GS環保固定與傳統固定染色在冷凍切片中應用

林紅

[摘要]目的 探討GS環保固定在冷凍切片中應用價值。 方法 選取標本300例，150例進行GS固定，150例使用傳統固定液，比較兩組在使用上出現刺激性氣味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例，并對骨組織脫鈣和肺癌TIF-1+固定效果進行比較。 結果 GS固定染色套液臨床使用上出現刺激性氣味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例顯著低于常規組（P<0.05）。 結論 GS環保套液效果滿意，具有在病理技術工作中推廣應用的價值。

[關鍵詞]GS環保固定；傳統固定；冷凍切片

[中圖分類號]R446.8 [文獻標識碼]B [文章編號]2095-0616（2014）20-139-03

GS environmental fixed and traditional fixed for stained in frozen sections

LIN Hong

Department of Pathology，the First Peoples Hospital of Shenyang City，Shenyang 110041，China

[Abstract]Objective To study the effect of GS environmental fixed and traditional fixed for stained in frozen sections. Methods 300 cases specimen were choosed，150 parts were used GS environmental fixed，150 cases were used conventional fixed，then pungent odor appeared and poor staining of fixed effects and the effect of the proportion of lung cancer and bone decalcification and TIF-1+ fixed effects in the two groups were comparedd. Results Appear pungent odor liquid fixed and stained for clinical use on GS sets，poor results and poor staining of fixed effects were significantly lower than conventional group（P<0.05）. Conclusion GS environmental fixed is satisfactory，it can huge promotion and application of technical work in the pathological value.

[Key words]GS environmental fixed；Conventional fixed；Frozen sections

醫生可利用冷凍切片進行準確診斷，而固定與染色是決定冷凍切片是否能達到高水準的關鍵，所以應重視固定液與染液的選擇和應用。目前常見的固定液類目廣泛，但都達不到環保標準，且部分固定液，固定耗時長，顯示效果差，對比度差，且易造成細胞腫脹、變形、空泡，易導致漏診、誤診，延誤治療[1]。同時95%乙醇長時間固定無法保證組織細胞的形態，將固定時間縮短后，使用GS染色套液染色能夠避免以上缺點，制片效果良好。傳統固定液HE套液雖具有較好的臨床效果，但其包含的二甲苯會導致人體神經系統、造血系統受損，且汞成分的使用也達不到環保排放的要求[2]。故本研究主要采用GS固定染色套液對病理切片進行冰凍切片處理，并與傳統固定染色套液進行比較，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2013年6～12月我院手術標本300例，其中有甲狀腺、肝、腎、子宮、輸卵管、腦、卵巢以及腸道等，隨機選擇其中150例進行GS固定染色套液固定（哈爾濱格林標本技術開發有限公司研制并生產），另150例則使用傳統固定液（主要成分為二甲苯）進行固定。

1.2 GS固定染色套液制片法及使用制劑

通過無醛型固定液對組織標本進行浸泡，并分別于固定后1、3、6、12、24h提取組織標本進行處理，使用的設備為SHANDON全自動病理組織固定切片機，依次使用組織固定劑、醫用酒精、無水酒精、組織脫水劑、組織透明劑、浸蠟處理以及石蠟包埋等過程。對病理標本進行切片、HE染色、免疫組化染色和熒光原位雜交檢測等。

1.3 研究方法及觀察指標

所有標本進行編號，并按照數字隨機法分為兩組，比較兩組使用上出現刺激性氣味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例，并對骨組織脫鈣和肺癌TIF-1+固定效果進行比較。

1.4 統計學處理

應用SPSS13.0進行，計量資料以（x±s）表示，兩組間均數的比較使用t檢驗，組間率的比較采用x2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

GS固定染色套液臨床使用上出現刺激性氣味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例顯著低于常規組（P<0.05）。見表1，圖1～4。

3 討論

對手術標本進行組織處理時，組織固定會直接影響染色的效果。傳統的固定組織以甲醛為主。它能有效穿透組織，較好的保持了組織原有形態，且使用成本低，所以至今仍被廣泛應用。甲醛的主要缺點：（1）揮發性強，刺激性和腐蝕性很強，環境危害嚴重，且難以防護。研究表明[3]，甲醛接觸皮膚會引發皮膚過敏等癥狀。長期使用甲醛還會誘發慢性呼吸道疾病、癌癥發生，白細胞數量減少，記憶力和智力下降。（2）長時間存放的甲醛會部分轉化為三聚甲醛，導致固定組織標本效果不佳[4]；（3）甲醛易氧化成甲酸，在進行固定染色時會使標本酸化，導致染色效果不佳[5]；在對陳舊組織固定時，易在組織內形成甲醛色素，從而影響病理診斷；（4）無法固定肝糖原和尿酸；（5）廢液需要進行出來才能排放，處理成本較高。（6）醛類固定液在處理標本時會引發組織內蛋白質交聯，不利于DNA的保存。隨著對實驗室環境安全要求的提高，研發沒有毒性的甲醛替代品已經迫在眉睫[6]。目前國外已經在這方面有相關研究報道，但國內仍處于落后狀態[7]。本文選擇了國產GS固定液。GS組織標本固定脫水試劑不但能夠有效軟化組織，且穿透性高。在固定組織的同時還能進行脫水和脫脂。酸性溶液能夠較好的保存DNA[8]。與常規制片效果相似，符合某些腫瘤分子生物學研究要求。因此其能較好應用于組織標本，無毒無害，符合環保要求。

本研究常規固定法使用的二甲苯被用于傳統組織處理和染色中，它揮發性強，對人體危害極大。會嚴重刺激中樞神經和植物神經，長時間接觸會引發頭昏目眩、肢體顫抖、免疫功能減退等，并有致癌效果。二甲苯還會對環境造成嚴重的污染，如大量廢棄二甲苯進入下水道會導致城市水污染。為克服二甲苯的缺陷，有學者嘗試使用替代品：如脫色汽油、硬脂酸、異丙醇、松節油等，但最終效果仍然不理想。本組選擇的GS環保型固定染色套液，這些試劑都是無非苯無毒型，完全避免了二甲苯造成的人體傷害及環境污染。GS脫蠟劑，脫蠟完全，時間少。GS透明劑穿透組織能力強，處理組織觸感好，即使是長時間浸泡組織標本也不會引發收縮和硬化現象，不會脆化組織。本研究如圖1～4所示，圖2及圖4相對于圖1和圖3，其示片更為清晰，且所耗時間短，臨床診斷更明確。

GS脫水液能做到恰當脫水，不會出現脫水不足或過度的問題，可同時處理多個大小組織。GS環保套液無醛、無苯、不易揮發，生物降解難度低，不會造成環境污染[9]。其主要特點：（1）能輕易透過組織，節省脫水時間；（2）不會破壞組織形態學結構，保持細胞膜完好；（3）在固定、脫水、脫脂和硬化方面表現良好，不會造成組織收縮過度、細胞空泡消失與核固縮小等問題[10]；（4）保持了大體標本的觸感，有助于有針對性的分離并切取組織塊，避免脂肪組織標本出現粘滑感及粘稠性，能夠快速有效清潔[11-12]；（5）避免了組織抗原與蛋白質DNA的破壞；（6）DNA和RNA保存完整，利于細胞顯示和生物學研究[12]；（7）廢液回收處理方便；（8）染色步驟簡化，節省時間。相比傳統方法制片，GS套液環保效果令人滿意，適用于臨床病理診斷，避免了甲醛和二甲苯產生的負面影響，達到了實驗室環保標準，在病理技術工作中推廣應用的價值巨大。

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（收稿日期：2014-07-14）