黃芪注射液對治療小鼠皮膚衰老的有效性觀察

廖勇梅，熊霞

（瀘州醫學院附屬醫院皮膚科，四川 瀘州 646000）

·論著·

黃芪注射液對治療小鼠皮膚衰老的有效性觀察

廖勇梅，熊霞

（瀘州醫學院附屬醫院皮膚科，四川 瀘州 646000）

目的觀察足三里穴位注射黃芪注射液對D-半乳糖致衰老小鼠皮膚超氧化物歧化酶（SOD）、羥脯氨酸（HYP）、丙二醇（MDA）含量的影響。方法將小鼠隨機分為4組，即正常組、模型組、黃芪注射組和生理鹽水注射組，每組15只。除正常組以外，剩余45只小鼠皮下注射D-半乳糖制作衰老模型。造模21 d后，黃芪組小鼠兩側足三里穴分別注射黃芪注射液0.01mL/d，生理鹽水組小鼠在相同穴位注射等量生理鹽水。進行21 d后，對全部小鼠血清和皮膚組織SOD活性、HYP含量、MDA含量進行測定。結果模型組小鼠血清與皮膚組織中的各項指標與對照組比較有顯著性差異（P＜0.01）。與模型組相比，黃芪組小鼠血清與皮膚組織SOD活性、HYP含量顯著升高，MDA含量顯著降低（P＜0.01）；生理鹽水組小鼠血清與皮膚組織中的各項指標也呈現顯著性差異（P＜0.05），但效果相比黃芪組稍差。結論黃芪穴位注射對D-半乳糖引起的皮膚衰老具有一定的預防與延緩作用。

黃芪；穴位注射；D-半乳糖；皮膚衰老

皮膚衰老是由自然因素或非自然因素造成的皮膚老化現象，主要發生在皮膚的主要成份膠原蛋白及彈性蛋白衰退時。預防和延緩皮膚衰老一直是醫學美容界研究的熱點和焦點。中醫學研究表明黃芪及其皂苷類成分具有顯著的免疫調節、抗炎、抗氧化、抗缺血性腦損傷、抗衰老等作用［1］。近年來，一些學者開始重視關于黃芪抗衰老的研究，而目前對于黃芪注射液抗衰老效果研究較少。本研究通過觀察黃芪注射液穴位注入足三里對D-半乳糖引起的小鼠衰老模型皮膚組織中超氧化物歧化酶（super oxide Dismutase，S0D），羥脯氨酸（Hydroproline，HYP）及丙二醇（malondialdehyde，MDA）含量的影響，進行黃芪注射液治療和延緩皮膚衰老作用的研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物：選取3月齡SPF級健康雌性ICR小鼠60只，體質量（20±2）g，購自北京維通利華動物實驗中心，生產許可證號：SCXK（京）2014-0001。小鼠飼養環境為：室溫21～26℃，相對濕度40%～75%，自由攝食，飲水，每日通風2次。

1.1.2 藥品與試劑：藥品：黃芪注射液由哈爾濱圣泰生物制藥有限公司生產，國藥準字Z23020821。D -半乳糖由INALCO公司生產。主要試劑：超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醇（MDA）和羥脯氨酸（HYP）測定試劑盒均來自上海信裕生物科技有限公司。

1.1.3 儀器設備：分光光度計，北京普析儀器有限公司，TU-1901；電子分析天平，上海壘固儀器有限公司，BS224S；渦旋混合器，美國安勝科技公司，VM-2500；高速冷凍離心機，太倉市華美生化儀器廠，TGLL-18K；電動勻漿機，德國IKA公司，T10basic。

1.2 方法

1.2.1 分組與造模：實驗小鼠在實驗室適應性喂養1周，隨機分為4組：即正常組、模型組、黃芪注射組和生理鹽水注射組，每組15只。除正常組以外，剩余3組小鼠每天皮下注射D-半乳糖（125 mg·kg-1）［2，3］，連續注射6周。與正常組相比，被注射小鼠出現記憶功能明顯下降，血清中丙二醛（MDA）含量明顯增加，超氧化物歧化酶（SOD）活力和羥脯氨酸（HYP）含量顯著降低，即為造模成功。

