慢性乙肝患者外周血中Th22、Th17細胞及其細胞因子濃度水平的變化與意義

戴小波　薛長山　周文英　黃小燕　唐文志　黃凱晨(珠海高新技術產業開發區人民醫院檢驗科，廣東　珠海　59000)

慢性乙肝患者外周血中Th22、Th17細胞及其細胞因子濃度水平的變化與意義

戴小波1薛長山周文英2黃小燕1唐文志1黃凱晨1
(珠海高新技術產業開發區人民醫院檢驗科，廣東珠海519000)

〔摘要〕目的探討輔助T淋巴細胞(Th) 22細胞、Th17細胞及其細胞因子在慢性乙型肝炎患者外周血中的表達及意義。方法選取2013 年6月至2014年3月在我院就診患者或體檢者共101例，其中慢性乙型肝炎患者25例，乙肝病毒攜帶者21例，非病毒性肝炎35例。另選取同期20例健康體檢者為正常對照組。用流式細胞術分別檢測各組外周血中Th22細胞、Th17細胞所占比例。用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)分別檢測各組外周血中白細胞介素(IL) -22、IL-17的血清濃度。結果與正常對照組比較，慢性乙型肝炎組Th22細胞及IL-22、IL-17明顯降低(P＜0.05)，但Th17細胞無統計學差異(P＞0.05) ;與乙肝病毒攜帶者比較，慢性乙型肝炎組IL-22、IL-17明顯降低(P＜0.05)，Th17細胞明顯升高(P＜0.05)，但Th22細胞無統計學差異(P＞0.05) ;與非病毒性肝炎組相比，慢性乙型肝炎組Th22、Th17細胞及IL-22、IL-17均明顯降低(P＜0.05) ;與正常組比較，乙肝病毒攜帶者Th22、Th17及IL-17均無統計學差異(P＞0.05)，但IL-22明顯降低(P＜0.05)。結論Th22細胞數量減少或功能減退，IL-22濃度降低，使慢性乙型肝炎患者肝細胞失去IL-22的保護作用，是慢性乙型肝炎發病的重要因素;而Th17細胞及IL-17可能未參與慢性乙型肝炎的慢性期炎癥。

〔關鍵詞〕慢性乙型肝炎; Th22細胞; Th17細胞;白細胞介素22;白細胞介素17

1廣東省中醫院珠海醫院檢驗科

2中山大學第五附屬醫院中心實驗室

第一作者:戴小波(1978-)，男，副主任技師，主要從事感染與免疫方面的研究。

研究認為輔助T淋巴細胞(Th)細胞分化失衡是介導慢性乙型肝炎病情變化的主要機制〔1〕，但是失衡的原因還不清楚。Th17、Th22細胞是最近發現的新型Th，Th17細胞及其細胞因子在免疫炎癥的早期發揮關鍵作用，而Th22細胞數量及功能的變化與免疫炎癥也關系密切。本研究擬初步探討Th22、Th17及其細胞因子在慢性乙型肝炎中的變化及意義。

1　材料與方法

1.1研究對象選取2013年6月至2014年3月在我院就診患者或體檢者共101例，其中慢性乙型肝炎患者25例，年齡55～75〔平均(59.6±4.2)〕歲，其中男14例，女11例;乙肝病毒攜帶者21例，年齡57～76〔平均(61.5±3.9)〕歲，其中男13例，女8例。慢性乙型肝炎及攜帶者的診斷標準參考《慢性乙型肝炎防治指南(2010)》〔2〕及《病毒性肝炎防治方案(2000)》〔3〕，非病毒性原因造成的肝細胞損傷(非病毒性肝炎) 35例，年齡56 ～74〔平均(60.4±5.9)〕歲，其中男20例，女15例。排除自身免疫性疾病、急性炎癥、其他系統慢性炎癥，6個月內未接受過免疫抑制劑、抗病毒治療者。正常對照組為20例健康體檢者，年齡15～58歲，其中男12例，女8例，排除各種病毒性肝炎、自身免疫性疾病、皮膚病者。肝功等各項生化指標正常。各組在年齡、性別等方面均具有可比性。

