多指標正交試驗優選止癢乳膏提取工藝

劉　崢，周芙瓊，夏崇才，隆紅艷

(南京市中醫院1.中醫藥研究所；2.中心實驗室；3.兒科，江蘇 南京　210001)

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多指標正交試驗優選止癢乳膏提取工藝

劉崢1,2，周芙瓊1,2，夏崇才1，隆紅艷2,3

(南京市中醫院1.中醫藥研究所；2.中心實驗室；3.兒科，江蘇 南京210001)

摘要：目的優選止癢乳膏的最佳提取工藝。方法采用正交試驗法，以鹽酸小檗堿、芍藥苷的含量及干浸膏得率為指標，多指標綜合評分法處理數據，優化溶劑用量、提取次數和提取時間3個因素。結果止癢乳膏的最佳提取工藝為加6倍量水，煎煮3次，提取40 min。結論優選得到的止癢乳膏提取工藝穩定合理可行。

關鍵詞：止癢乳膏；正交試驗；多指標；提取工藝

止癢乳膏處方原為南京市中醫院臨床使用的醫院制劑方，由黃柏、赤芍、蒼術、羊蹄、地膚子等中藥組成，功能燥濕止癢、清熱解毒。原方以洗劑應用，存在藥物易流散、載藥量小、有效成分濃度低、作用時間短、生物利用度低的劣勢與不足。開發成乳膏劑后不但能改善以上不足，而且乳膏作為固型劑具有潤膚保濕作用，有利于維護皮膚屏障功能，尤其適合像特應性皮炎這樣因反復瘙癢—搔抓而致的結疤、皸裂、苔蘚樣變等皮損。方中黃柏為該乳膏的君藥，有清熱燥濕，瀉火解毒的功效，含有小檗堿、黃柏堿、巴馬汀等多種活性物質[1-3]，其中鹽酸小檗堿能抑菌、抗炎、抗病毒，能較好地抑制多種革蘭陽性菌和陰性菌[4-7]；赤芍清熱燥濕，涼血化瘀，其主要有效成分是芍藥苷，能較好的抑制炎性水腫和抗過敏反應[8-9]。為提高止癢乳膏的質量，筆者以鹽酸小檗堿、芍藥苷含量和干浸膏得率為評價指標，采用多指標正交試驗法優選其水提工藝。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1290 Infinity超高效液相色譜儀；JB-5型磁力加熱攪拌器(金壇市盛藍儀器制造有限公司)；Barnstead LabTower EDI 15超純水儀(Thermo Scientific)；MS105DU電子分析天平(Mettler Toledo)；22R entrifuge冷凍離心機(Beckman)。

1.2試藥處方所用中藥材(均由安徽滬春堂中藥飲片有限公司提供)經過南京中醫藥大學生藥教研室鑒定為合格品，且符合2010版《中國藥典》要求。對照品鹽酸小檗堿、芍藥苷(批號分別為：110713-200910、110736-201136)，均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純(Sigma)，水為超純水(Thermo)，磷酸為分析純(南京化學試劑有限公司)。

2方法與結果

2.1試驗設計采用L9(34)正交試驗優選止癢乳膏的提取工藝，以有效成分鹽酸小檗堿、芍藥苷的含量和干浸膏得率為本試驗的主要考察指標，對提取次數、溶劑用量和提取時間進行考察，因素及水平見表1。

表1　止癢乳膏提取工藝因素及水平

按處方組成稱取藥材9份，每份127.5 g，分別根據L9(34)正交試驗表，加入設計量的水，按所設計的提取次數和提取時間進行提取，過濾所得提取液，再減壓濃縮至100 mL，備用。

2.2指標成分的含量測定

2.2.1色譜條件[10]色譜柱：Aglient ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)；檢測波長240 nm；柱溫30℃；流速0.4 mL·min-1；進樣量5 μL；流動相：甲醇(A)—0.1 %磷酸水溶液(B)梯度洗脫，洗脫程序見表2。

