酶聯免疫吸附測定法與免疫膠體金技術在沙眼衣原體檢測中的應用比較

高毅云 劉傳桂

沙眼衣原體是一種特別常見的生殖系統病原菌，可以在男性尿道和女性陰道內大量繁殖，在陰道炎或非淋球菌性及淋球菌性尿道炎中均有較高檢出率，是一種典型的性傳播疾病[1-2]。口腔、直腸、生殖道和眼結膜等是主要的發病部位，可誘發沙眼、包涵體包膜炎、泌尿生殖道感染、性病淋巴肉芽腫等疾病，對患者危害極大[3]。沙眼衣原體感染常表現急性癥狀、低癥狀或無癥狀，急需一種快速、精確、靈敏的檢測方法。目前臨床上有很多種檢測沙眼衣原體的方法，其中細胞培養法是公認的金標準，但是細胞培養耗時長、條件高，不適合大樣本檢測，本研究通過臨床對比，探討酶聯免疫吸附測定法（ELISA）和免疫膠體金技術在沙眼衣原體檢測中的應用情況，旨在為沙眼衣原體的檢測提供參考。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月-2014年1月來本院就診的90例疑似沙眼衣原體感染患者作為研究對象，其中男39例，女51例，年齡19~71歲，平均（38.2±3.7）歲，病程1~8周，大部分患者無明顯癥狀，少數出現尿頻、尿急現象甚至產生膿性分泌物，所有患者排除淋球菌感染的可能。

1.2 方法

1.2.1 取樣方法 女性患者宮頸標本采集：首先以無菌大棉簽清潔宮頸口處的分泌物，再另取1根棉簽插入到宮頸1~2 cm處，緩慢旋轉數次，期間不能觸碰到陰道內壁，取出棉簽后放入傳送管中[4]。男性患者尿道樣本采集：囑患者采樣前1 h勿小便。使用尿道拭子緩慢插入到尿道2 cm處，稍用力旋轉一圈后停留半分鐘取出，備用。如尿道中含有分泌物，應先檢查淋球菌。所有患者同時采集3份標本，且室溫下放置時間不超過4 h，并分別根據檢測方法的具體要求分類處理。

1.2.2 檢測方法 分別對3份標本采用細胞培養法、酶聯免疫吸附測定法和免疫膠體金技術進行檢驗，其中細胞培養法和酶聯免疫吸附測定法嚴格按照臨床要求、操作說明進行。

ELISA檢測：將棉簽標本放入加有1000 μL紅色裂解液的裂解管中，95 ℃水浴20 min，冷卻15 min后擠壓棉簽并取出，儀器自動判別陰性或陽性結果。采用Micro Track XL System全自動酶免分析儀（購自愛爾蘭Trinity Biotech Plc公司），試劑盒由上海科華生物工程股份有限公司提供，嚴格按照說明書進行操作；免疫膠體金檢測：向裂解管中滴入無色裂解液A液5滴，立即放入棉簽，以手指擠壓裂解管中棉簽頭，轉動棉簽15次并靜置2 min；再向同一裂解管中豎直加入裂解液B液6滴，以手指擠壓裂解管中棉簽頭，轉動棉簽15次并靜置1 min。擠干裂解管中棉簽頭后棄去，旋緊裂解管滴頭加入加樣孔進行測定。需要注意的是檢測時應在10~20 min內查看結果，超過20 min后結果無效，如果出現2條紅色條帶則表示患者為陽性，如果僅出現1條紅色條帶表示患者為陰性[5]。

1.3 計算方法 以細胞培養的檢測結果作為“金標準”來計算酶聯免疫吸附測定法和免疫膠體金技術的靈敏度和特異度，靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%。特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%[6]。

1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0統計軟件對所得數據進行統計學處理，計數資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法檢測結果的比較 采用酶聯免疫吸附測定法檢測90例疑似沙眼衣原體感染的患者，結果陽性患者12例，陽性檢出率為13.3%，其中男性陽性檢出率為17.9%（7/39），占總數的7.8%（7/90），女性陽性檢出率為9.8%（5/51），占總數的5.6%（5/90）。免疫膠體金檢測出陽性患者10例，檢出率11.1%，其中男性陽性檢出率為12.8%（5/39），占總數的5.6%（5/90），女性陽性檢出率為9.8%（5/51），占總數的5.6%（5/90）。兩種方法在檢測女性患者沙眼衣原體陽性率方面比較差異無統計學意義（P>0.05），在檢測男性患者沙眼衣原體陽性率方面比較差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2 兩種方法靈敏度和特異度的比較 采用細胞培養作為檢測沙眼衣原體感染的“金標準”，結果90例患者中陽性13例，酶聯免疫吸附測定法檢測結果中假陽性患者1例，假陰性患者2例，靈敏度91.7%，特異度97.4%；免疫膠體金技術檢測結果中假陽性患者1例，假陰性患者4例，靈敏度90.0%，特異度95.0%。兩種方法在檢測沙眼衣原體陽性率的靈敏度和特異度上比較差異均無統計學意義（P>0.05）。

