AMPK/PGC-1α信號通路在硫化氫抗心肌缺血/再灌注損傷中的作用

楊潔瓊，胡明珠，杜　斌，陳俊良，龐慶豐，季　永，［.蘇州大學附屬第四醫院(無錫市第四人民醫院)麻醉科，.江南大學無錫醫學院，江蘇無錫　406］

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AMPK/PGC-1α信號通路在硫化氫抗心肌缺血/再灌注損傷中的作用

楊潔瓊1，胡明珠2，杜斌2，陳俊良2，龐慶豐2，季永1，2
［1.蘇州大學附屬第四醫院(無錫市第四人民醫院)麻醉科，2.江南大學無錫醫學院，江蘇無錫214062］

中國圖書分類號: R-332; R322.11; R329.24; R542.202.2; R977.3

摘要:目的探討AMPK/PGC-1α信號通路在硫化氫(H2S)抗心肌缺血/再灌注(I/R)損傷中的作用。方法采用Langendorff灌流裝置平衡灌注20 min，停灌30 min，復灌60 min建立大鼠離體心肌I/R損傷模型?！酳D大鼠72只，隨機分為6組(n = 12):空白組(Control組)，缺血/再灌注組(I/R 組)，溶媒組(DMSO組)，抑制劑Compound C組(CC組)，H2S后處理組(NP組)，H2S后處理+ CC組(N + C組)。記錄平衡末及再灌注末的心率(HR)左室發展壓(LVDP)、左室內壓上升最大速率(+ dp/dtmax)、左室內壓下降最大速率(－dp/dtmax)和左室舒張末期壓(LVEDP);再灌注末，TTC法染色并測定心肌梗死面積; HE 染色觀察各組心肌組織形態學改變;免疫組化檢測PGC-1α的表達; Western blot半定量總的AMPKα、p-AMPKα和PGC-1α的表達水平。結果平衡末各組間心功能指標差異無統計學意義(P＞0. 05)。再灌注末，與I/R組比較，NP組能明顯改善再灌注損傷心功能的各項指標(P＜0. 05)，減少心肌梗死面積［(23. 9±3. 4)% vs(60. 9±3. 8)%，(P＜0. 05)］; HE染色顯示NP組心肌損傷明顯減輕;同時p-AMPKα、PGC-1α蛋白表達水平明顯升高(P＜0. 05)。Compound C逆轉了H2S后處理產生的心肌保護效應及p-AMPKα和PGC-1α的表達增加。結論AMPK/PGC-1α信號通路參與了H2S抗心肌缺血/再灌注損傷的過程。

關鍵詞:缺血/再灌注損傷;硫化氫;后處理;心肌保護;腺苷酸活化蛋白激酶;過氧化酶增殖激活受體γ轉錄輔助活化因子-1α;線粒體保護

網絡出版時間:2015－6－5 11:22網絡出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20150605.1122.013.html

季永(1969－)，男，博士，教授，主任醫師，碩士生導師，研究方向:心、肺、腦功能衰竭的機制及預防，通訊作者，E-mail: jiyong6914@ 163.com

硫化氫(hydrogen sulfide，H2S)作為第3種氣體信號分子，近年來在心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷中的作用備受關注。本課題組前期研究證實，H2S后處理可減輕心肌I/R損傷［1］，其機制可能與多種物質及信號通路有關。但目前人們對H2S保護心肌I/R損傷的機制尚未完全清楚。研究發現［2］，激活腺苷酸活化蛋白激酶/過氧化物酶體增生物激活受體γ共激活因子1α(AMP-activated protein kinase-peroxisome proliferator activated receptor gamma co-activator，AMPK/PGC-1α)通路可減輕心肌細胞缺氧/復氧損傷。但是AMPK/PGC-1α通路是否參與了H2S后處理對離體大鼠心肌I/R損傷的保護作用尚未見報道。本研究利用AMPK特異性抑制劑Compound C阻斷AMPK/PGC-1α信號通路，觀察其對H2S后處理心肌保護作用的影響，以探討AMPK/PGC-1α信號通路在H2S抗心肌I/R損傷中的作用。

