粒為多，可用拇指隨時撥除，以免影響精液采集或掉入采精杯影響精液過濾。公豬射精一次后要停頓片刻，陰莖來回抽動幾次后才能再次射精，采精人員要緊握陰莖并再次施壓，按摩龜頭促使其再次射精。一般可反復2 ～3 次。最后射出的精液則很稀，無任何使用價值，但一定要保證射精過程完整，使公豬感到興奮，以維持較好的性反射。

射精完畢后，采精人員要順勢將陰莖送回包皮內，迅速站起離開，防止公豬突然倒下或跳下時會壓踩到采精人員。最好任公豬自行爬下采精臺，如有困難者(尤其是老年公豬)，應適當輔助讓其爬下采精臺，以免公豬(如肢蹄)受傷，待其恢復常態后趕入原飼養欄內。

3.2 假陰道法采精 假陰道法是借助模仿母豬陰道功能的器具，只能采集全份精液，要求有一定設備，清洗費時費力，目前應用較少。優點是能維持適宜的溫度與壓力、防止公豬陰莖和精液不受污染。如外界氣溫較低，手握法易使公豬陰莖遇冷回縮，或引起射精不完全，采用假陰道法則可防止類似情況發生。

采精前先在洗凈、消毒、干燥的假陰道內涂抹少量潤滑劑(如液體石蠟);夾層內注入總容量達2/3的40℃溫水，插上雙連球充氣;連接帶保溫護套的集精瓶。當公豬爬上采精臺后，采精員在假陰道開口處接納公豬陰莖，通過雙連球有節律地施加適當壓力，以增加其快感。假陰道應向懸掛集精瓶處傾斜，以防精液倒流。公豬射精完畢后，隨著陰莖的軟縮應逐漸放掉假陰道內空氣，取下集精瓶，嚴防臟物落入集精瓶內而污染精液。

4 精液品質檢查

精液常規檢查項目有:精液量、色澤、氣味、pH值、活力、密度等。

可作定期檢查項目有:死活精子比例、畸形率、精子存活時間、美藍褪色時間、抗力系數等。

采集后的精液必須立即進行檢查。

4.1 精液量 精液的密度近似于1 g/mL，所以可通過電子秤稱重來計算精液量。

4.2 色澤和氣味 正常的豬精液為乳白色，略有腥味，乳白色程度越深說明精子密度越大。如呈粉紅色則可能混有血液;黃綠色帶有異味則混有濃液;黃色則混有尿液。各種色澤、氣味異常的精液應廢棄禁用，查找發生原因，及時采取措施。

4.3 pH 值 新鮮精液可用精密pH 試紙或酸度計測定。正常豬精液pH 值為7 ～7.5，如果精液中含有大量微生物污染或含大量死精時，可使pH 值上升而呈偏堿性，可使精子存活率、受精力和保存效果受到明顯影響。

4.4 活力 采精、稀釋后，保存、輸精前都要進行精子活力檢查。觀察精子活力必須在35 ～38℃的顯微鏡恒溫臺或可置入顯微鏡的保溫箱中進行，在100 ～150 倍顯微鏡下觀察。低溫保存的精液必須先緩緩升溫。將需要檢查的精液輕微搖動或用玻璃棒稍稍攪動至均勻，滴在載玻片蓋上蓋玻片后檢查。活力采用十級評分，即按一個視野中直線前進運動精子的估計百分比分成十級，從0 開始，活精子每上升10%，評分上升0.1 分。凡作旋轉運動、原地擺動的精子均不作活精計算。旋轉運動或倒退運動的精子往往是受到冷休克或稀釋液與精液不等滲等原因所致，有可能恢復正常;原地擺動則是精子衰老即將死亡的標志。一般精子活力在0.6 以下不宜作輸精用;用于稀釋保存或做凍精的原液精子要求活力在0.8 以上。

4.5 密度 測定精子密度，一般可采用估測法或光電比色計法測定。

估測法估測精子密度簡便易行，常與精子活力測定(原精)同時進行，根據顯微鏡觀察精子間的間隙大小分為密、中、稀三級。密級:精子間空隙很小，小到容不下1 個精子;中級:精子間有一定空隙，可容納1 ～2 個精子;稀級:精子間空隙很大，可容納2 個以上精子。

光電比色計法測定精子密度是將精確計數的精液以不同比例稀釋制成標準管，用光電比色計測定其透光度，制成透光度和密度的對照表或曲線圖。將需要測定的精液樣品先在光電比色計上測得透光度，便可在對照表或曲線圖中查出其密度。該法要求測定精液必須將膠狀物等過濾干凈，以免影響測定的準確度。