表2　流動相梯度程序

2.2.2線性關系考察[10]精密稱取適量鹽酸小檗堿和芍藥苷對照品，以甲醇溶解，得到含17.3 mg·L-1鹽酸小檗堿和159.5 mg·L-1芍藥苷的混合對照品溶液，按“2.2.1”項下的色譜條件，分別精密吸取2、4、6、8、16、32 μL注入超高效液相色譜儀，測定色譜峰面積，以峰面積(Y)對混合對照品的進樣量(X)進行線性回歸，計算得到鹽酸小檗堿標準曲線方程為：Y=136.55X-9.860 8 (r=0.999 9)，芍藥苷標準曲線方程為：Y=462.99X-8.286 5 (r=0.999 9)。線性范圍分別為：0.034 6～0.553 6，0.319 0～5.10 4 μg。

2.2.3樣品測定精密量取按各提取工藝制備的濃縮液1 mL置10 mL棕色量瓶中，加入甲醇定容至刻度，超聲30 min，放冷搖勻，經0.22 μm微孔濾膜過濾即得。分別精密吸取5 μL各供試品溶液注入超高效液相色譜儀，按上述方法進行含量測定,見圖1。

2.3浸出物含量的測定精密量取按各提取工藝制備的濃縮液25 mL，平行3份，置于干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干后于105℃干燥3 h，再轉于干燥器中冷卻30 min，迅速稱定各個質量[1]，結果見表3。

表3　正交試驗結果

2.4正交試驗結果根據處方配比，黃柏為本方的君藥，赤芍為臣藥，同時為了總體控制水煎煮工藝的提取效率，將干浸膏得率作為優化提取工藝的總體考察指標，按照所設計的正交試驗表進行試驗，分別測定有效成分鹽酸小檗堿、芍藥苷的含量和干浸膏得率，再以各個指標的最大值為參照，將所得的數據進行歸一化，按照各指標的權重進行綜合評分。分別設置鹽酸小檗堿(X)、芍藥苷(Y)和干浸膏得率(Z)的權重系數分別為0.4，0.3，0.3。以綜合值進行統計分析，其中綜合評分M= (0.3X/0.93+0.4Y/5.59 0.3Z/36.74)×100。結果見表3，4。

表4　方差分析

注:F0.10(2,2)=9.0，F0.05(2,2)=19.0。

2.5試驗結果分析由方差分析結果顯示，A(提取次數)是主要影響因素，具有顯著性(P<0.05)，因素B(溶劑用量)、因素C(提取時間)的影響則無顯著意義，各因素作用主次為A>B>C。同一因素的3個水平比較得知：A3>A2>A1，B2>B3>B1，C2>C3>C1。考慮到經濟節能的因素，最終確定最佳提取工藝為A3B1C1，即加6倍量水，煎煮3次，提取40 min。

2.6工藝驗證試驗根據優選的最佳水提工藝條件，按止癢乳膏處方量稱取3份藥材進行驗證，結果主要指標成分鹽酸小檗堿的含量為0.92 g·L-1，芍藥苷的含量為5.49 g·L-1，干浸膏得率為31.19 %，RSD分別為1.09 %，1.54 %，1.79 %。試驗結果表明，所優化得到的提取工藝方法合理可靠，簡單易重復，可以作為止癢乳膏的提取工藝。

3討論

本文通過多指標正交試驗，優化止癢乳膏提取工藝中的提取溶劑水的用量、提取次數和提取時間3個因素，并經過驗證試驗，最終確定其最佳提取工藝為加6倍量的水，煎煮3次，每次提取40 min。結果表明所優選的止癢乳膏提取工藝簡單，合理穩定，可操作性強，適合放大生產。

止癢乳膏處方含有鹽酸小檗堿、芍藥苷等有效物質，其中君藥黃柏的鹽酸小檗堿類擁有較好的消炎、抑菌作用，臣藥芍藥的芍藥苷類成分具有較好的抗炎、抗菌、鎮痛等作用[11-13]。考慮到中藥具有多組分、多靶點的特點，如果僅僅以單一成分進行提取工藝的考察，則稍有欠缺，而以多指標來控制和評價中藥制劑的質量，能更合理地保證制劑與藥效統一。因此，本實驗采用主客觀結合的多指標正交設計試驗[14]優選止癢乳膏的水提工藝，經過驗證試驗，所篩選得到的水提工藝具有良好的合理性和全面性，適合用于放大生產。