1　材料與方法

1.1藥品與試劑氯化三苯基四氮唑(TTC)、NaHS(Sigma，美國); AMPK抑制劑Compound C(Sigma，美國)，用DMSO溶解;其余化學試劑均為國產分析純產品。兔抗總AMPKα抗體(2603S，Cell Signaling)、兔抗磷酸化AMPKα(Thr172)單克隆抗體(2535P，Cell Signaling);兔抗PGC-1α多克隆抗體(ab54481，ABCAM);兔抗β-actin多克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG及兔超敏二步法免疫組化檢測試劑、二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒(北京中杉金橋生物公司); SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液、超敏ECL化學發光試劑盒(碧云天，中國)。

1.2儀器Langendorff灌注裝置、八通道生理記錄儀Powerlab/8s(AD Instrument，澳大利亞);－80℃超低溫冰箱(EppendorfAG，德國);石蠟切片機(Leica，德國); Nikon 80i光學顯微鏡及圖像處理系統(Nikon 80i，日本)。

1.3大鼠離體心肌I/R模型建立清潔級♂SD大鼠72只，體質量(250～300)g，浙江省實驗動物中心提供，實驗動物許可證號: SCXK(浙)2014－0001。大鼠腹腔注射肝素鈉500 U·kg－1抗凝，10%水合氯醛(300～350)mg·kg－1麻醉。開胸迅速取心臟，置于預冷(4℃)的改良Krebs-Henseleit(K-H)液中，迅速主動脈逆行插管并固定在Langendorff灌注裝置上。以改良的K-H液［其成分為(mmol· L－1): NaCl 118. 5，KCl 4. 7，CaCl22. 5，MgSO41. 2，KH2PO41. 2，NaHCO324. 8，d-Glucose 11，EDTA-2Na 0. 125，pH 7. 4，95% O2和5% CO2的混合氣體飽和］行常規恒壓灌流，維持灌流液溫度37℃。心臟灌流(1～2)min后經左心耳切口向左心室插入球囊，向球囊緩慢注水調節囊內壓為(0. 67～1. 33)kPa，另一端接壓力傳感器至多導生理記錄儀，Labchart 7. 0軟件實時觀測并分析左心血流動力學指標:心率(heart rate，HR)、左室發展壓(left ventricular developed pressure，LVDP)、左室內壓上升最大速率(the maximun rate of increase of left ventricular pressure，+ dp/dtmax)、左室內壓下降最大速率(the maximun rate of decrease of left ventricular pressure，－dp/dtmax)和左室舒張末壓(left ventricular diastolic pressure，LVEDP)。

1.4實驗分組72只♂SD大鼠隨機分為6組(n =12，每組中6只用于測定心肌梗死面積，6只用于免疫組化及Western blot檢測):①Control組，37℃K-H液全心灌注110 min;②I/R組，平衡20 min，全心停灌30 min后，再灌注60 min;③DMSO組，平衡10 min后及再灌注5 min內用含有0. 02% DMSO的K-H液灌注，共計15 min，其余步驟同I/R處理;④CC組，平衡10 min后及再灌注5 min內灌注含10 μmol·L－1Compound C溶于0.02% DMSO的K-H液，共15 min，其余處理同I/R組;⑤NP組，全心停灌30 min后，即刻再灌含NaHS 10 μmol·L－1的KH液15 s，不含NaHS的K-H液15 s，連續循環4次，共灌注60 min，其余處理同I/R組;⑥N + C組，平衡10 min后及再灌注5 min內灌注含10 μmol· L－1Compound C溶于0. 02% DMSO的K-H液，共15 min，同時再灌即刻灌流含NaHS 10 μmol·L－1的KH液15 s，不含NaHS的K-H液15 s，連續循環4次，其余處理同I/R組。

