二甲雙胍通過激活AMPK和抑制HNF4α而抑制血管緊張素II引起的TGF-β1產生

陳瑞飛，肖　晗，張幼怡(北京大學第三醫院血管醫學研究所，北京100191)

二甲雙胍通過激活AMPK和抑制HNF4α而抑制血管緊張素II引起的TGF-β1產生

陳瑞飛，肖晗，張幼怡△
(北京大學第三醫院血管醫學研究所，北京100191)

目的:近年來研究發現一線降糖藥二甲雙胍(metformin)可通過激活AMPK發揮心血管保護作用。本研究旨在探討metformin能否通過激活AMPK抑制Ang II引起的心臟成纖維細胞TGF-β1產生及其相關機制。方法:10周齡野生型C57BL/6和AMPKα2－/－小鼠，皮下植入微滲泵給予Ang II (3 mg· kg－1·d－1) 7 d，同時皮下注射metformin(200 mg·kg－1·d－1)。原代分離培養成年小鼠心臟成纖維細胞(AMCF)。采用real-time PCR、Western blot、雙螢光素酶報告基因實驗、染色質免疫沉淀技術(ChIP)等方法進行研究。結果:在野生型C57BL/6小鼠，metformin可抑制Ang II引起的心臟纖維化及TGF-β1的產生，而在AMPKα2－/－小鼠中，metformin則不能抑制Ang II引起的纖維化和TGF-β1產生。在野生型AMCF，metformin抑制Ang II引起的TGF-β1的產生，Compound C(AMPK抑制劑)能夠逆轉metformin的抑制作用。進一步研究發現，Ang II上調肝細胞核因子4α(HNF4α)蛋白表達，增加HNF4α與TGF-β1基因啟動子區的結合，雙螢光素酶報告基因實驗證實HNF4α作用于TGF-β1基因啟動子區，并介導其轉錄。HNF4α腺病毒過表達可增加AMCF中TGF-β1的產生;相反，通過慢病毒轉染HNF4α siRNA后，Ang II引起的TGF-β1生成增加被抑制。這些結果提示HNF4α介導Ang II引起的TGF-β1轉錄表達。Metformin可抑制Ang II引起的HNF4α蛋白上調，Compound C可以逆轉此作用，同時ChIP結果也表明metformin能夠抑制Ang II引起的HNF4α 與TGF-β1的結合。結論: Metformin通過激活AMPK抑制HNF4α蛋白表達及其與TGF-β1轉錄區的結合，進而抑制Ang II引起的TGF-β1轉錄表達增加。

△E-mail: zhangyy@bjmu.edu.cn