MGMT基因啟動子去甲基化抑制MNU誘導的人胃上皮細胞惡性轉化的機制研究

陳月霞，齊宏妍(浙江大學醫學院病理與病理生理學教研室，浙江杭州310058)

MGMT基因啟動子去甲基化抑制MNU誘導的人胃上皮細胞惡性轉化的機制研究

陳月霞，齊宏妍△
(浙江大學醫學院病理與病理生理學教研室，浙江杭州310058)

目的:研究O6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移酶(MGMT)在N-甲基亞硝基脲(MNU)誘導的人胃上皮細胞惡性轉化中持續激活的分子調控機制。方法:建立MNU誘導的人正常胃上皮細胞(GES-1)惡性轉化模型，real-time PCR和Western blot檢測建模中1周、4周和8周MGMT的動態表達水平。報告基因實驗檢測MGMT啟動子區的轉錄激活。MSP和BSP定性定量檢測MGMT基因啟動子區CpG的甲基化程度。ChIP實驗檢測DNA甲基化轉移酶(DNMT1)和H3K9met3、H3K4met2在MGMT基因轉錄激活中的作用。Soft agar、平板克隆及細胞增殖實驗檢測MGMT基因表達上調在GES-1細胞惡性轉化中的功能。結果: MNU誘導的GES-1惡性轉化細胞中，MGMT的表達持續激活，但MGMT啟動子區報告基因并不被激活。MNU刺激顯著抑制MGMT基因啟動子區CpG的甲基化水平，同時抑制DNMT1與MGMT基因的結合，而且調控基因轉錄抑制和轉錄激活相關的組蛋白修飾類型H3K9met3與H3K4met2在該區域的富集分別減少和增加。此外，MGMT基因的高表達，抑制MNU誘導的GES-1惡性轉化細胞的增殖和克隆形成能力，利用MGMT特異性抑制劑O6-BG處理細胞，顯著促進MNU誘導的細胞惡性轉化進程。結論: MNU通過誘導MGMT基因DNA去甲基化，持續激活其表達。MGMT的表達上調抑制MNU誘導的人胃正常上皮細胞惡性轉化。本研究揭示了MGMT基因在MNU誘導的細胞惡性轉化中的表達調控機制，為進一步研究化學致癌物誘發腫瘤發生提供了新的實驗依據。

△E-mail: qihongyan@zju.edu.cn