生物鐘基因Clock通過調節前脂肪細胞增殖抑制脂肪形成的作用及機制研究

朱　珠，袁功盛，許利榮，陸　超，李曉波，孫　寧，錢睿哲(復旦大學基礎醫學院生理與病理生理學系，上海200433)

生物鐘基因Clock通過調節前脂肪細胞增殖抑制脂肪形成的作用及機制研究

朱珠，袁功盛，許利榮，陸超，李曉波，孫寧，錢睿哲△
(復旦大學基礎醫學院生理與病理生理學系，上海200433)

目的:探討Clock蛋白通過對前脂肪細胞3T3-L1增殖的調節來促進細胞成脂的作用和機制。方法:利用RNAi或Clock的高表達病毒載體，分別在3T3-L1中低表達或高表達Clock基因。CCK-8檢測細胞增殖，利用RT-PCR和Western blot技術檢測相關細胞周期蛋白和Clock蛋白的表達情況。利用染色質免疫共沉淀技術檢測Clock蛋白對Wnt信號通路關鍵因子的轉錄調節作用。結果: Clock蛋白可以促進3T3-L1細胞的增殖;同時在Clock基因低表達的3T3-L1細胞和ClockΔ19小鼠脂肪組織中，促進細胞周期進行的關鍵調控因子細胞周期蛋白D1、c-Myc和增殖細胞核抗原(PCNA)的表達受抑制。低表達Clock基因的3T3-L1細胞中，β-連環蛋白(β-catenin)表達量降低; ChIP結果發現Clock蛋白可與β-catenin、Dvl2 (dishevelled 2)和c-Myc上游啟動子結合，調控其轉錄激活，Wnt信號通路抑制劑可以抑制Clock蛋白促進細胞增殖的作用。結論: Clock蛋白可以通過調控Wnt信號通路來促進前脂肪細胞增殖，并進一步抑制脂肪分化程序的啟動，抑制細胞成脂。

△E-mail: rzqian@shmu.edu.cn