痛風(fēng)丸中丹皮酚的含量測(cè)定

劉傳玲劉元昆榮飛

（1威海市藥品檢驗(yàn)所，山東 威海 264200；2威海市中醫(yī)院）

痛風(fēng)丸中丹皮酚的含量測(cè)定

劉傳玲1劉元昆2榮飛1

（1威海市藥品檢驗(yàn)所，山東 威海 264200；2威海市中醫(yī)院）

目的：建立高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定痛風(fēng)丸中丹皮酚的含量測(cè)定方法。方法：色譜條件：紫外檢測(cè)器Aglient C18柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm），以甲醇-水（40∶60）為流動(dòng)相，流速為0.8 m L/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為274 nm，柱溫為30℃。結(jié)果：丹皮酚在0.104 7～ 1.047 0 mg/m L范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，回收率為99.78%，RSD=0.39%。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便，快速，準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于痛風(fēng)丸中丹皮酚含量的測(cè)定。

痛風(fēng)丸；高效液相色譜法；丹皮酚；含量測(cè)定

痛風(fēng)丸是醫(yī)院制劑，本制劑處方由徐長(zhǎng)卿、黃柏、蒼術(shù)、薏苡仁等 15味中藥組成，具有健脾益腎，清宣降濁，活血通絡(luò)的功效，用于痛風(fēng)及痛風(fēng)引起的腰痛、關(guān)節(jié)痹痛、紅腫熱痛等癥。方中徐長(zhǎng)卿為君藥，丹皮酚是徐長(zhǎng)卿的主要有效成分[1]。為控制質(zhì)量，以丹皮酚作為本制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。目前，丹皮酚的含量測(cè)定方法已被《中國(guó)藥典》2010年版一部收載。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)本制劑中丹皮酚進(jìn)行了含量測(cè)定方法的研究，通過(guò)方法學(xué)的系統(tǒng)考察和3批樣品的含量測(cè)定，建立了本制劑中丹皮酚的HPLC含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津 LC-20AT色譜泵；紫外檢測(cè)器，AglientC18（250 mm ×4.6 mm；5μm）色譜柱；日本島津UV-240 PC紫外分光光度計(jì)；1 cm石英吸收池。

1.2 試藥

甲醇為色譜純（天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，批號(hào)：20131104）；甲醇（Tediaway Fairfield USA，批號(hào)：13075043）；丹皮酚對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110708-200506）；痛風(fēng)丸（威海市中醫(yī)院制劑室，批號(hào)：130901，130902，130903，130904）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Aglient C18（250mm ×4.6mm；5μm）；以甲醇-水（40∶60）為流動(dòng)相，流速為0.8 m L/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為274 nm；柱溫為30℃；理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000；外標(biāo)法測(cè)定。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，取約0.8 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 m L，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 m in，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.2 徐長(zhǎng)卿對(duì)照藥材溶液的制備取徐長(zhǎng)卿對(duì)照藥材0.1 g，同供試品溶液制備方法，得對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取丹皮酚對(duì)照品10.47 mg，置50 m L量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取該儲(chǔ)備液1 m L，置 10 m L量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，其濃度為20.94μg/m L。

2.2.4 缺徐長(zhǎng)卿陰性對(duì)照液的制備按處方比例稱(chēng)取除徐長(zhǎng)卿以外的其他各味藥，按本品的制備工藝及供試液的制備方法制得陰性對(duì)照液。

2.3 最大吸收波長(zhǎng)選擇

吸取丹皮酚對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL分別進(jìn)樣，在200～ 400 nm范圍內(nèi)檢測(cè)，結(jié)果對(duì)照品和供試品溶液均在274 nm處有最大吸收，而陰性對(duì)照品在此處無(wú)最大吸收，故檢測(cè)波長(zhǎng)選擇274 nm。

2.4 流動(dòng)相的選擇

在流速0.8 m L/m in，檢測(cè)波長(zhǎng)274 nm的條件下，用同一濃度供試品溶液，進(jìn)樣量10μL，分別選擇了甲醇-水（60∶40）、甲醇-水（55∶45）、甲醇-水（40∶60）進(jìn)行研究。最后確定以甲醇-水（40∶60）為流動(dòng)相，對(duì)丹皮酚進(jìn)行分離效果好。見(jiàn)圖1。

2.5 空白干擾試驗(yàn)

精密吸取丹皮酚對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺徐長(zhǎng)卿陰性對(duì)照液各10μL進(jìn)樣，流動(dòng)相選擇甲醇-水（40∶60），結(jié)果顯示陰性對(duì)照色譜中在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上未見(jiàn)色譜峰出現(xiàn)，表明無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取丹皮酚對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，間隔一定時(shí)間注入液相色譜儀中，記錄色譜峰面積。結(jié)果表明，供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性，完全可以滿(mǎn)足HPLC的時(shí)間要求。見(jiàn)表1。