1.5心肌梗死面積測定再灌注末取下心臟于－80℃冰箱冷凍，自心尖至心底部將心臟橫切約2 mm薄片，浸于1 % TTC磷酸緩沖液(pH 7.4)中，37℃恒溫箱中閉光孵化20 min，染色過程中不時振蕩使染色均勻，梗死心肌呈灰白色，正常存活心肌呈磚紅色。甲醛固定后掃描，采用Image pro plus 6.0軟件計算心肌梗死面積百分比(MIS%)=(心肌梗死面積之和/心肌總面積之和)×100%。

1.6常規組織病理學檢測及免疫組化檢測再灌注末取心臟，4%甲醛溶液固定，乙醇梯度脫水，常規石蠟包埋切片，分別進行蘇木精－伊紅(hematoxylin-eosin，HE)及免疫組織化學染色。免疫組化染色按照兔超敏二步法免疫組化試劑盒說明書進行標記染色。一抗(PGC-1α，1∶300稀釋)4℃孵育過夜，BAD顯色，蘇木精復染，鏡下以黃色或深棕褐色顆粒為陽性標記觀察PGC-1α表達。每張切片隨機選取5個高倍視野(high power field，HPF)(×400)，計數PGC-1α陽性細胞，以陽性表達指數(positive ex-pression index，PEI)反映各組心肌組織PGC-1α表達的情況，表達指數/% =(視野內陽性細胞個數/視野內所有心肌細胞個數)×100%。

1.7 Western blot法半定量測定總的AMPKα(t-AMPKα)、p-AMPKα和PGC-1α再灌注末迅速取左心室心肌組織于－80℃冰箱保存。標本齊后冰上裂解組織制備勻漿，4℃14 000×g離心10 min，取上清BCA測蛋白濃度，配平煮沸，取等量心肌樣本進行SDS-PAGE電泳，分離后將蛋白轉移到PVDF膜上。5% BSA室溫封閉2 h，加入一抗(AMPKα，1∶1 000稀釋; p-AMPKα，1∶1 000稀釋; PGC-1α，1∶1 000稀釋;β-actin，1∶3 000稀釋)，4℃孵育過夜，TBST室溫漂洗，加入二抗(辣根過氧化物酶標記山羊抗兔IgG，1∶2 000稀釋)，室溫搖床孵育2 h，TBST漂洗后，ECL發光和曝光，用Image pro plus 6.0圖像分析軟件對蛋白條帶進行半定量分析。

2　結果

2.1硫化氫后處理對大鼠左心室血流動力學的影響結果顯示，平衡末各組血流動力學指標間差異無統計學意義(P＞0. 05)，見Tab 1。再灌注60 min末，除Control組外，其余各組與基礎值比較，LVEDP明顯升高(P＜0. 05)，HR、LVDP、±dp/dtmax明顯降低(P＜0. 05);與I/R組比較，NP組LVEDP明顯降低(P＜0. 05)，HR、LVDP、±dp/dtmax明顯升高(P＜0. 05);與NP組比較，N + C組LVEDP明顯升高(P＜0. 05)，HR、LVDP、±dp/dtmax明顯降低(P＜0. 05); DMSO組、CC組與I/R比較差異無統計學意義，見Tab 2。

Tab 1　Hemodynamics at the end of baseline(±s，n =12)

Tab 1　Hemodynamics at the end of baseline(±s，n =12)

Control: time-matched reperfusion; I/R: ischemia reperfusion; DMSO: dimethyl sulfoxide; CC: AMPK/PGC-1α pathway inhibitor Compound C(10 μmol·L－1); NP: hydrogen sulfide postconditioning(10 μmol·L－1); N + C: hydrogen sulfide postconditioning with Compound C

