H P L C定量法基礎知識

中屋慎 小谷口美也子等

本文深入淺出地講解分析實驗中的各種問題，如對分析值誤差的理解、檢量線的意義、高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）定量法、高效陰離子變換色譜（high performance anion exchange chromatography-pulsed amperometric detector，HPAEC-PAD）分析法、高效液相色譜-電噴霧檢測器（highperformanceliquid chromatography-charged aerosol detector，HPLC-CAD）分析法、采用HPLC-CAD法進行食品中葡萄糖的定量等。分析方法大致分為兩種，第一種是直接定量對象物；第二種是依托與對象物有穩(wěn)定量化關系的物質，間接求得對象物的量值。分析中有可能出現(xiàn)由各種因素導致的誤差，如取樣、稱量、換算小數(shù)點、操作個人之間的習慣等等，總之所得結果往往不是絕對準確的。誤差是統(tǒng)計學上的一個重要概念，因此，1993年國際標準化組織等7個機構聯(lián)名出版了《如何表現(xiàn)檢測中誤差值之規(guī)范》的冊子，將誤差值定義為“檢測結果中出現(xiàn)的附著在檢測值上的合理性數(shù)值偏差”。由于將檢測過程中各操作的誤差全部數(shù)據(jù)化了，因此就能把整個檢測過程的誤差值統(tǒng)一計算出來，因而可以得到相當準確的檢測結果。

HPLC（高效液相色譜）法是檢測時間短重復性佳，且所用試樣量少的分析法，該設備是由分離試樣中的成分和感知溶出成分這兩種部分組成，因此該設備必須是能高效檢測對象物成分的結構，這樣就必須選用很適合的檢出器。高效陰離子交換色譜層析（HPAEC-PAD）法可高效檢測糖類和氨基酸類化合物，隨著試樣濃度的變化其出峰面積也會改變，因此每次都應使用標樣并制作檢量線圖。