4種中藥對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用

龐載元 吳賢麗 華毅

（攀枝花市中心醫院，四川 攀枝花 617067）

4種中藥對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用

龐載元 吳賢麗 華毅

（攀枝花市中心醫院，四川 攀枝花 617067）

目的：探討黃芩等4種中藥對廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用。方法：采用中藥抗菌試驗試管法測定藥物的最低抑菌濃度（M IC）。結果：黃芩、連翹、黃連、金銀花對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抑菌作用，M IC均值分別為475.00，345.83，60.94，379.17 mg/m L，與標準菌株ATCC27853的M IC相近。其中黃連的抑菌作用最強。結論：4種中草藥對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌均有不同程度的抑菌作用，本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞0.05）。

黃芩；連翹；黃連；金銀花；廣泛耐藥銅綠假單胞菌；體外抑菌試驗

隨著抗菌藥的廣泛使用，細菌的耐藥問題變得越來越突出，嚴重威脅著人類健康，己成為人們必須面對的難題，特別是廣泛耐藥菌的出現使臨床感染治療面臨嚴峻的挑戰，由于缺乏有效的抗菌藥治療，已成為院內感染致死的一個重要原因。

廣泛耐藥銅綠假單胞菌[1]是院內感染的重要條件致病菌，對碳青霉烯類、氟喹諾酮類、氨基苷類及β-內酰胺類抗菌藥同時耐藥，多黏菌素可能是目前對碳青霉烯類抗菌藥耐藥銅綠假單胞菌或鮑曼不動桿菌最為有效的抗菌藥物之一，但毒副作用較大，臨床較少使用；替加環素具有廣譜抗菌活性，是目前治療廣泛耐藥菌感染的首選，但對銅綠假單胞菌無抗菌活性[2]。開發新的抗菌藥是克服該菌耐藥性的有效途徑，但新藥開發周期長、投資大，醫藥經費負擔重。

中藥治療感染性疾病有悠久的歷史，常用的抗菌中草藥有近百種[3]，因而從中藥中篩選出能對廣泛耐藥銅綠假單胞菌具有較強作用的藥物或相關成分可能是一條捷徑。經文獻檢索，有關中藥抑菌的研究較多，但未見中藥對廣泛耐藥銅綠假單胞菌抑菌、殺菌的研究報道，因此，研究中藥對廣泛耐藥銅綠假單胞菌的體外抗菌活性具有重大的現實意義。

本實驗采用中藥抗菌實驗試管法，參考了有關文獻[4]并根據多年來的經驗作了適當的改進。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

孵箱，1 000μL無菌吸頭，1 000μL加樣槍，帶帽無菌試管若干，比濁儀，API 0.85%3 m L無菌鹽水管，試管架若干。

1.2 菌株的選擇

收集近期（2010年4月 -2011年4月）來自本院和外地（浙江大學醫學院附屬第一醫院）的廣泛耐藥銅綠假單胞菌30株，選擇標準菌株ATCC 27853，ATCC25922，ATCC25923做對比分析。

1.3 中藥的選擇

通過查閱文獻，選擇有抗菌活性的4種中藥配方顆粒（本院藥房提供），由四川新綠色藥業科技發展股份有限公司生產的黃芩、連翹、黃連、金銀花，產品批號分別為0906004，1011091，1008054，1001002。

1.4 中藥藥液的制備

取50 m L的無菌燒杯，用無菌蒸餾水溶解中藥配方顆粒，使其藥液相當于生藥的質量濃度為1 000 mg/m L。

1.5 細菌的培養與稀釋

將選定的實驗菌株,接種血平板培養基37℃孵育24 h。取API 0.85%3 m L無菌鹽水管，挑取菌落配制成0.5麥氏比濁單位，相當于菌含量1.5× 108cfu/m L。

1.6 最低抑菌濃度（M IC）的測定

按臨床標準化協會（CLSI）推薦的液體稀釋法測定實驗菌株的M IC值。具體應用倍比稀釋法對藥物進行稀釋，稀釋液為梅里埃的非苛養革蘭陰性桿菌藥敏專用肉湯。

1.7 操作步驟

在10支無菌試管中加入1 m L肉湯，于第1管加1 m L中藥（1 000 mg/m L），混勻后取出1 m L加入第2管，混勻后取出 1 m L加入第3管，反復操作至第9管，第10管不加藥液做陽性對照，在每個試管中加入 0.5麥氏單位的菌液 20μL，第9管不加菌液做陰性對照，充分混勻后放置37℃孵箱中培養，24 h后觀察細菌生長情況。在陽性對照管細菌生長正常，陰性對照管無菌生長的條件下，判斷無渾濁的試管的最小濃度即為M IC。以上所有無菌操作均需在生物安全柜中進行。

