菌陽肺結核患者外周血T細胞亞群的變化及意義

劉士甫，趙 磊，康書慧，高 偉，曹金鳳，張 鑫，杜君曉

(河北省石家莊市第五醫院，河北 石家莊 050024)

菌陽肺結核患者外周血T細胞亞群的變化及意義

劉士甫，趙 磊，康書慧，高 偉，曹金鳳，張 鑫，杜君曉

(河北省石家莊市第五醫院，河北 石家莊 050024)

目的 探討初治菌陽性肺結核患者外周血T淋巴細胞亞群的變化及其對免疫狀態的作用。方法 選取2013—2014年初治活動性肺結核患者50例作為觀察組，另外選擇50例同期健康體檢者作為健康對照組，對比2組患者外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平。結果 痰菌陽性肺結核患者外周血CD3+、CD4+以及CD3+/CD4+水平顯著低于健康體檢者；結核抗體陽性患者CD3+、CD4+以及CD3+/CD4+水平明顯低于陰性患者；CD3+、CD4+、CD8+水平與病變累及范圍大小無關。結論 外周血T淋巴細胞亞群計數能夠明顯反映人體的免疫系統情況，可以作為菌陽肺結核病情變化的參考值，具有一定的臨床價值。

菌陽；肺結核；外周血；T細胞亞群

結核病的免疫機制較為復雜，結核病患者在受到結核桿菌的侵入之后，會產生一系列的細胞免疫和體液免疫反應，而在我國的臨床研究中關于肺結核的免疫組織化學研究較少[1]。結核病主要免疫反應為T淋巴細胞介導的細胞免疫，淋巴細胞在結核免疫中的作用十分重要。肺結核的疾病發生、發展以及轉歸與結核分枝桿菌的數量與毒力相關，同時也與患者的細胞免疫功能存在直接的關系[2]。外周血淋巴細胞亞群是能夠直接反映人體免疫功能的重要指標。本研究以流式細胞檢測方式對初治活動性菌陽性肺結核患者與健康人群T淋巴細胞亞群進行分析，分別分析CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞水平，以及肺結核患者不同角度的T淋巴細胞亞群變化。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2013—2014年在我院住院治療的痰菌陽性初治肺結核患者50例作為觀察組，均為活動性初診肺結核且未給予抗結核治療方案治療，診斷標準以2000年中華醫學會結核病學分會制定的《肺結核診斷與治療指南》中的相關標準為依據[3]。觀察組50例患者均為男性，年齡19～47(30.5±11.7)歲，行痰液涂片、痰液培養以及纖維支氣管鏡刷檢發現結核分枝桿菌，均排除腫瘤等免疫系統或免疫系統先關疾病，HIV抗體均為陰性，4個月內沒有應用激素治療或免疫抑制劑治療。另選取我院同期行健康體檢的受檢者50例作為健康對照組，受檢者均為男性，年齡18～45(30.1±10.4)歲，均不存在代謝系統以及免疫系統疾病。2組患者一般資料組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 研究方法 儀器選擇為美國BD公司生產的FACSCalibur四色流式細胞儀，試劑盒選擇MultiTEST IMK Kit試劑盒。在治療前與治療后2個月抽取患者外周血，均在清晨抽取空腹血，以肝素抗凝試管保存，抗凝藥物選擇乙二胺四乙酸(EDTA)。將10 μL的CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4 aPC與10 μL的3FITC/CD16PE+56PE/CD45PerCP/CD19 aPC分別鍵入2個流式細胞檢測試劑管的底部，管中分別鍵入抗凝血與單克隆抗體，充分混合均勻。在常溫以及避光的環境下染色15 min。裂解紅細胞后，以流式細胞儀分析熒光抗體染色后，進行上機檢驗，獲取細胞數在15 000以上。以美國BD工期的MULTISET軟件進行分析，獲得淋巴細胞中CD3+、CD4+、CD8+細胞，計算CD4+/CD8+比值。

2 結 果

2.1肺結核與健康人群T淋巴細胞亞群比較 肺結核組患者T淋巴細胞亞群中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明顯低于健康對照組(P均<0.05)，CD8+水平與健康對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2 觀察組結核抗體與T細胞亞群比較 觀察組結核抗體陽性患者T淋巴細胞亞群中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均明顯低于結核抗體陰性患者(P均<0.05)，CD8+水平與結核抗體陰性患者相比差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3 觀察組病變范圍與T淋巴細胞亞群關系 觀察組病變范圍在3肺野以上患者與低于3肺野患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表3。

表1 2組T淋巴細胞亞群檢測結果比較

表2 觀察組結核抗體陰性與陽性患者T淋巴細胞亞群檢測結果比較

表3 肺結核病變累及范圍與T淋巴細胞亞群的關系比較

3 討 論

結核桿菌主要通過呼吸道、消化道和損傷的皮膚侵入易感機體，能引起多種組織器官的結核病。其中以通過呼吸道引起的肺結核為最多見，感染結核菌的數量、毒力、次數和感染者的免疫狀態也各有不同。結核菌經淋巴管擴散至肺門淋巴結，在其中繁殖，引起肺門淋巴結腫大，稱為原發綜合征。經過3～6周，宿主產生了針對結核菌的特異性細胞免疫(當然也產生了遲發性變態反應)，從而增加了宿主的抵抗力，于是局部病灶逐漸被增殖性病變所代替[4]。病灶以干酪物質和多核巨細胞及類上皮細胞為核心，周圍有許多淋巴細胞浸潤，外繞以網狀纖維，形成結核結節。成年人多見繼發性感染或稱原發后感染，病灶以肺部為多見[5]。致病的結核菌可以是潛伏于原發感染灶內的(內源性感染)，或從外界再次吸入的(外源性感染)。由于機體已形成對結核菌的特異性免疫，故對再次侵入的結核菌有較強的包圍能力，因此病灶常局限化，被纖維囊壁包圍的干酪樣壞死灶可鈣化而達痊愈[6]。

