生物鐘基因Clock對iPSCs分化作用的研究

趙　冉，楊　羊，徐　晨，李二敏，陸　超，孫　寧，錢睿哲(復旦大學基礎醫學院生理與病理生理學系，上海200433)

生物鐘基因Clock對iPSCs分化作用的研究

趙冉，楊羊，徐晨，李二敏，陸超，孫寧，錢睿哲△
(復旦大學基礎醫學院生理與病理生理學系，上海200433)

目的:研究生物鐘基因Clock對干細胞分化成熟過程的影響和機制。方法:我們將攜帶有Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4的TetO-FUW-OSKM慢病毒轉染入小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)中，利用PCR、免疫熒光法、堿性磷酸酶染色和擬胚體形成實驗鑒定細胞的多能性。通過RNAi技術抑制Clock基因表達，觀察Clock基因對iPSCs分化的影響。結果:小鼠MEF在轉染后12 d形成典型的小鼠ESC樣克隆。RT-PCR顯示iPSCs表達多能性基因Nanog、Sox2、Oct4、Dax1、Esg1、ERas、Zfp296和Klf4;細胞堿性磷酸酶染色陽性;細胞免疫熒光檢測結果顯示有Oct4和SSEA1的表達;培養可見擬胚體的形成。因此，我們成功將小鼠MEF重編程為iPSCs。細胞非定向分化實驗發現，轉染48 h后，對照組克隆邊緣不光滑，有偽足伸出，提示iPSCs存在分化; Clock-siRNA組的iPSCs克隆仍保持邊緣光滑，極少有偽足伸出，RT-PCR提示多能性基因Sox2、Oct4和Klf4表達較對照組升高。結論:生物鐘基因Clock可能參與了iPSCs的分化過程。

△E-mail: rzqian@shmu.edu.cn