4.6 死活精子比例 以伊紅(剛果紅)―苯胺黑(苯胺蘭)染色涂片檢查，死精主要因精子頭部在苯胺黑的暗背景中可被染成紅色，活精則因其機能的半透過性膜能防止色素侵入，故不著色。由于非直線前進運動的精子亦不著色，故采用該法得出的測定結果常比直接鏡檢方法要高，一般只適用于新鮮精液檢查。

4.7 畸形率 精子形態是否正常和受精力密切相關，畸形率是其中一項重要的檢查項目。具體步驟是制片―陰干―酒精固定―漂洗―陰干―染色(紅、藍墨水，美藍，龍膽紫均可)―陰干，然后在顯微鏡(400 倍)下觀察計數。檢查精子總數應不少于200 個，計算出畸形精子的百分率。常見的畸形精子類型有:頭部巨大，圓形，細長或雙頭;頸部膨大，纖細，屈折，帶有原生質滴;中段膨大，纖細，彎曲，雙體，帶有原生質滴;主段短小，彎曲、雙尾和帶原生質滴等。如精子畸形率超過20%，則禁止用作輸精用，公豬則應停用一段時間，改善環境，加強飼養，恢復正常后再采精使用。

4.8 精子存活時間 精子存活時間是指精子在體外的一定條件下能生存的時間。通常將精液稀釋后置于0℃冰箱中，定時取出少量精液逐步升溫至37℃，用顯微鏡檢查，每天2 ～3 次，直到精子全部死亡或只有搖擺運動時止，所需總的時數即為精子存活時間。存活時間越長，說明精子活力越強，品質越好。

4.9 美藍褪色時間 美藍是氧化還原指示劑，氧化時呈藍色，容易氫化還原而褪色。因為精液中有去氫酶，活精在呼吸時氧化脫氫而使美藍還原成無色。美藍褪色時間也就可以作為精子代謝能力的一個簡明標志，也能反映出精子活力和密度的高低。一般以含0.02%美藍的生理鹽水與4 倍量的精液混勻，裝入1 mL 小試管中，以石蠟封口隔絕氧氣，放在40℃下觀察褪色所需時間。

4.10 抗力系數 抗力可大致表示出精子在體外對所處環境的生活力。方法是在0.02 mL 精液中逐次加入1%氯化鈉溶液10 mL，同時用顯微鏡觀察精子的存活狀況，直至精子全部死亡，加入氯化鈉溶液總量與精液量之倍數即為抗力系數。

5 精液稀釋

通過檢查精液的精子密度、活力、數量，結合輸精的母豬頭數，以確定稀釋倍數。一般要求每mL稀釋精液中含有0.5 億個以上的精子數，保證每頭母豬每次輸精后獲得80 mL 輸精量時能有不少于40 億個有效精子。

例如:某公豬一次采精量為200 mL，活力為0.8，密度為2 億個/mL，則總精子數為400 億個，按每瓶需要40 億個精子，可以稀釋成10 瓶，按每瓶精液80 mL，需要向200 mL 精液中加入稀釋液600 mL。

用稀釋液稀釋精液時，先用溫度計檢查稀釋液和精液溫度，當兩者溫差不超過1℃時才能稀釋，稀釋時最好用玻璃棒引流，將稀釋液沿玻璃棒緩慢導入精液中，并用玻璃棒緩慢攪拌。當稀釋倍數大時，先低倍(1－2 倍)稀釋，靜置1 min 后，再稀釋。精液稀釋后靜置片刻對精子的活率再次鏡檢，確定正常后分裝，或輸精或逐步降溫、保存。

6 精液的分裝與保存

6.1 稀釋后的精液經再次檢查合格后，方可進行分裝(每瓶80 ～100 mL)，將精液緩慢沿瓶壁倒入輸精瓶內，擠出瓶內的空氣，最后蓋上蓋子。貼上標簽，標明公豬品種、耳號、采精日期。

6.2 分裝好的精液置于合適溫度下(22℃～25℃)1 h，其間要避免強光直射，待精液冷卻后平放入17℃冰箱中，保存期間每隔12 h 搖勻一次精液(上下顛倒)，防止精子沉淀凝集死亡。

6.3 定期檢查冰箱內溫度，確保冰箱內溫度的準確性。平時應盡量少開啟冰箱門，以免內外溫差對精子活力產生影響。

7 發情母豬鑒定

母豬的發情一般經歷發情前期(2 ～4 d)、發情期(1 ～3 d)和發情后期(1 ～3 d)，期間可見行為、外陰和黏液變化:食欲顯著下降，甚至廢食，圈內走動，時起時臥，爬墻、拱地、跳欄，允許公豬接近和爬跨。用手按其臀部，出現靜立反射。幾頭母豬同欄時，發情母豬爬跨其他母豬。外陰粘膜呈紫紅色，粘液多而濃。靜立反射行為的確定是判斷母豬發情的最佳依據。