1.2主要試劑及檢測方法Th22細胞及Th17細胞檢測:檢測方法參照參考文獻〔4〕，利用Beckman Coulter XL四色流式細胞儀檢測Th17細胞、Th22細胞占CD4+T淋巴細胞的比值。試劑來源: CD4(ECD標記)熒光標記抗體由貝克曼公司提供，CCR4 (Percp/cy5.5標記)、CCR6(FITC標記)、CCR10(PE標記)熒光標記抗體由Biolegend公司提供。檢測方法:將相應抗體分別加入100 μl EDTA抗凝外周血中，充分混勻，4℃避光反應20 min。在全血樣本管中加溶血劑1 ml，混勻避光放置5 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，沉淀用200 μl PBS懸浮，上流式細胞儀(BECKMAN COULTER XL)檢測。白細胞介素(IL) -22、IL-17測定:用酶聯免疫吸附(ELISA)方法檢測，檢測試劑盒由Bio-swamp公司提供。

1.3統計學方法應用SPSS16.0軟件進行t檢驗、Spearman線性相關分析。

2　結果

2.1Th22細胞及IL-22檢測結果與正常對照組〔Th22細胞(2.29±0.014) ％; IL-22(88.3±51.2) pg/ml〕比較，慢性乙型肝炎組Th22細胞〔(0.95±0.015 ) ％〕及IL-22〔(12.8± 25.7) pg/ml〕明顯降低(t = 3.004，P = 0.004; t = 6.429，P = 0.000) ;與乙肝病毒攜帶者〔IL-2(38.8±28.7) pg/ml，Th22細胞(1.73±0.009) ％〕比較，慢性乙型肝炎組IL-22明顯降低(t = 3.228，P=0.002)，但Th22細胞無統計學差異(t = 2.020，P = 0.053) ;與非病毒性肝炎組〔Th22細胞(3.11±0.018) ％，IL-22 (168.4±118.9) pg/ml〕比較，慢性乙型肝炎組Th22細胞及IL-22都明顯降低(t= 4.764，P= 0.000; t= 6.429，P= 0.000) ;與正常對照組比較，乙肝病毒攜帶者Th22細胞無統計學差異(t = 1.540，P=0.132)，但IL-22明顯降低(t=3.847，P=0.000)。

2.2Th17細胞及IL-17檢測結果與正常對照組〔Th17 (1.09±0.012) ％，IL-17(25.4±51.6) pg/ml〕比較，慢性乙型肝炎組IL-17〔(2.4±6.8) pg/ml〕明顯降低(t= 2.216，P= 0.032)，但Th17細胞〔(1.87±0.015) ％〕無統計學差異(t = 1.862，P = 0.069) ;與乙肝病毒攜帶者〔Th17細胞(1.02±0.007) ％，IL-17(23.0±39.7) pg/ml〕比較，慢性乙型肝炎組Th17細胞明顯升高(t=2.301，P= 0.026)，而IL-17較攜帶者明顯降低(t = 2.552，P=0.014) ;與非病毒性肝炎組〔Th17細胞(3.55±0.023) ％，IL-17(232.7±365.2) pg/ml〕比較，慢性乙型肝炎組Th17細胞及IL-17均明顯降低(t=3.153，P= 0.003; t= 3.144，P= 0.003) ;與正常對照組比較，乙肝病毒攜帶者Th17細胞及IL-17均無統計學差異(t=0.206，P=0.837; t=0.173，P=0.864)。

2.3Th22、IL-22、Th17、IL-17與ALT的相關性非病毒性肝炎組Th22、IL-22、Th17、IL-17與ALT的相關系數分別為－0.11，－0.04，0.02，0.14;慢性乙型肝炎組Th22細胞比值與ALT呈正相關(r = 0.65，P＜0.05)。Th17、IL-22與ALT的r值分別為0.23，－0.22，－0.29。