T淋巴細胞的免疫調節功能是由T淋巴細胞亞群完成的，結核病的免疫功能是由T細胞作為遞質的細胞免疫反應為主的。T淋巴細胞亞群中根據細胞表面的分子特征以及功能的不同主要分為4個亞群，分別為殺傷性細胞(Tc)、誘導輔助性T細胞(Ti/Th)、抑制性T細胞(Ts)與遲發型超敏反應T細胞[7]。CD3是T淋巴細胞均有的表面共同標志物，而CD4是Ti/Th細胞的表面標志物，CD8是Ts細胞的表面標志物[8]。CD4+/CD8+的比值能夠反映Th細胞與Ts細胞之間的功能平衡狀態。有臨床研究表明，T淋巴細胞的平衡狀態對結核病的發生與發展有明顯的影響，當CD4與CD8細胞的數量或功能存在異常，T淋巴細胞的調節功能平衡就會失去，從而引發疾病[9]。CD3是T淋巴細胞識別抗原的主要單位，而結核病屬于遲發性超敏反應，結核桿菌抗原刺激了T淋巴細胞的激活、趨化與增生過程，可能引發病變局部的T淋巴細胞數量增加[10]。說明結核病的免疫功能與T淋巴細胞介導的細胞免疫功能相關，而T淋巴細胞在結核病免疫機制中具有核心作用。

當前抗結核臨床研究中T淋巴細胞已經成為熱點，而在肺結核組織中的種類與數量研究在我國還不多見。本次臨床研究中，對初治涂陽性肺結核患者的T淋巴細胞亞群進行檢測，結果表明初治菌陽性肺結核患者外周血中的T淋巴細胞亞群CD3+與CD4+均明顯低于正常人群，而CD8+水平與健康人群比較差異無統計學意義，而CD4+/CD8+的比值相比健康人群比較顯著降低。這樣的結果說明初治菌陽性肺結核患者的外周血液中，T淋巴細胞亞群均存在一定程度的減少，主要表現為CD4+與CD3+T淋巴細胞減少，同時CD4+與CD8+細胞的平衡失調，因此肺結核患者存在以T淋巴細胞亞群CD4+明顯減少為特征的淋巴細胞免疫缺陷，與其他臨床研究的結果一致[11]。結核菌菌體抗原導致大量CD4+與CD8+淋巴細胞靠近病變位置，減少了外周血液中的CD4+細胞，而受影響的CD4+細胞數量相比CD8+細胞更多，從而使得CD4+/CD8+比值的明顯降低[12]。同時也證明了肺結核患者T淋巴細胞存在變化失衡的狀態，可能引發肺結核疾病的發生與發展。

而本次臨床研究中，對結核桿菌抗體以及病變范圍影響下患者外周血T淋巴細胞的亞群變化進行分析。結果表明，結核桿菌抗體為陽性的患者外周血T淋巴細胞中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均明顯低于結核抗體陰性的患者。當前臨床研究中的主流觀點認為，T淋巴細胞CD4+的減少主要有2個因素：第一個因素，CD4+細胞減少的原因是機體內部調節機制所致，淋巴細胞向病灶位置聚集。肺結核患者的支氣管肺泡灌洗液中CD4+與CD4+/CD8+比值均明顯高于正常人與肺癌患者，說明T淋巴細胞中CD4+減少與T淋巴細胞聚集在病灶位置相關，并非患者體內CD4+細胞絕對值減少，屬于假性的外周血液水平降低。而第二個因素就是T淋巴細胞CD4+的真性減少，也就是說患者體內CD4+整體數量的減少。有實驗研究發現，小鼠應用大劑量的抗原過程中可能引發抑制性T淋巴細胞的升高[13]。所以，在結核桿菌一次性大量進入人體或大量繁殖的過程中，外周血可能存在抑制性T淋巴細胞的增多，從而對患者機體免疫功能起到抑制作用，減少患者體內T淋巴細胞CD3+與CD4+亞群。而同時有研究發現[14]，營養不良、白細胞介素-2分泌減少、HIV病毒感染以及單核細胞的抑制功能與T淋巴細胞的趨化性缺陷均可能成為影響因素。而在病變累及范圍的研究結果中，病變累及范圍在3肺野以上與3肺野以下患者的T淋巴細胞各個亞群均不存在顯著變化，提示初治活動性肺結核中疾病發展程度與T淋巴細胞亞群數量并不存在直接的相關性。

肺結核疾病的免疫過程是肺結核病菌與患者免疫系統反應長期斗爭的慢性發展過程，致病結核菌在誘導免疫系統應答的過程中抵抗患者免疫系統清除能力。在結核菌最初被發現時就已經被確定細菌并不是結核病發生與發展的所有原因，與其他細菌性疾病的發病機制相比，結核性疾病發生發展過程中宿主的自身因素更加重要。T細胞亞群與巨噬細胞均在控制肺結核桿菌生長與繁殖中具有重要的作用。對結核患者體內T淋巴細胞亞群進行探討研究，能夠對結核桿菌發生、繁殖以及疾病轉歸有重要的意義，能夠為結核性疾病的發病機制與免疫機制提供有力證明，也為免疫干預提供重要的依據。本次臨床研究結果顯示，外周血液T淋巴細胞亞群能夠作為菌陽肺結核的有效標志物，但無法對疾病程度進行有效標識。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2015.21.030

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1008-8849(2015)21-2360-03

2014-07-10