高效液相色譜中定量分析中的誤差來源及消除

鐘芳芳

杭州胡慶余堂天然食品有限公司技術(shù)品質(zhì)部，浙江杭州 310053

高效液相色譜中定量分析中的誤差來源及消除

鐘芳芳

杭州胡慶余堂天然食品有限公司技術(shù)品質(zhì)部，浙江杭州 310053

高效液相色譜定量分析過程中一旦出現(xiàn)誤差將影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，其誤差來源主要為樣品前的處理、標(biāo)準(zhǔn)品的配置，有效減小誤差，可以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，在操作過程中操作者盡量將操作誤差減小到最低，有效消除誤差的來源非常重要。該文主要分析了高效液相色譜中定量分析中的誤差來源以及消除方法，以期為提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性提供幫助。

高效液相色譜；定量分析；誤差

高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支[1]，以液體為流動(dòng)相，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相采用高壓輸液系統(tǒng)泵入裝有固定相的色譜柱[2]，該方法已被廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué)、化學(xué)、農(nóng)學(xué)、工業(yè)、法檢等重要學(xué)科領(lǐng)域中。高效液相色譜中定量分析的主要目的是對已知和未知的組分進(jìn)行定量分析[3]，其操作過程中的誤差對結(jié)果的準(zhǔn)確性有重要的影響，該文主要總結(jié)了高效液相色譜中定量分析中的誤差來源及消除方法，現(xiàn)分析如下。

1 高效液相色譜法的概述

高效液相色譜法于1906年由俄國植物化學(xué)家茨維特（Tswett）首次提出[4]，1930年以后，相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術(shù)，1952年以后該技術(shù)得到迅速發(fā)展。高效液相色譜法具有高壓、高效、高靈敏度、應(yīng)用范圍廣以及分析速度快、載液流速快的特點(diǎn)，且其色譜柱可反復(fù)使用，具有流量穩(wěn)定、易回收、樣品不被破壞等優(yōu)點(diǎn)，但是也具有一定的缺點(diǎn)—“柱外效應(yīng)”[5]，且其靈敏度低于氣相色譜。高效液相色譜中定量分析的基本要求：有純物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)、符合定性參數(shù)的要求、被定量組分峰要與其他組分達(dá)到分離線、選擇合適定量方法。定量分析方法有標(biāo)準(zhǔn)曲線法、面積歸一化法、標(biāo)準(zhǔn)加入法、內(nèi)標(biāo)法。

2 高效液相色譜中定量分析中的誤差來源

2.1 樣品前的處理

樣品前的處理即樣品預(yù)處理，包括進(jìn)樣前的稱重、溶解、稀釋、過濾、萃取、衍生化、液相色譜等所有操作[6]。樣品處理前的主要問題為樣品的萃取，萃取過程中常常出現(xiàn)萃取率不高且不穩(wěn)定等問題，尤其在去除蛋白質(zhì)的過程中，如果蛋白質(zhì)變性而吸附一些組分，可降低萃取率。樣品處理前的稱量、溶液、稀釋等過程中均可因操作不標(biāo)準(zhǔn)而出現(xiàn)一定的誤差，稱量不準(zhǔn)確、所用儀器的精確度差、操作失誤、溶劑蒸發(fā)、溶解度不夠、溶液不均勻等均可影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，流動(dòng)相使用前使用真空泵進(jìn)行溶劑過濾時(shí)如果流動(dòng)相中有氣泡存在亦會(huì)降低分析靈敏度。樣品被污染、樣品損失、衍生化反映不完全或多種反應(yīng)物生成等均可影響結(jié)果，衍生反應(yīng)可影響試驗(yàn)的精確度或在整個(gè)樣品預(yù)處理過程中帶來誤差。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品的配置

標(biāo)準(zhǔn)品配制過程中影響準(zhǔn)確性的因素較多。標(biāo)準(zhǔn)品的純度、輸液泵故障、檢測儀器故障均可使結(jié)果產(chǎn)生一定的誤差[7]。配置過程中的誤差引起流動(dòng)相的組成發(fā)生變化可對tR值大的組分產(chǎn)生嚴(yán)重影響；標(biāo)準(zhǔn)品配置過程中柱溫的變化也是誤差產(chǎn)生的原因；色譜柱可對某一組分的平衡產(chǎn)生影響；分離過程中可因雜質(zhì)的干擾、樣品自身的變化產(chǎn)生一定的誤差；處理過程中漂移、噪音，峰形狀、分辨率等均是誤差的來源。