3　討論

Th22細胞是最近在研究銀屑病等皮膚炎癥過程中發現的不同于Th1、Th2細胞的一類新型Th細胞〔4〕，細胞表面表達CCR6+、CCR4+、CCR10+〔5〕。Th22功能的喪失或數量減少都可以導致慢性炎癥疾病惡化，另一方面，Th22細胞數量過多或功能過度活躍也可導致免疫炎癥加重〔6〕。Th22細胞主要通過分泌IL-22發揮生物學效應。體外實驗表明，IL-22對肝細胞免疫炎性損傷具有保護作用，在對小鼠急性肝損傷模型的研究中發現，IL-22能明顯減輕ConA對小鼠的肝損傷〔7〕，IL-22 mRNA以及IL-22在ConA誘導的肝炎中顯著高表達，IL-22的中和抗體可以加重肝損傷，給予重組IL-22后可以減輕肝損傷的過程〔8〕;另一方面IL-22還是肝細胞的存活因子，能減輕T細胞介導的肝損傷及抑制肝細胞凋亡〔8〕，這與IL-22能夠誘導組織修復途徑，以限制組織損傷和過度炎癥反應有關;因此IL-22對T細胞介導的免疫性肝損傷具有一定的抑制作用〔9〕，IL-22對肝細胞的保護作用與Th22細胞在數量過多時可能造成免疫損傷學說相矛盾。

Th17細胞表面表達CD4、CCR4、CCR6，其分化路徑與Th1、Th2明顯不同〔10，11〕，Th1、Th2型細胞因子干擾素(INF) -γ、IL-4都能抑制Th17細胞的分化。Th17細胞主要通過分泌IL-17發揮生物學作用，目前研究認為，Th17細胞及IL-17處于固有免疫及獲得性免疫的交界面，能夠通過募集和激活中性粒細胞、單核巨噬細胞聚集從而介導早期免疫排斥〔12〕及其他免疫性炎癥反應，因此Th17細胞與Th1細胞功能的區別之一是二者作用的時間點不同，Th17細胞產生迅速，在免疫炎癥的急性期發揮作用，而Th1細胞則在延長或促進后期免疫炎癥反應方面發揮主導作用〔13〕。本研究說明慢性乙型肝炎患者在Th細胞分化過程中，Th22細胞分化及分泌IL-22的功能都受到抑制，導致IL-22及Th22下降，也可以推測IL-22及Th22細胞的減少或功能缺失是慢性乙型肝炎發病的原因之一，另一方面，慢性乙型肝炎患者由于缺乏IL-22對肝細胞的保護與修復作用，導致肝炎反復發作，遷延不愈。上述數據說明，慢性乙型肝炎患者的Th細胞分化偏移，Th22細胞數量減少或功能減退，可能是慢性乙型肝炎肝細胞損傷的原因之一，Th22細胞在慢性乙型肝炎的發病過程中可能未發揮免疫調節作用，而是通過IL-22起到保護肝細胞的作用。

本研究與余雪平等〔14〕研究結果不同，這可能與慢性乙型肝炎患者的病程、發病機制及Th17、Th1細胞分化特征有關，在乙肝的急性期，IL-17可能增多，通過招募與激活中性粒細胞及單核細胞發揮免疫損傷作用，而在乙肝的慢性期，肝細胞損傷主要與Th1型細胞損傷有關，Th1型細胞因子IFN-γ能抑制Th17細胞的分化，課題組收集的標本庫主要為慢性乙型肝炎反復發作的患者，都處于慢性期。上述結果也說明，在慢性乙型肝炎反復發作的慢性期，Th17細胞及IL-17軸不是肝細胞損傷的主要原因。

4　參考文獻

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〔2015-01-20修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

基金項目:珠海市衛計局立項項目(2013091)

〔中圖分類號〕R512.6+2

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2015) 16-4583-02;

doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2015.16.075