HR/LVDP/+ dp/dtmax/－dp/dtmax/LVEDP/Groupmin－1kPakPa·s－1kPa·s－1kPa Control 　253±16 　12.2±0.6 　332±24 　251±13 　1.05±0.09 I/R 　254±14 　12.2±1.4 　325±25 　246±14 　1.03±0.11 DMSO 　252±15 　12.1±0.6 　329±27 　248±17 　1.05±0.08 CC　249±18 　12.2±0.9 　322±22 　244±13 　1.04±0.06 NP　252±20 　12.3±0.4 　319±29 　246±9 　1.04±0.14 N +C 　251±14 　12.2±0.57 　323±33 　249±11 　1.04±0.06

Tab 2　Hemodynamics at 60 min reperfusion(±s，n =12)

Tab 2　Hemodynamics at 60 min reperfusion(±s，n =12)

*P＜0. 05 vs control;#P＜0. 05 vs I/R;△P＜0. 05 vs NP

HR/LVDP/+ dp/dtmax/－dp/dtmax/LVEDP/Group min－1kPakPa·s－1kPa·s－1kPa Control 246±22 　11.6±0.9 　328±27 　246±16 　1.06±0.07 I/R 　181±14*　7.2±0.9*　177±26*　116±12*　4.54±0.81*DMSO 　187±17＊△　7.2±0.9＊△182±25＊△　119±13＊△　4.19±0.40＊△CC 　166±15＊△　7.0±0.8＊△174±21＊△　116±7＊△　4.66±0.56＊△NP 　233±12* #9.7±0.8* #282±24* #173±11* #　3.73±0.84* #N +C 　192±20＊△　7.4±0.5＊△189±24＊△　124±9＊△　4.43±0.46

2.2硫化氫后處理對心肌梗死面積的影響結果顯示，與Control組梗死面積百分比(15. 2±2. 9)%比較，I/R組梗死面積百分比增加，為(60±3. 8)%(P＜0. 05);與I/R組比較，NP組梗死面積百分比減小，為(23. 9±3. 4)%(P＜0. 05);與NP組比較，N + C組梗死面積百分比增加，為(58. 5± 4. 3)%(P＜0. 05); DMSO組和CC組的梗死面積百分比分別為(59. 4±2. 7)%和(61. 6±4. 9)%，與I/R組比較差異無統計學意義，見Fig 1。

Fig 1　Percentage of infract size of myocardium at the end of reperfusion(±s，n =6)*P＜0. 05 vs control;#P＜0. 05 vs I/R;△P＜0. 05 vs NP

2.3各組HE染色心肌組織形態學改變各組HE染色心肌組織形態學改變見Fig 2。Control組心肌肌束排列整齊，有分支，著色均勻，胞膜完整，間質無水腫; I/R組心肌肌束排列紊亂，大量肌纖維斷裂，間質水腫明顯; NP組心肌肌束排列相對整齊，間質輕度水腫，介于正常組和I/R組之間; CC組和N + C組與I/R組比較無明顯差異。

Fig 2　The myocardial tissue morphology change after HE staining of each group(×400，bar =20 μm)

2.4免疫組織化學檢測心肌組織PGC-1α的表達

PGC-1α陽性反應為黃色或深棕褐色顆粒，主要在心肌細胞核中表達明顯，見Fig 3。結果顯示，正常細胞核被蘇木精復染成藍色，少見陽性染色。與Control組PGC-1α陽性表達指數(PEI)(11±4)%比較，I/R組PGC-1α PEI明顯增加，為(41±5)%(P＜0. 05);與I/R組比較，NP組PGC-1α PEI進一步增加，為(54±3)%(P＜0. 05);與NP組比較，N + C組PGC-1α PEI減少，為(37±4)%(P＜0. 05); DMSO組和CC組的PGC-1α PEI分別為(36 ±5)%和(31±4)%，與I/R組比較差異無統計學意義。