2 結果

黃芩、連翹、黃連、金銀花對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抑菌作用，M IC均值分別為475.00，345.83，60.94，379.17 mg/m L，與標準菌株ATCC27853的M IC相近。其中黃連的抑菌作用最強。見表1。

3 討論

由表1可見，黃芩、連翹、黃連、金銀花對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抑菌作用。其中黃連的抑菌作用最強。連翹和金銀花的抑菌作用與冷會勇[5]報道的多重耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌作用相似，黃連的抗菌活性，與李建志[6]報道的銅綠假單胞菌體外抗菌活性相似。4種中藥對本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞ 0.05）。

表1 4種中藥對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用

選擇適當的給藥途徑方能發揮中藥的抗菌作用。常用的抗菌中藥有近百種，然而其抑菌濃度遠高于抗菌藥[7]，按常規劑量口服血藥濃度遠遠達不到抑菌濃度。以本試驗為例：黃連M IC均值為60.94 mg/m L，按成人5 000 m L體液算，需要一次口服 304.7 g生藥才可能在體內達到抑菌濃度，而黃連的常規劑量為2～ 10 g[8]，遠遠達不到應有的血藥濃度。如果用此劑量口服治療胃腸道感染，因為不必吸收入血，理論上能達到抑菌濃度；如果用此劑量口服治療肺部感染，因為血藥濃度遠遠達不到抑菌濃度，感染治療難以奏效。

中藥治療呼吸道感染，吸入給藥是不錯的選擇。由于呼吸道面積大，毛細血管豐富、致密，藥物吸收快，吸收速率僅次于靜脈給藥[8]，藥物用量少，可以克服口服血藥濃度過低的瓶頸，通過霧化吸入，藥物可直達病所。張衛東[9]報道：13例患者用多黏菌素E進行霧化吸入治療廣泛耐藥銅綠假單胞菌性肺炎取得較好臨床療效，有效率為69.2%，研究中13例均未發生嚴重不良反應。中藥霧化吸入治療肺炎[10-12]和上呼吸道感染[13-15]的報道較多，療效肯定。本研究資料顯示，雖然4種中藥對廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同的體外抗菌活性，但按常規劑量口服在體內遠遠不能達到應有的抑菌濃度。中藥霧化吸入治療廣泛耐藥菌引起的肺炎是值得一試的方法。

在中藥抗菌研究的過程中，前人的研究結果提示中藥在抗菌作用方面蘊藏著巨大潛力。中藥的給藥途徑有很多，在應用研究方面需要打破常規，不斷創新與開拓，才能使中藥更好地造福于人類。

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[3] 劉鋒，孔美然.中藥抗菌作用研究概述[J].中國民族民間醫藥，2010，19（2）：14.

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[14] 胡元生，鄒柳燕.野菊花中藥霧化治療小兒急性上呼吸道感染89例療效觀察[J].齊齊哈爾醫學院學報，2013，34（8）：1166-1167.

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The Bacteriostatic Effect of Four K inds of Traditional Chinese Herbal M edicines on Thirty Strains of Extensively Drug-resistant Pseudomonas Aeruginosa

Pang Zaiyuan，Wu Xianli，Hua Yi(Center Hospital of Panzhihua City,Sichuan Panzhihua 617067，China)

Objective：To evaluate bacteriostatic effects of four kinds of Chinese herbal medicines,including baicalin,on the extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa.M ethods:The antibacterial medicine test tube method for TCM was adopted to determine the minimum inhibitory concentration （M IC）of the tested drug.Results：Scutellaria,Forsythia,Coptis and Honeysuckle showed a different degree of bacteriostatic effect in vitro antibacterial test on 30 strains of extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa.The M IC mean value was 475.00,345.83,60.94 and 379.17 mg/m L respectively,which was sim ilar to the M IC of the standard strain ATCC27853,and Coptis chinensis showed the strongest inhibitory effect.Conclusion:Four kinds of Chinese herbal medicines had different antibacterial effects on 30 strains of extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa，and there was no significant difference of bacteriostasis（P＞0.05）between the strains collected locally and from other places.

Scutellaria；Forsythia；Coptis；Honeysuckle；Extensively Drug-resistant Pseudomonas Aeruginosa；in Vitro Antibacterial Test

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.02.006

2014-10-08）

龐載元，男，副主任技師。研究方向：臨床微生物檢驗。E-mail：yangfan621225@qq.com