發情母豬的靜立反射是在自身雌激素水平的升高和公豬分泌外激素的相互作用下發生的。所以利用公豬試情對準確判斷靜立反射是最好的方法，通過每天短期接觸公豬能增強其靜立反射。在利用公豬試情時同時綜合其它發情癥狀進行判斷，準確性將更高。

受配期的母豬外陰由鮮紅轉紫紅或淡紅，腫脹稍退出現微皺;黏液量多且稠，可拉成短絲;行為上狂躁和靜立交替出現。有人進入豬欄內就移臀部靠近，推之不動，壓背不走，且有弓背反應;觸摸肋部、推搡臀部，尾漸上舉，黏液增多，身體微顫，表現出靜立反射。

8 輸精技術

8.1 輸精時間判定 一般母豬在發情后24 ～48 h內排卵，排卵高峰期在發情后36 h 左右，排卵時間持續10 ～15 h，卵子保持受精能力的時間是8 ～10 h，精子在母豬生殖道內保持受精能力的時間是24 h。發情期短的母豬(如經產老母豬，培育母豬)開始排卵早，應提前輸精，發情期長的母豬(如初配母豬，本地母豬)開始排卵較晚，輸精時間要適當延遲。

首次輸精時間應在出現靜立反射(接受公豬爬跨)后的6 ～10 h，經12 h 后進行第二次輸精。經產母豬可根據斷奶后發情間隔確定輸精時間，有試情公豬時，斷奶后5 d 內發情的經產母豬出現靜立反射后12 h 進行第一次輸精;斷奶后6 d 以上發情的經產母豬出現靜立反射時，立即進行輸精。無試情公豬的情況下，發現有靜立反應的母豬應立即輸精，12 h 后進行第二次輸精。青年母豬應根據外陰腫脹情況，粘液情況并結合試情公豬確定輸精時間，母豬粘膜腫脹，發亮，略呈暗紅色，陰道粘液粘稠渾濁，手指間緩緩拉開可拉成絲，出現靜立反射后立即輸精，返情母豬出現發情癥狀后立即進行輸精。

8.2 輸精前準備

一是將輸精母豬轉入可單獨飼養的配種欄內，用衛生紙或消毒抹布擦凈母豬外陰。

二是輸精用器械應嚴格消毒，使用前用生理鹽水或稀釋液沖洗。輸精管不經消毒不能共用。

三是使用經保存的精液要逐步回溫至30℃左右，檢查精子活力應在0.7 以上方可使用。

四是輸精人員要戴好一次性手套，減少輸精過程中的污染。

8.3 輸精方法 輸精管與輸精瓶(袋)連接，輸精管前1/3 涂抹少量潤滑劑(如液體石蠟)，輕輕將輸精管插入母豬陰道，沿陰道上壁旋轉向前滑進，遇到阻力后退旋轉輸精管再往深部插入，直到輸精管的螺旋頭部有被咬住的感覺(即被鎖住在子宮頸)為止。

插入深度青年母豬為25 cm 左右，經產母豬30～35 cm。插入后將輸精管稍稍退出一點，抬高輸精瓶(袋)，借助高差壓力輸入精液。如精液停止流入或有倒流現象，暫時停止輸精，重復前面過程將輸精管再次抽插。整個輸精過程不少于5 min，輸精完畢，將輸精管尾部打折留置片刻，防止精液流出。任其自然停止宮縮后緩緩抽出。

輸精過程中如遇到母豬排糞、尿而污染了輸精管，應立即更換新的輸精管。

8.4 輸精次數和間隔時間 同一母豬，情期內輸精2 次或3 次都足以使有效精子覆蓋母豬的整個排卵期，使精子和卵子有相遇受精的機會。一般做法是全人工授精采用間隔24 h 輸精2 次，發情良好母豬可進行第三次輸精。

9 資料記載

9.1 公豬使用頻率記錄 記錄公豬使用(采精或自然交配)日期，以調整、控制公豬(使用頻率應在每周1 ～4 次幅度內)。

9.2 采精及精液品質檢查記錄 記錄公豬號、采精日期及精液品質檢查的各項數值。

9.3 精液稀釋保存記錄 記錄公豬號、原精數量、稀釋倍數、稀釋后活力、分裝袋數;保存期間活力抽檢情況、搖勻時間;如有外供，應記錄精液發出時間、數量，發出前的檢查結果。

9.4 配種記錄 記錄與配公、母豬耳號，配種時間，配種方式;測孕時間，測孕結果;返情時間，流產時間。