EphrinA1及其受體EphA1在直腸癌中的表達及意義

張靜 徐斌

830000新疆醫科大學附屬中醫醫院病理科1

830000新疆醫科大學附屬中醫醫院肛腸科2

EphrinA1及其受體EphA1在直腸癌中的表達及意義

張靜1徐斌2

830000新疆醫科大學附屬中醫醫院病理科1

830000新疆醫科大學附屬中醫醫院肛腸科2

目的：探討EphrinA1及其受體EphA1在直腸癌中的表達及其意義。方法：檢測40例直腸癌標本及40例癌旁組織標本EphrinA1及其受體EphA1的表達。結果：直腸癌EphrinA1陽性率、EphA1陽性率明顯高于癌旁組織（P＜0.01）?！?5歲直腸癌患者與＞65歲直腸癌患者EphrinA1陽性率、EphA1陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。結論：直腸癌的發生、發展可能和EphrinA1及其受體EphA1的異常表達有關。EphrinA1及其受體EphA1有望成為抗血管治療新的靶點。

EphrinA1；EphA1；直腸癌；免疫組化

直腸癌是最常見的消化系統惡性腫瘤，其發生、發展是多基因、多步驟參與的分子事件，包括多個癌基因的激活、抑癌基因的失活和基因組穩定性調控系統等多種改變。受體酪氨酸激酶包括血管生成素1、2（angiopoietin1、2）及其受體、血管內皮細胞生長因子（VEGF）及其受體、促紅細胞生成素肝細胞癌細胞株 受 體 配 體（EphrinA1）及 其 受 體Eph（erythropoietin-producecline），已經被公認為血管生成的重要信號因子。EphrinA1和EphA1參與多種腫瘤的發生和發展及腫瘤組織中血管的形成，其與血管生成的關系越來越被重視[1]，是功能強大的癌基因，對血管生成具有重要的作用。但直腸癌組織中EphrinA1和EphA1的表達及與其發生和發展的關系目前尚不清楚。本研究采用免疫組化方法探討EphrinA1和EphA1在直腸癌組織中的表達，從分子水平上預測腫瘤的起源和發展，為干預腫瘤發生和發展奠定基礎。

資料與方法

選取新疆醫科大學附屬中醫醫院病理科2012-2014年直腸癌標本40例及癌旁組織標本40例作為研究對象，所有標本均檢測EphrinA1、EphA1。試劑購自Santa Cruz試劑及邁新試劑。

方法：按試劑盒說明書操作，PBS代替一抗作為陰性對照，已知陽性的腫瘤標本作為陽性對照。

免疫組化步驟如下：石蠟切片烘烤脫蠟至蒸餾水，PBS沖洗兩遍；3％H2O2室溫孵育5～10 min，消除內源性H2O2酶活性；蒸餾水洗，PBS浸泡5 min；切片抗原修復；滴加封閉用血清，室溫10 min；加入一抗4℃濕盒中過夜；PBS沖洗兩遍；生物素標記二抗，37℃孵育30 min；PBS沖洗兩遍；切片加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶溶液37℃處理30 min；PBS沖洗3遍；切片DAB顯色，顯微鏡下觀察3～10 min。自來水充分洗蒸餾水洗5～10 s；蘇木素復染；梯度酒精脫水、二甲苯透明，樹膠封固，光鏡下觀察EphrinA1及其受體EphA1的表達。

結果判斷：光鏡下觀察：EphrinA1的表達主要見于腫瘤細胞的胞質或胞膜，在腫瘤血管內皮細胞也有弱陽性表達，EphA1的表達主要見于腫瘤細胞的胞質或胞膜，在腫瘤血管內皮細胞及一些巨噬細胞中也有表達。

統計學處理：采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行統計學分析，采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

結果

EphrinA1及EphA1在直腸癌和癌旁組織中的表達：癌旁組織EphrinA1陽性率20％，直腸癌中EphrinA1陽性率62.5％，直腸癌中EphrinA1陽性率明顯高于癌旁組織，差異具有統計學意義（P＜0.01）。癌旁組織 EphA1陽性率（22.5％）低于直腸癌EphA1陽性率（75％），差異具有統計學意義（P＜0.01）。

EphrinA1及EphA1在不同年齡直腸癌患者中的表達情況：≤65歲直腸癌患者的EphrinA1陽性率（73.68％）高于＞65歲直腸癌患者的 EphrinA1陽性率（52.38％），但差異無統計學意義（P＞0.05），說明EphrinA1的表達與患者的年齡無關。≤65歲直腸癌患者的EphA1陽性率（68.42％）小于＞65歲直腸癌患者的EphA1陽性率（80.95％），差異無統計學意義（P＞0.05），說明EphA1的表達與患者的年齡無關。見表1。

討論

直腸癌的發生、發展可能和EphrinA1及其受體EphA1的異常表達有關。已知有多種生長因子及細胞因子參與腫瘤血管生成。受體酪氨酸激酶包括血管生成素1，2及其受體、Ephrin及其受體Eph和VEGF及其受體，已經被公認為血管生成的重要信號分子。Eph/Ephrin是已知酪氨酸激酶中的最大成員[2]，EphA1是受體酪氨酸激酶一個亞族Eph家族中的第一個成員。配體稱為EphrinA1，只有受體和配體結合才具有活性，發揮生物學功能，它們在腫瘤發生、發展和血管形成中起著舉足輕重的作用。血管形成為實體瘤生長奠定基礎，同時也是轉移的重要途徑。關于Eph基因在腫瘤發生、發展中的作用的報道逐漸增多，Hirai等通過Northern印跡法發現[3]，EphA1的mRNA在肺腺癌、乳腺癌、結腸癌、肝癌高表達，為家族參與腫瘤的發生發展提供了有力證據。本研究發現EphrinA1及其受體EphA1在直腸癌中的表達明顯高于癌旁組織，說明了EphrinA1及其受體EphA1參與了直腸癌的發生、發展，EphrinA1與其受體EphA1結合，參與并促進直腸癌組織的血管生成，從而促進癌細胞的生長、浸潤、轉移。EphrinA1及其受體EphA1表達與年齡無關。

Expression and significance of EphrinA1 and EphA1 in rectal carcinoma

Zhang Jing1，Xu Bin2
Department of Pathology，the Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University 8300001The Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University 8300002

Objectives：To study the expression and significance of EphrinA1 and EphA1 in rectal carcinoma.Methods：The expression of EphrinA1and EphA1 were detected in 40 specimens rectal carcinoma tissue and 40 specimens of paracarcinoma tissue.Results：The positive rate of EphrinA1 and positive rate of EphA1 in rectal carcinoma were lower than in paracarcinoma tissue（P＜0.01）.The positive rate of EphrinA1 and positive rate of EphA1 in patients with rectal carcinoma more than 65 years old were not different from that in patients with rectal carcinoma less than 65 years old（P＞0.05）.Conclusions：The occurrence and development of rectal carcinoma were correlated with abnormal expression of EphrinA1，EphA1.EphrinA1 and EphA1 could become the new targets for the anti-angiogenesis treatment.

EphrinA1；EphA1；Vascular endothelial growth factor；Rectal carcinoma；Immumohistochemistry

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.33.3

新疆醫科大學創新基金（直腸癌EphrinA1及EphA1表達與血管生成關系的研究XJC201296）

Foundation item Innovation fund of Xinjiang Medical University（Expression and significance of EphrinA1 and EphA1 in rectal carcinoma XJC201296）