中藥復方制劑成分復雜，通過多指標正交試驗法優選其提取工藝可有效地控制其質量。根據指標間的重要性差異給出權重，消除由于不同指標量綱不同、含量差異較大對結果造成的影響，綜合評分后再進行分析。本實驗中，黃柏為止癢乳膏的君藥，赤芍為臣藥，而干浸膏得率能反映水煎煮工藝的提取效率，故分別設置有效成分鹽酸小檗堿、芍藥苷含量以及干浸膏得率的權重系數為0.4，0.3，0.3。這種多指標綜合評分的方法可以根據不同指標在復方中的作用不同給予不同的權重，更符合中醫復方用藥的特色。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[2]周松,劉永剛,張國祥,等.黃柏化學成分及質量控制研究進展[J].中國藥房,2012,23(39)：3740-3742.

[3]李行諾,翟文豐,周孟宇,等.黃柏化學成分研究[J].浙江工業大學學報，2012，40(3)：244-246.

[4]丁南南,童珊珊,丁麗霞,等.小檗堿的分析方法及藥理作用研究進展[J].藥物分析雜志,2012,32(7)：1296-1300.

[5]鄭洪艷,徐為人.小檗堿藥理作用研究進展[J].中草藥,2004，35(6)：708-711.

[6]梁園園,于天浩,陳萍,等.黃柏的藥理活性及在化妝品中的應用[J].遼寧中醫藥大學學報,2013,15(1)：149-151.

[7]張冠英,董瑞娟,廉蓮.川黃柏、關黃柏的化學成分及藥理活性研究進展[J].沈陽藥科大學學報,2012，29(10):812-820.

[8]王瑞,魯嵐,李穎偉,等.赤芍與白芍的藥理作用比較[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(7)：112-114.

[9]陸小,馬驍,王建,等.赤芍的化學成分和藥理作用研究進展[J].中草藥,2015,46(4)：595-602.

[10] 周芙瓊,夏崇才,隆紅艷,等.UPLC法同時測定止癢洗劑中鹽酸小檗堿、芍藥苷和大黃素的含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2014,25(6):730-733.

[11] 冀蘭鑫,黃浩,李長志,等.赤芍藥理作用的研究進展[J].藥物評價研究,2010,33(3)：233-236.

[12] 金英善，陳曼麗，陶俊.芍藥化學成分和藥理作用研究進展[J].中國藥理學與毒理學雜志，2013，27(4)：745-750.

[13] 張婷.HPLC法同時測定胃氣痛片中芍藥苷與橙皮苷的含量[J].安徽醫藥,2014,18(11)：2077-2079.

[14] 陳雯,杜守穎，陸洋優.多指標正交試驗優選仙靈骨葆膠囊中丹參、補骨脂提取工藝[J].中國中藥雜志，2009,34(14):1792-1794.

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.12.013

基金項目：南京市醫學科技發展重點項目(No ZKX13048)；南京市科技發展計劃項目(No 201308046)

作者簡介：劉崢，女，博士研究生

通信作者：隆紅艷，女，副主任中醫師，碩士生導師，研究方向：小兒神經及精神系統疾病、脾胃系統疾病的臨床及實驗研究， E-mail：hongyan3128@163.com

(收稿日期：2015-07-17，修回日期：2015-09-10)

Optimization of extraction technology for Zhiyang Cream
by multi-index orthogonal test

LIU Zheng1,2,ZHOU Fu-qiong1,2,XIA Chong-cai1,et al

(1.TCMResearchInstitution；2.CentralLaboratory，NanjingHospitalofTCM,

Nanjing，Jiangsu210001,China)

Abstract:ObjectiveTo optimize extraction technology of Zhiyang Cream.MethodsAn orthogonal test was adopted in this study.With berberine hydrochloride,paeoniflorin and yield of extract as indexes,data processing was carried out with the multiple guidelines grading method for optimizing extraction times,the amount of solvents and extraction time.ResultsThe best extraction technology was to extract for 3 time with 6-fold water and 40 min each time.ConclusionThe optimized extraction technology is reasonable,feasible,stable,and the extraction rate of the active principles is high.

Key words:Zhiyang Cream;orthogonal test;multi-index;extraction technology