1.2.2 給藥：造模21 d后，在黃芪注射組小鼠后肢膝關節下方腓骨小頭下約5 mm處［4］，即兩側足三里穴分別注射黃芪注射液0.01 mL。生理鹽水注射組小鼠在相同穴位注射等量生理鹽水，模型組和正常組不進行注射，以上操作每天1次，共進行21 d后，取材進行指標測定。

1.2.3 取材與指標測定：全部小鼠腹主動脈采血3～5 mL，不抗凝，放入采血管中常溫靜置2 h后，經4 000 r/min，4℃離心10 min，分離血清。采血完成后，用8%硫化鈉進行小鼠背部皮膚脫毛，斷頸處死全部小鼠，立即剪下脫毛處全部皮膚并去除皮下脂肪，使用預冷的生理鹽水清洗至無血色，然后切成碎塊，使用電動勻漿機在冰水中進行操作，操作時間10 s/次，共進行3次，每次間隔30 s。加入預冷生理鹽水，制成10%的組織勻漿。

嚴格按照SOD、MDA和HYP測定試劑盒說明書對小鼠血清和皮膚組織勻漿中的SOD活性、MDA和HYP含量進行測定，SOD活性測定采用黃嘌呤氧化酶法，MDA含量測定采用硫代巴比妥酸染色法，HYP含量測定采用消化法。

1.3 統計學分析

2 結果

如表1、表2所示，D-半乳糖模型組小鼠血清和皮膚的SOD活力與HYP含量較正常組顯著降低（t分別為7.657，6.985，7.825，6.856；P＜0.01），MDA含量較正常組顯著升高（t=7.231，6.523；P＜0.01）。黃芪注射組小鼠血清和皮膚的SOD活力、HYP含量與模型組相比均顯著升高（t分別為6.768，5.874，6.712，5.735；P＜0.01），MDA含量較模型組顯著降低（t分別為6.124，5.764；P＜0.01）。與模型組比較，生理鹽水注射組小鼠血清和皮膚的SOD活力、HYP含量也明顯升高（t分別為4.654，3.958，4.607，3.624；P＜0.05），MDA含量也明顯下降（t分別為4.821，3.846；P＜0.05），但SOD、HYP含量提高與MDA含量降低效果比黃芪注射組稍差。由此可見，4個組小鼠的血清和皮膚組織中的SOD活力、MDA和HYP含量的變化趨向基本相同。

3 討論

衰老與抗衰老是當今醫學研究和討論的熱點。隨著年齡的增長，自由基不斷增加，致使機體內抗氧化能力和免疫功能不斷下降，使具有合成膠原能力的成纖維細胞受損，影響膠原蛋白合成和膠原纖維合成，最終導致皮膚出現松弛、缺乏彈性、皺紋增多等老化現象［5］。皮膚超氧化物歧化酶SOD在機體抗氧化、抗損傷、抗衰老等方面起著重要作用［6］，SOD減少會導致體內氧自由基不能完全清除，短期內引發衰老。羥脯氨酸（HYP）是皮膚組織中的主要成分——膠原蛋白中的特有氨基酸，在自由基作用下脯氨酸不能羥化為羥脯氨酸（HYP），引發羥脯氨酸（HYP）含量下降，導致皮膚僵硬、無光澤［7］。自由基累積會導致脂質過氧化反應形成脂質過氧化物，其分解產物丙二醛（MDA）使真皮結構發生大分子交聯，使真皮纖維扭曲、增粗、紊亂，皮膚外觀粗糙、增厚［8］。因此，SOD活力、HYP和MDA含量與機體的抗氧化能力及自由基的清除密切相關［9］。

表1 各組小鼠皮膚組織S0D活性與HYP、MDA含量比較（）Tab.1 Comparison of S0D，HYP and MDA activity in mouse skin（）

表1 各組小鼠皮膚組織S0D活性與HYP、MDA含量比較（）Tab.1 Comparison of S0D，HYP and MDA activity in mouse skin（）

Compare to normal group：1）P＜0.01；compare to model group：2）P＜0.01；compare to model group：3）P＜0.05.