2.5硫化氫后處理對心肌p-AMPKα和PGC-1α表達水平的影響Western blot半定量分析p-AMPKα和PGC-1α在心肌細胞中的表達情況，見Fig 4A和Fig 4B。結果顯示，與Control組比較，I/R 組p-AMPKα、PGC-1 α蛋白表達水平升高(P＜ 0. 05);與I/R組比較，NP組p-AMPKα、PGC-1α蛋白表達水平進一步升高(P＜0. 05);與NP組比較，CC組和N + C組p-AMPKα、PGC-1α蛋白表達水平明顯降低(P＜0. 05); DMSO組與I/R組比較，差異無統計學意義。

Fig 3　Expression of PGC-1α at 60 min reperfusion detected by immunohistochemstry(×400，bar =20 μm)

3　討論

隨著心肌梗死發生率增高及早期冠脈再通治療的廣泛開展，心肌I/R損傷成為臨床常見的病理生理現象，如何減輕I/R損傷是亟待解決的問題。越來越多的研究證明，新型氣體信號分子H2S在重要臟器尤其是心肌缺血/再灌注損傷方面扮演著重要的角色。本課題組的前期研究證實，10 μmol·L－1的外源性NaHS后處理可以減輕離體大鼠心肌I/R損傷［1］，其可能的機制有:激活JAK2/STAT3信號通路［3］、調節抗腫瘤增值蛋白［4］和線粒體Cx43蛋白的表達［5］、激活線粒體ATP敏感性鉀通道，抑制MPTP開放［6］等。但目前關于H2S對心肌I/R損傷的具體保護機制尚未完全闡明，仍需進一步研究。

AMPK/PGC-1α信號通路是近年來新發現的一條重要的細胞內信號通路，在調節缺血缺氧及能量代謝等方面發揮著重要的作用［7］。研究發現，在心肌缺血缺氧時，AMPK可被迅速激活，進而減輕心肌I/R損傷［8－9］。PGC-1α作為AMPK的下游重要的靶分子，可被AMPK直接磷酸化，在線粒體生物合成過程中發揮關鍵作用［10］。研究發現［11］，激活AMPK/PGC-1α通路可通過促進線粒體生物合成途徑減輕心肌細胞缺氧/復氧損傷。另外也有文獻報道p-AMPKα可以上調PGC-1α蛋白的表達，其抑制劑Compound C可以抑制PGC-1α的表達上調［2］。為了研究AMPK/PGC-1α信號通路在H2S抗心肌缺血/再灌注損傷中的作用。本實驗應用AMPK/PGC-1α通路抑制劑Compound C，觀察各組心功能指標、心肌梗死面積、HE染色心肌組織形態學改變以及p-AMPKα、PGC-1α蛋白的表達情況。

Fig 4 Effect of various treatment procedures on expression of p-AMPKα，PGC-1αat 60 min reperfusion analyzed by Western blot(珋x±s，n =3)A: H2S increased the protein expression of p-AMPKα; B: H2S increased the protein expression of PGC-1α．*P＜0. 05 vs control;#P＜0. 05 vs I/ R;△P＜0. 05 vs NP

本實驗研究發現，與I/R組比較，NP組HR、LVDP、±dp/dtmax均升高，LVEDP降低，明顯改善了心功能。同時，H2S后處理使心肌梗死面積減少，HE染色心肌組織形態學損傷也相對較輕，提示H2S后處理可以減輕心肌損傷。而加入Compound C抑制AMPK/PGC-1α后，H2S后處理血流動力學的改善作用被廢除，心肌梗死面積增加，HE染色心肌組織形態學損傷相對嚴重，提示AMPK/PGC-1α參與了H2S后處理對心肌I/R損傷的保護作用。同時我們還發現，正常情況下，心肌細胞中p-AMPKα和PGC-1α蛋白的表達均較少; I/R后，二者表達水平均升高。但在H2S后處理后，與I/R組比較，二者的表達水平進一步升高，提示H2S后處理誘導了上述蛋白的表達;而加入Compound C后，上述蛋白的表達水平均又下降，提示Compound C抑制了H2S后處理誘導的p-AMPKα和PGC-1α蛋白的表達能力，提示p-AMPKα可能通過誘導PGC-1α蛋白的表達而參與硫化氫后處理的抗心肌I/R損傷作用。與Yan等［12］發現的p-AMPKα可以上調PGC-1α蛋白的表達發揮心肌保護作用的報道相一致。

