結腸腺癌患者術后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達及意義

屈中玉 (南陽市中心醫院腫瘤內科一病區，河南 南陽 473009)

結腸腺癌患者術后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達及意義

屈中玉 (南陽市中心醫院腫瘤內科一病區，河南 南陽 473009)

目的 應用免疫組化方法檢測結腸腺癌中NADPH:醌氧化還原酶(NQO)-1、組織蛋白酶(Cath)-D和Ki-67增殖指數(Ki-67)的表達，分析其關系及臨床意義。方法 經病理確診的124例結腸腺癌術后組織及臨床資料作為觀察組，80例上皮內瘤變的結腸黏膜組織作為對照組，80例正常結腸黏膜組織作為正常對照組，應用免疫組化方法檢測三組中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達。結果 三組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達的陽性率差別有統計學意義，觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度、TNM分期、脈管浸潤、淋巴結轉移密切相關。相關性分析顯示NQO-1和Ki-67、Cath-D和Ki-67的表達均具有正相關性。結論 結腸腺癌術后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67均高表達，NQO-1和Cath-D均與Ki-67的表達具有協同作用，對促進腫瘤的發生、進展和增殖有一定作用。

結腸腺癌;NQO-1;Cath-D;Ki-67;免疫組化

結腸腺癌病變形成及發展過程中多種蛋白表達失調，并對腫瘤的微環境有重要影響。NADPH:醌氧化還原酶(NQO)-1是一種黃素酶，在多種腫瘤中高表達，也是促進腫瘤進展的重要蛋白〔1，2〕。組織蛋白酶(Cath)-D是與腫瘤生長、增殖和侵襲相關的蛋白，在多種腫瘤中高表達，可以加速腫瘤惡變和浸潤，同時參與胚胎發育、腫瘤形成及血管生成過程〔3，4〕。Ki-67增殖指數與腫瘤細胞增殖狀態相關，標記腫瘤細胞增殖的特異性強〔5〕。本文應用免疫組化方法檢測結腸腺癌術后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達，探討其關系及臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年1月至2012年12月在我院行結腸腺癌根治的手術患者共124例作為觀察組，統計患者臨床資料并留取術后的蠟塊組織。完全符合WHO中的具體診斷標準。其中男70例，女54例;年齡54～78歲，平均67.6歲。高分化60例，中分化30例，低分化34例。術前均未進行放、化療。80例上皮內瘤變的結腸黏膜組織作為對照組，其中男40例，女40例，年齡56～77歲，平均66.8歲。選取觀察組中距離腫瘤邊緣＞3 cm的正常結腸黏膜組織80例作為對照組，其中男41例，女39例;年齡55～76歲，平均66.5歲。三組一般資料無明顯差別。

1.2 NQO-1、Cath-D和 Ki-67表達的檢測 NQO-1、Cath-D和Ki-67抗體均為濃縮液，依不同比例進行稀釋后應用免疫組化SP法、DAB染色進行預實驗，并設陽性對照和陰性對照。選擇最理想的配比濃度進行正式實驗。正式實驗應用免疫組化SP法。嚴格按說明書操作，嚴格質控。

1.3 NQO-1、Cath-D和Ki-67陽性的判定方法 NQO-1、Cath-D的陽性表達均位于細胞質中(少數表達于細胞核中的均不計數)，Ki-67陽性表達均位于細胞核中，以染成棕黃色顆粒為陽性細胞，計數10個400倍視野，取陽性細胞的平均值，NQO-1、Cath-D以陽性率≥5%為陽性，以陽性率＜5%為陰性。Ki-67以陽性率≥25%為陽性，以陽性率＜25%為陰性。

1.4 統計學方法 應用SAS6.12軟件進行χ2檢驗。

2 結果

2.1 3 組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達陽性率的比較 正常對照組、對照組和觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達的陽性率有增高趨勢。見表1。

2.2 觀察組不同臨床特征中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達陽性率的比較 觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度、TNM分期、脈管浸潤、淋巴結轉移密切相關。見表2。

表1NQO-1、Cath-D和Ki-67在3組中表達的比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床特征中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達陽性率的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達的相關性 觀察組中 NQO-1和 Ki-67(r=0.49，P=0.011 3)、Cath-D 和 Ki-67(r=0.48，P=0.020 9)的表達具有正相關性，而NQO-1和Cath-D的表達未見明顯相關性(P＞0.05)。

3 討論

結腸腺癌是一種上皮性腫瘤，居男性腫瘤的第四位，女性腫瘤的第三位，其發病涉及多種因素，如遺傳易感性、基因突變、增生失調等。多種腫瘤相關基因異常表達是促進腫瘤進展的重要因素。NQO-1蛋白是一種胞質黃素酶，其基因定位于16q22染色體，在正常組織中有微量表達〔6，7〕。有研究認為不同NQO-1基因亞型編碼的酶類呈現不同的活性〔8〕。如由TT純合子誘導的NQO-1活性失調，可以引起肝細胞對外源性致腫瘤物質的解毒功能下降〔9〕。也有研究則認為NQO-1可以作為一個氧化應激反應調節因子，對惡性腫瘤的進展起一定的調節作用〔8〕。李琰等〔10〕認為 NQO-1的表達變化，可以使機體對環境致癌因素的解毒功能降低，使細胞易受到氧化損傷，增加對化學致癌物引起腫瘤的易感性。Cath-D是一種溶酶體天冬氨酸蛋白酶，參與腫瘤的發生、侵襲和轉移〔11，12〕，Cath-D還可以作為雌激素調節的溶酶體蛋白酶〔13〕，調節腫瘤細胞的增殖和細胞間的黏附作用〔14，15〕。NQO-1、Cath-D 均可能對腫瘤的惡變有一定影響。

本實驗結果提示NQO-1、Cath-D、Ki-67三種蛋白在腫瘤發生過程中起重要的促進作用，NQO-1、Cath-D可能通過促進Ki67增殖發揮重要的促進腫瘤進展作用。三種蛋白參與腫瘤由幼稚到成熟的內在過程，也顯示出三種蛋白在細胞惡變起始過程中起的作用。三種蛋白參與腫瘤的生長及侵襲全過程，即當NQO-1、Cath-D和KI-67高表達時，引起腫瘤細胞呈蟹足樣生長，對周圍的破壞能力增強，對局部微環境的影響大。三種蛋白參與腫瘤的進展，尤其是參與腫瘤的淋巴道播散和遠處播散的過程中。TNM分期是臨床判斷腫瘤生物學行為和預后的重要指標，因此聯合檢測NQO-1、Cath-D和Ki-67高表達可能預示著腫瘤的不良預后，后續實驗將關注患者生存，以證實此觀點。NQO-1、Cath-D在對腫瘤影響過程中，全程參與了細胞的增殖過程，尤其是失控性增殖反應過程〔16，17〕。近來也有研究顯示NQO-1激活后，凋亡信號傳導受到影響，正常細胞的不斷增生繁殖，而凋亡受到阻滯，細胞逐漸惡變〔18〕。因此NQO-1也可能是調節凋亡的重要因子。有學者認為NQO-1具有癌基因的許多特征，如誘導非錨定依賴性細胞周期進展等生物學行為過程〔19〕。

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R735.3

A

1005-9202(2015)09-2435-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.09.057

屈中玉(1972-)，男，碩士，副主任醫師，主要從事惡性腫瘤基因靶向及綜合治療研究。

〔2013-11-21修回〕

(編輯 苑云杰)