3 高效液相色譜中定量分析中的誤差消除方法

3.1 選擇適當(dāng)?shù)姆治龇椒?/p>

不同分析方法的準(zhǔn)確度不同，化學(xué)分析法對高含量組分測定的誤差較小，測量的準(zhǔn)確度較高；儀器分析法對低含量組分測定的誤差較小，靈敏度較高。根據(jù)準(zhǔn)確度及組分含量選擇合適的分析方法。

3.2 試劑

高效液相色譜分析中試劑要使用分析純、色譜純或者優(yōu)級(jí)純，不可使用含有雜質(zhì)的試劑。樣品溶液必須均勻而無顆粒，處理好的樣品在準(zhǔn)備上柱前應(yīng)對準(zhǔn)光線搖動(dòng),檢查樣品溶液中有無顆粒。萃取用的溶劑要具有揮發(fā)性好、毒性低、雜質(zhì)少、對待測樣品有良好的溶解度且又與水不相混溶[8]。操作過程中要減少樣品的稀釋次數(shù)，正確操作。

3.3 樣品預(yù)處理

如果色譜圖中出現(xiàn)無關(guān)峰可改變過濾類型或者將過濾器浸泡在樣品溶劑中并進(jìn)樣試驗(yàn)；或采用交替清洗技術(shù)。如果出現(xiàn)峰值比預(yù)期小則可：①嚴(yán)格按相同條件處理所用樣品;②改變過濾器類型;③采用交替清洗技術(shù)。如果回收率差則可能為萃取不完全所致，可以改變清洗方法或增加萃取時(shí)間[9]。如果色譜峰變寬則改進(jìn)清洗的方法。精確度差是可用自動(dòng)化處理裝置提高精度或者改進(jìn)/替換衍分離、生化、萃取或其他條件，增加平行測定的次數(shù)。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

配置標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)要先配置規(guī)定濃度的內(nèi)標(biāo)溶液，樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液中最好使用同一批次的內(nèi)標(biāo)溶液，增加平行測定的次數(shù)；將常用的標(biāo)準(zhǔn)溶液置于棕色溶液瓶中低溫儲(chǔ)存；配制維生素類標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)避光或置于棕色容量瓶中避免分解。

3.5 儀器與實(shí)驗(yàn)環(huán)境

儀器室與其他實(shí)驗(yàn)室應(yīng)相互隔離，儀器室內(nèi)應(yīng)安裝空調(diào)，保持儀器與實(shí)驗(yàn)室清潔，注意防腐、防潮、防震，空氣相對濕度應(yīng)＜70%[10]。操作時(shí)正確設(shè)定儀器的參數(shù)，避免儀器故障，不盲目操作，注意儀器的日常清潔和保養(yǎng)[11]。儀器要高度精確。

3.6 容器

瓷類、玻璃類、石英類、塑料類等為實(shí)驗(yàn)室最為常用的容器[12]，根據(jù)待測樣品的要求選擇相應(yīng)的容器。容器要清晰干凈，潔凈的容器是取得良好實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基本條件。

綜上所述，在分析過程中要仔細(xì)檢查有無系統(tǒng)的誤差，可通過對照實(shí)驗(yàn)校正檢測結(jié)果，盡量控制操作過程中的誤差，將誤差降到最低，使結(jié)果的準(zhǔn)確度更高。

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The Error Sources and Eliminate of Quantitative Analysis of High Performance Liquid Chromatography(HPLC)

ZHONG Fang-fang
Technical Quality Department,Huqing Natural Food co.,LTD of Hangzhou，Hangzhou，Zhejiang Province，310053 China

High performance liquid chromatography(HPLC)once appear in the process of quantitative analysis of the error will affect the accuracy of the results,the main error source as sample processing,in front of the standard configuration,effectively reduce the error,can enhance the accuracy of analysis results,the operator in the process of operation as far as possible to minimize the operating error,effectively eliminate the source of error is very important.This article mainly analyzes the quantitative analysis of error sources in high performance liquid chromatography(HPLC)and eliminate method,in order to offer help to improve the accuracy of the experiment.

High performance liquid chromatography(HPLC);Quantitative analysis;Error

R9

A

1672-5654（2015）12（b）-0102-03

2015-09-13）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2015.35.102

鐘芳芳（1982.5-），女，浙江杭州人，本科，工程師，研究方向：產(chǎn)品質(zhì)量控制。