綜上所述，AMPK/PGC-1α信號通路參與了硫化氫抗心肌缺血/再灌注損傷的作用，其機制可能與硫化氫后處理激活AMPK，上調PGC-1α的表達有關。但硫化氫后處理與AMPK/PGC-1α信號通路之間的具體機制將有待于進一步的深入研究。

(致謝:本實驗研究在江南大學無錫醫學院龐慶豐教授實驗室完成，感謝龐慶豐教授給予我整個課題實驗的悉心指導、幫助和支持!)

參考文獻:

［1］Ji Y，Pang Q F，Xu G，et al.Exogenous hydrogen sulfide postconditioningprotects isolated rat hearts against ischemia-reperfusion injury［J］.Eur J Pharmacol，2008，587(1－3):1－7.

［2］Ghorbangol A，Faribak K，Leila K，et al.Activation of AMP-activated protein kinase by metformin protects against global cerebral ischemia in male rats: Interfernce of AMPK/PGC-1α pathway［J］.Metab Brain Dis，2014，29(1):47－58.

［3］Luan H F，Zhao Z B，Zhao Q H，et al.Hydrogen sulfide postconditioning protects isolated rat hearts against ischemia and reperfusion injury mediated by the JAK2/STAT3 survival pathway［J］.Brazilian J Med Bio Res，2012，45(10): 898－905.

［4］毛洪雅，楊潔瓊，季永，等.JAK2/STAT3調節抗增殖蛋白表達在H2S后處理心肌細胞中的保護作用［J］.中國藥理學通報，2014，30(8): 1122－6.

［4］Mao H Y，Yang J Q，Ji Y，et al.Role of JAK2/STAT3-regulated prohibition in cardioprotection of H2S postconditioning in hypoxia/reoxygenation-treated cardiomyocytes［J］.Chin Pharmacol Bull，2014，30(8):1122－6.

［5］季永，張可璇，毛洪雅，等.縫隙連接蛋白Cx43介導硫化氫后處理對大鼠心肌的保護作用［J］.中國藥理學通報，2013，29(7): 999－1003.

［5］Ji Y，Zhang K X，Mao H Y，et al.Protective effects of Cx43-mediated exogenous hydrogen sulfide postconditinoing on rat hearts ［J］.Chin Pharmacol Bull，2013，29(7): 999－1003.

［6］楊?？?，于水，米琰，等.外源性硫化氫后處理對大鼠心肌缺血/再灌注損傷線粒體通透性轉換孔的影響［J］.中國藥理學通報，2010，26(7): 944－7.

［6］Yang H K，Yu S，Mi Y，et al.Effect of exogenous hydrogen sulfide postconditioning on the mitochondrial permeability transition pore against ischemia-reperfusion injury in isolated rat heart［J］.Chin Pharmacol Bull，2010，26(7): 944－7.

［7］Zaha V G，Young L H.AMP-activated protein kinase regulation and biological actions in the heart［J］.Circ Res，2012，111(6): 800－14.

［8］Kambara T，Ohashi K，Shibata R，et al.CTRP9 protein protects against myocardial injury following ischemia-reperfusion through AMP-activated protein kinase(AMPK)-dependent mechanism［J］.J Biol Chem，2012，287(23): 18965－73.

［9］Kim A S，Miller E J，Wright T M，et al.A small molecule AMPK activator protects the heart against ischemia-reperfusion injury［J］.J Mol Cell Cardiol，2011，51(1): 24－32.

［10］郭茜，郭家彬，李梨，等.PGC-1α與線粒體生成調控在心血管疾病中的作用［J］.中國藥理學通報，2013，29(1): 1－5.