3 討論

沙眼衣原體屬于一種極為常見的性傳播疾病，平均感染潛伏期為1~3周，具有發病率高、危害大、易復發等特點[7-8]。目前全世界范圍內由沙眼衣原體引起的性傳播疾病發病率呈逐年上升趨勢[9]。沙眼衣原體主要易感部位包括口腔、直腸、生殖道和眼結膜等，可使患者產生沙眼、包涵體包膜炎、泌尿生殖道感染、性病淋巴肉芽腫等疾病。泌尿生殖系統被沙眼衣原體感染的患者會出現尿急、尿痛等癥狀，女性患者還會并發宮頸內膜炎，表現為黃色黏液膿性分泌物增多、觸之易出血、水腫、充血及腹部不適等癥狀，亦有相當數量患者癥狀輕微或無任何臨床癥狀[10]；男性患者常并發尿道炎，表現為尿痛、刺癢、尿道分泌物增加等癥狀[11]。如果沙眼衣原體寄生在男性尿道或者前列腺上皮細胞內，會破壞患者的產精和排精功能，造成男性不育等情況。因此，找到更為簡便、快捷的檢測方法來盡早的確診沙眼衣原體的感染情況具有重要的意義。目前臨床上檢測沙眼衣原體的方法有很多種，主要包括細胞培養法、ELISA法、熒光定量聚合酶鏈反應、免疫膠體金技術等。因為細胞培養法的敏感度和特異度非常高，培養結果無假陽性，常作為國際上檢測沙眼衣原體的實驗室診斷“金標準”，但是細胞培養周期長、操作復雜、需要侵入性取材及成本高，不適合作為基層醫院的常規檢測方法[12]。熒光定量聚合酶鏈反應敏感性及準確性高，但檢測成本及適用條件較高，基層醫院應用較少。ELISA法和免疫膠體金技術條件要求不高，一般實驗室即可滿足，故應用較為廣泛。

免疫膠體金技術是以膠體金為標記物，利用特異性抗原抗體反應對抗原或抗體進行定性、定量分析的標記方法，按抗原抗體反應原理可分為雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、捕獲法以及競爭抑制法，屬于一種常見的固相標記免疫標記技術。免疫膠體金標記可用于常規光鏡、透射電鏡及掃描電鏡，可同時檢測多種物質，對組織細胞非特異性吸附作用小，具有高敏感性及高特異性。膠體金本身為鮮艷橘紅色，是高電子密度顆粒性標記物，可根據金顆粒數目于不同視野中對抗原進行本定量分析，極少遮蓋超微結構，定位能力精確。金顆粒激發電子能力強，用于X射線衍射及掃描電鏡分析，可對多糖、多肽、蛋白質、凝集素及抗體葡萄球菌蛋白A等生物大分子物質進行標記。研究表明，免疫膠體金技術在食品安全檢測領域得到了廣泛應用。郭建等[13]采用國家標準方法驗證糧食中玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇兩種真菌毒素的膠體金快速測試卡效果，證實了膠體金檢測在糧食中的穩定性、準確性、適用性及重復性。另外，真菌毒素及違禁藥物檢測中亦顯示出它的優勢。李月越等[14]對同一份標本甲型及乙型流感病毒采用間接免疫熒光法和膠體金免疫層析法進行檢測，顯示一致性較好，表明免疫膠體金技術操作簡單，可單份檢測，結果直觀，敏感性及特異性高。

另外，該檢測方法不需要任何儀器設備和試劑，幾分鐘即可得到實驗結果并用肉眼可以觀察到，試驗結果可隨時保存，適合于大面積普查、大批量時間緊及野外作業人員檢測，可在基層醫院及單位推廣。酶聯免疫吸附測定法是一種在免疫酶技術基礎上發展起來的新型特殊試劑分析方法，屬于將抗原抗體免疫反應及酶高效催化作用原理有機結合起來的檢測技術，基本原理為借助于酶的高效性使某種固相載體與具有免疫活性的抗原或抗體結合，檢測時加入受檢樣品和酶標記物，洗滌后加入酶催化底物，進而實現對物質的定性及定量檢測。酶聯免疫吸附測定法中酶活性易受反應條件影響，因此存在重復性及準確性差等問題。此外，酶聯免疫吸附測定法需低溫保藏，試劑壽命短，但操作方便，在疾病預防、食品檢測及臨床檢驗診斷中意義重大，具有重復性好、特異強、敏感性高及漏檢率低等顯著優勢。宿俊彪等[15]采用酶聯免疫吸附測定法對乙肝病毒患者標記物進行檢測，得到各項血清標志物檢測較好，人為干擾因素較少，提示酶聯免疫吸附測定法有助于提高檢測特異性及靈敏度。研究表明，酶聯免疫吸附測定法與免疫膠體金技術靈敏度基本相近，多數試驗敏感度均可達到1 ng/mL或更低水平[16]，證實了兩種檢測方法較高的應用價值。

為了找到更為簡便、快捷的檢測方法，本研究選取2012年1月-2014年1月來本院就診的90例疑似沙眼衣原體感染患者作為研究對象，探討酶聯免疫吸附測定法與免疫膠體金技術在沙眼衣原體檢測中的應用情況。結果發現酶聯免疫吸附測定法與免疫膠體金技術對于沙眼衣原體檢測均為非常有效的方法，兩種方法在檢測沙眼衣原體陽性率靈敏度及特異度上無顯著差異，但酶聯免疫吸附測定法男性陽性率明顯高于免疫膠體金技術，表明酶聯免疫吸附測定法在檢測男性沙眼衣原體感染方面更具優勢，與此同時，免疫膠體金技術耗時時間較酶聯免疫吸附測定法明顯縮短。因此臨床上兩種方法靈活運用，患者較少而且急需結果時可以選用免疫膠體金技術檢測，患者較多時，用酶聯免疫吸附測定法檢測。對于不急于要求檢驗結果的男性患者，可以積攢到一定數量后集中進行檢驗，不但可以保證男性患者的感染檢出率，也可以大大節省成本、提高效率。

綜上所述，酶聯免疫吸附測定法和免疫膠體金技術均是檢測沙眼衣原體較為快捷、有效的方法，基層醫院可以根據實際情況靈活應用。

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