圖1 不同比例流動(dòng)相HPLC圖

圖2 樣品中丹皮酚空白干擾測(cè)定圖

表1 供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取丹皮酚對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果表明儀器精密度良好。見(jiàn)表2。

表2 供試品精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.8 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 m L，于10 m L量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。吸取上述各溶液，分別進(jìn)樣10μL，注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積積分值。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，丹皮酚進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程：

Y=5 195 392X＋ 35 115。

r= 1.0，結(jié)果表明丹皮酚在0.104 7～1.047 0 mg/m L范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，見(jiàn)表3。

表3 丹皮酚線(xiàn)性范圍考察結(jié)果

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品5份，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法，依法測(cè)定含量，結(jié)果5次測(cè)定的平均含量為1.457 9mg/g，RSD為0.59%，表明重現(xiàn)性良好，見(jiàn)表4。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批樣品0.4 g，共取6份，精密稱(chēng)定，分別精密加入濃度為0.552 0 mg/m L丹皮酚對(duì)照品溶液1 m L，按供試品溶液的制備方法制得回收率各試驗(yàn)液，依法測(cè)定，并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表5。

2.11 樣品測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與3批供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定并計(jì)算各批樣品中丹皮酚的含量，結(jié)果見(jiàn)表6。

表5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表6 3批樣品中丹皮酚的測(cè)定結(jié)果

2.12 丹皮酚含量限度的測(cè)定

為了制定丹皮酚的含量限度，對(duì)市售徐長(zhǎng)卿藥材中丹皮酚的含量以及用此藥材制成的中試樣品丹皮酚的含量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，各批徐長(zhǎng)卿中丹皮酚的含量均符合藥典中不得少于1.3%的規(guī)定，3批樣品中丹皮酚的含量分別為 1.61%（本試驗(yàn)所用），1.59%和1.53%，并計(jì)算其轉(zhuǎn)移率為70%。根據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部[1]對(duì)徐長(zhǎng)卿藥材中丹皮酚含量的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，徐長(zhǎng)卿藥材中含丹皮酚不得少于1.3%。按70%轉(zhuǎn)移率計(jì)算，其成品含量限度暫定為每1 g含徐長(zhǎng)卿以丹皮酚（C9H10O3）計(jì)，不得少于1.1 mg。

3 小結(jié)與討論

3.1 提取方法的選擇

同一批號(hào)（130901）樣品，提取丹皮酚的方法分別采用了超聲提取、水浴加熱回流提取2種方法，提取時(shí)間均為 30 m in，結(jié)果顯示兩種方法測(cè)定結(jié)果沒(méi)有顯著差異，為節(jié)約成本，采用超聲提取方法。分別采用超聲提取方法提取20，30，40 m in，結(jié)果30 m in和40 m in效果差別不大，故采用超聲提取30 m in作為提取方法。

3.2 本制劑處方中徐長(zhǎng)卿為君藥,有效活性成分丹皮酚易于測(cè)定，故將其作為本制劑含量測(cè)定的指標(biāo)成分。文獻(xiàn)中對(duì)丹皮酚的含量測(cè)定方法主要有溴量法[2]、氣相色譜法（GC）[3]等，但方法都比較麻煩。本文采用HPLC測(cè)定本制劑中丹皮酚的含量，此法具有樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單，回收率好，重復(fù)性好的特點(diǎn),可用于痛風(fēng)丸中丹皮酚的含量測(cè)定，并適合制劑室常規(guī)檢測(cè)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2010年版）一部［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 吳波.中藥牡丹皮的研究——牡丹皮中丹皮酚的含量測(cè)定[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1966，13（2）：145.

[3] 房杏春.高分辨GC法測(cè)定六味地黃湯中丹皮酚的含量[J].中草藥，1990，21（11）：10.

Content Determ ination of Paeonol in Tongfeng Pills

Liu Chuanling1，Liu Yuankun2，Rong Fei1（1 Weihai Institute for Drug Control，Shandong Weihai 264200，China；2 Weihai TCM Hospital）

Objective:To establish a method for the determ ination of paeonol in tongfeng pills by HPLC.M ethods:Aglient C18column（4.6 mm×250 mm,5μm）and UV detector were used for the content determ ination of paeonol w ith a mobile phase of methanol-water（40∶60）at a flow rate of 0.8 m L/m in,the detection wavelength was at 274 nm and the room temperature was at 30℃.Results：A good linear relationship of paeonol and chromatographic peak area was obtained w ithin the range of 0.104 7～1.047 0 mg/m L，and the recovery rate was 99.78%，RSD=0.39%.Conclusion:The method is simple,rapid,accurate and reproducible.It can be used for the content determ ination of paeonol in tongfeng pills.

Tongfeng Pill；HPLC；Paeonol；Content Determ ination

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.05.006

2015-01-14）

劉元昆，女，主管藥師。研究方向：中藥制劑。通訊作者E-mail：zijingpi123@sina.com