［10］Guo Q，Guo J L，Li L，et al.Role of PGC-1α and mitochondrial biogenesis in cardiovascular diseases［J］.Chin Pharmacol Bull，2013，29(1): 1－5.

［11］Sun L，Zhao M，Yu X J，et al.Cardioprotection by Acetylcholine: A novel mechanism via mitochondrial biogenesis and function involving the PGC-1αpathway［J］.J Cell Physiol，2013，228(6): 1238－48.

［12］Yan W，Zhang H，Liu P，et al.Impaired mitochondrial biogenesis due to dysfunctional adiponectin-AMPK-PGC-1α signaling contributing to increased vulnerability in diabetic heart［J］.Basic Res Cardiol，2013，108(3):329.

Role of AMPK/PGC-1α pathway in cardioprotection of hydrogen sulfide against ischemia/reperfusion injury

YANG Jie-qiong1，HU Ming-zhu2，DU Bin2，CHEN Jun-liang2，PANG Qing-feng2，JI Yong1，2
［1.Dept of Anesthesiology，the 4th Affiliated Hospital of Soochow University(Wuxi 4th People’s Hospital)，Wuxi Jiangsu 214062，China; 2.Jiangnan University’s Medicine，Wuxi Jiangsu 214062，China］

Abstract:Aim To explore the role of AMPK/PGC-1α pathway in cardioprotection of hydrogen sulfide(H2S)against ischemia/reperfusion(I/R)injury.

Methods Langendorff perfusion apparatus was used to build an isolated rat myocardial I/R model.Seventytwo male SD rats were randomly divided into 6 groups(n =12): control group(Control)，ischemia/reperfusion group(I/R)，DMSO group(DMSO)，inhibitor Compound C group(CC)，H2S postconditioning group(NP)，and H2S with Compound C group(N + C).The heart rate(HR)，the left ventricular developed pressure(LVDP)，the maximum rate of increase or decrease of left ventricular pressure(±dp/dtmax)and the left ventricular diastolic pressure(LVEDP)were registered at 20 min of baseline and 60 min of reperfusion separately.Triphenyl tetrazolium chloride(TTC)staining and HE staining were used to determine the myocardial infarct size and the myocardial tissue morphological change of each group was observed respectively.Immunohistochemistry was used to determine the expression of PGC-1α.The expressions of total AMPK(tAMPKα)，phosphorylated AMPK(pAMPKα)and PGC-1α were detected with Western blot anaylsis.Results There were no differences in equilibrium hemodyamics observed between the experimental groups(P＞0. 05).At the end of reperfusion，compared with I/R group，NP group had obviously ameliorated functional recovery and significantly decreased myocardial infarct size［(23. 9±3. 4)% vs(60. 9±3. 8)%，(P＜0. 05)］.HE staining showed that in NP group，the myocardial injury was reduced.Meanwhile，the expression of pAMPKα and PGC-1α increased significantly.However，Compound C reversed the cardioprotection effects provided by hydrogen sulfide postconditioning and reduced the expression of pAMPKα and PGC-1α.Conclusion AMPK/PGC-1α pathway is involved in the role of hydrogen sulfide against ischemia/reperfusion injury.

Key words:ischemia/reperfusion; hydrogen sulfide; postconditioning; cardioprotection; AMP-activated protein kinase; peroxisome proliferator activated receptor gamma co-activator; mitochondrial protection

作者簡介:楊潔瓊(1988－)，女，碩士生，研究方向:重要臟器功能衰竭的機制及預防，E-mail : yjq881018@163.com;

基金項目:國家自然科學基金資助項目(No 81270126);無錫市醫學管理中心醫學科研面上項目(No YGZXM1407)

收稿日期:2015－03－09，修回日期:2015－04－14

文獻標志碼:A

文章編號:1001－1978(2015)07－0951－06

doi:10.3969/j.issn.1001－1978.2015.07.013