Group n SOD（U/mg） HYD（μg/mL） MDA（μg/mL）NormaI group 15 38.87±6.43 14.32±1.88 16.97±1.79 Model group 15 25.76±5.581） 10.87±0.941） 22.54±1.631）Astragalus group 15 33.92±6.792） 13.96±1.842） 19.05±1.582）Saline group 15 31.24±5.923） 12.64±1.433） 16.31±1.823）

表2 各組小鼠血清S0D活性與HYP、MDA含量比較（）Tab.2 Comparison of S0D，HYP and MDA activity in mouse serum（）

表2 各組小鼠血清S0D活性與HYP、MDA含量比較（）Tab.2 Comparison of S0D，HYP and MDA activity in mouse serum（）

Compare to normal group：1）P＜0.01；compare to model group：2）P＜0.01；compare to model group：3）P＜0.05.

Group n SOD（U/mg） HYD（μg/mg） MDA（μg/mL）NormaI group 15 21.64±3.57 4.54±1.71 5.86±1.57 Model group 15 12.83±2.461） 1.89±0.871） 9.53±1.851）Astragalus group 15 16.05±2.812） 3.85±1.622） 6.14±1.232）Saline group 15 14.57±3.133） 2.71±1.233） 7.42±1.643）

由于人類的衰老周期比較漫長，因此相關研究者根據衰老的機制建立了許多動物衰老模型。目前，應用最多的是D-半乳糖所致的亞急性衰老模型，它可引起皮膚、心、肝、腎、腦等重要器官的代謝異常，與人類自然衰老的表現一致［10］。有學者研究表明連續注射D-半乳糖可使小鼠體內自由基不斷累積，減弱其體內的抗氧化防御能力和氧自由基清除能力，短期內引發衰老［11］。本研究中D-半乳糖模型組小鼠血清和皮膚的SOD活力與HYP含量較正常組顯著降低（P＜0.01），MDA含量較正常組顯著升高（P＜0.01），與上述結果基本一致。

黃芪作為補益藥，在抗衰老方面能夠起到［12］調節免疫功能，抑制細胞過度的凋亡［13］，抗氧化，清除自由基［14］的作用。足三里穴是“足陽明胃經”的主要穴位之一，它具有調理脾胃、補中益氣、通經活絡、疏風化濕、扶正祛邪之功能，經常按摩刺激對于抗衰老延年益壽大有裨益。足三里穴位注射是用注射器的針頭代為針具刺入穴位，在得氣后注入藥液來治療疾病的方法。它是把針刺與藥理及黃芪注射液對穴位的滲透刺激作用結合在一起發揮綜合效能進而提高療效。本研究中黃芪注射組小鼠血清和皮膚的SOD活力與HYP含量與模型組相比均顯著升高（P＜0.01），MDA含量較模型組顯著降低（P＜0.01）。同時發現，生理鹽水注射組小鼠血清和皮膚的SOD活力、HYP含量也明顯升高（P＜0.05），MDA含量也明顯下降（P＜0.05），表明足三里穴位的針刺作用，也有一定的皮膚抗衰老效果，但比較黃芪注射組稍差，兩組在皮膚MDA含量與血清HYP、MDA含量的差異具有統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，將黃芪注射液注射到足三里穴位，產生中藥黃芪和針刺的協同作用可以更加有效地防治皮膚衰老，但黃芪抗皮膚衰老的有效成分及其深層作用機制還需進一步研究。

［1］向麗娟，夏新中，毛坤，等.黃芪抗衰老研究現狀［J］.中國現代中藥，2014，16（2）：177-180.

［2］武清芳，張秋霞.黃芪穴位注射對D-半乳糖致衰老小鼠皮膚抗氧化酶和羥脯氨酸的影響［J］.中國美容醫學，2012，21（12）：28-29.

［3］劉克明，王春花，李國星，等.D-半乳糖模型鼠與自然衰老鼠的比較研究［J］.衛生研究，2007，36（6）：686.

［4］Tai MH，Weng CH，Mon DP，et a1.Uhraviolet C eradiation induces different expression of cyclooxygenase 2 in NIH 3T3 cells and A431 Cells：the roles of COX-2 are different in various cell lines［J］.Int J Mol Sci，2012，13（4）：4351-4366.

［5］Zouboulis CC，Makrantonaki E.Clinical aspects and molecular diagnostics of skin aging［J］.Clin Dermatol，2011，29（1）：3-14.

［6］Fattman CL，Schaefer LM，Oury TD.Extracellular superoxide dismutase in biology and medicine［J］.Free Radic Biol Med，2003，35（3）：236-256.

［7］王紅麗，吳鐵，錢聚標，等.D-半乳糖致衰老模型小鼠皮膚衰老的觀察［J］.中華老年醫學雜志，2004，23（8）：566-568.

［8］王詩晗.黃芪提取液對光老化無毛小鼠皮膚組織HYP MDA含量及SOD活力的影響［J］.中醫藥學刊，2006（4）：718-719.

［9］王紅麗，吳鐵，錢聚標，等.D-半乳糖致衰老模型小鼠皮膚衰老的觀察［J］.中華老年醫學雜志，2004，23（8）：566-568.

［10］徐厚謙，李滿生，牛彩琴，等.壽聰膠囊對老年性癡呆模型大鼠總抗氧化力、脂褐質及腦組織形態學的影響［J］.中國中醫藥信息雜志，2006，13（12）：37-39.

［11］Mecocci P，Fano G，Fulle S，et a1.Age-dependent increases in oxidative damage to DNA，lipids，and proteins in human skeletal muscle［J］.Free Radic Biol Med，1999，26（3-4）：303-308.

［12］Hsu MF，Chiang BH.Stimulating effects of Bacillus subtilis nattofermented Radix astragali on hyaluronic acid production in human skin cells［J］.J Ethnopharmacol，2009，125（3）：474-481.

［13］Ding KG，Yong PG，Feng W.Astragalaside IV a novel antioxidant prevent glucose induced podocyte apoptosis in Vitro and in Vivo［J］.Pois One，2012，7（6）：39824-39829.

［14］鐘靈，王振富，文德鑒.黃芪多糖抗衰老作用的實驗研究［J］.中國應用生理學雜志，2013，45（4）：350-352.

（編輯 裘孝琦）

Observation ofthe Efficacy of Astragalus Injection in Skin ofAging Mice Induced by D-galactose

LIAO Yong-mei，XIONGXia

（DepartmentofDermatology，Affiliated HospitalofLuzhou MedicalCollege，Luzhou 646000，China）

ObjectiveTo investigate the efficacy of acupoint injection of Astragalus on contents of SOD，HYP and MDA in skin of aging mice induced by D-galactose.MethodsThe mice were randomly divided into normal group，model group，Astragalus group，and saline group（n=15）. Exceptforthe normalcontrolgroup，the mice ofothergroupswere treated with continuous subcutaneousinjection ofD-galactose to establish mice aging model.The Astragalus group mice was injected with 0.01mL Astragalus in Sanzuli acupoint per day，The saline group mice received an injection ofsame amountofsaline.SOD，HYP and MDAchanges in the skin tissue and serum were evaluated after21 days.ResultsAllthe index in the skin tissue and serum showed significant difference（P＜0.01）between model group mice and normal control group.Compared with model group，SOD activity and MDA content in the skin tissue and serum of the Astragalus group mice were significantly raised，HYP content was significantly reduced（P＜0.01）.There also were significant differences of these index between the saline group mice and the model group（P＜0.05），but the effect was not as good as the Astragalus group mice.ConclusionAcupoint Injection of Astragalus can prevent and protect against skin aging induced by D-galactose.

astragalus；acupoint injection；D-galactose；skin aging

R285.5

A

0258-4646（2015）08-0721-04

廖勇梅（1973-），女，講師，博士.

熊霞，E-mail：qqzz000110@163.com

2015-01-25

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