蒲黃壓瘡散對大鼠壓瘡模型創面血管內皮生長因子的影響

劉 鵬，周 軍

(1.商洛職業技術學院，陜西 商洛 726000；2.陜西中醫學院附屬醫院，陜西 咸陽 712000)

蒲黃壓瘡散對大鼠壓瘡模型創面血管內皮生長因子的影響

劉 鵬1，周 軍2

(1.商洛職業技術學院，陜西 商洛 726000；2.陜西中醫學院附屬醫院，陜西 咸陽 712000)

目的 研究蒲黃壓瘡散對大鼠壓瘡模型創面血管內皮生長因子(VEGF)的影響。方法 將40只SD大鼠隨機分成假手術(A組)、壓瘡模型組(B組)、蒲黃壓瘡散治療組(C組)及云南白藥治療組(D組)。采用磁力壓迫持續缺血損傷方法構建壓瘡動物模型，造模成功后，均常規換創面藥，C組及D組創面分別敷蒲黃壓瘡散及云南白藥。5 d后分別于創面邊緣取材,組織常規固定、包埋、連續切片、HE染色,VEGF免疫組織化學染色標記，光鏡下觀察并攝片。結果 C組、D組大鼠創面VEGF標記毛細血管數量、毛細血管面積均高于B組(P均<0.01)，C組高于D組(P均<0.05)。結論 蒲黃壓瘡散可以有效改善壓瘡創面局部的血液循環，促進血管及纖維組織的增生,進而促進創面的修復。

蒲黃壓瘡散；壓瘡；血管內皮生長因子

壓瘡又稱為壓力性潰瘍,舊稱褥瘡，是由于肢體突出部位組織長期局部受壓導致組織長期持續缺血、缺氧及營養障礙而引起的局部組織血流障礙,致使組織發生潰爛壞死[1]。壓瘡是長期臥床患者常見的并發癥，尤以老年人多見。而我國目前人口老齡化問題日趨嚴重，故壓瘡的患病人群也必將逐年增多。壓瘡常由于病程遷延難愈，給臨床治療和護理帶來極大困難[2]。同時由于壓瘡的發生，導致患者經濟負擔加重，生活質量嚴重下降。故尋求快速有效治愈壓瘡的方法，是臨床醫生和護理人員亟待研究的一項重要課題。目前,臨床上對于壓瘡的治療較多局限于西醫的局部換藥治療，往往效果較差[3]。筆者認為,單純的局部換藥處理對于壓瘡創面的愈合是不夠的，特別是嚴重壓瘡患者,促進局部創面組織的血液循環，增強局部組織的抗感染能力，增強組織的愈合能力才是快速治愈壓瘡的根本。本研究觀察了蒲黃壓瘡散對大鼠壓瘡模型創面血管內皮生長因子(VEGF)的影響，旨在為其臨床上治療壓瘡提供實踐依據。

1 實驗資料

1.1 實驗動物及分組 自西安交通大學動物實驗中心購成年健康SD大鼠40只，雌雄各半，體質量(200±20)g,動物合格證編號：SCXK(陜)2014-008。將大鼠適應性飼養(飼養溫度控制在20～25 ℃，濕度控制在40%～70%，采用標準飼料進行喂養，標準飼料購于西安交通大學動物實驗中心)1周后，根據隨機數字表將大鼠隨機分為假手術組(A組)、壓瘡模型組(B組)、蒲黃壓瘡散治療組(C組)及云南白藥治療組(D組)，每組10只。

1.2 試劑及藥物 蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒(上海滬峰生物科技有限公司生產) 、鼠抗人VEGF免疫組化試劑(北京博奧森生物技術有限公司)、蒲黃壓瘡散(組方：蒲黃粉100 g、黃連10 g、大黃10 g、白芨10 g,將其研成極細末，高壓滅菌備用)、云南白藥、圓片形磁鐵(直徑25 mm，厚3 mm，高壓滅菌備用)和圓環形鐵片(外徑25 mm，內徑8 mm，厚1 mm，高壓滅菌備用)。

1.3 動物模型制備 健康SD大鼠適應性飼養1周后，B、C、D組實驗前8 h禁食、禁飲。大鼠經10%水合氯醛(0.3 mL/100 g體質量)腹腔注射麻醉后，在其背部正中線備皮后，做一深至筋膜的切口，鈍性分離，將圓環形鐵片植入背部皮下，體外采用圓片形磁鐵間歇性施加壓力。外源磁片與體內移植磁片相互產生吸引，從而對皮膚產生壓力，造成局部皮膚缺血，每次缺血2 h后，再將外源磁片拿下，讓局部血流恢復30 min，如此進行1個循環[4]。每只大鼠每天進行5個連續的循環，連續進行3 d，30只大鼠均形成壓瘡，壓瘡分度在Ⅱ～Ⅲ期提示造模成功[5]，取出圓環形鐵片。A組大鼠僅做背部正中線深及深筋膜切口即可。造模期間分籠飼養，每天創面噴灑硫酸慶大霉素注射液預防感染。

1.4 治療方法 C組、D組均采用2%碘酒及75%乙醇消毒壓瘡創面周圍皮膚，3%雙氧水棉球消毒壓瘡創面，生理鹽水沖洗創面，干紗布塊擦干創面后，C組創面上撒滅菌的蒲黃壓瘡散，D組創面上撒云南白藥，然后均以凡士林紗條覆蓋，無菌紗布覆蓋，繃帶固定包扎。A組、B組創面除不撒藥物外，其余處理同C組、D組，均每天換藥1次，仔細觀察壓瘡創面肉芽組織生長及愈合情況。

1.5 檢測指標和方法 4組均于治療5 d時分別于創面邊緣取材,組織常規固定、包埋、連續切片、HE染色,VEGF免疫組織化學染色標記，光鏡下觀察并攝片。免疫組化標記以棕黃色顆粒狀沉積為陽性，明確陽性血管內皮細胞和毛細血管后，由顯微圖像分析系統進行低倍鏡下(×10)觀看，隨機選取2個視野,計算陽性毛細血管數及陽性毛細血管面積[6]。

2 結 果

2.1 大鼠VEGF免疫組化標記鏡下表現 C組及D組大鼠壓瘡創面VEGF標記毛細血管數量及增生的血管內皮細胞明顯較多，見圖1和圖2。而B組 大鼠壓瘡創面VEGF標記毛細血管數量及增生的血管內皮細胞明顯較少，見圖3。

2.2 大鼠壓瘡創面VEGF標記毛細血管情況比較 C組、D組大鼠創面VEGF標記毛細血管數量和毛細血管面積均明顯高于B組(P均<0.01)，且C組明顯高于D組(P<0.05)。見表1。

3 討 論

圖1 A組VEGF免疫組化標記鏡下表現(×10)

圖2 D組VEGF免疫組化標記鏡下表現(×10)

圖3 B組VEGF免疫組化標記鏡下表現(×10)

表1 各組大鼠壓瘡創面VEGF標記毛細血管情況比較

注：①與B組比較，P<0.01;②與D組比較，P<0.05。

目前由于壓瘡是生理學、病理學、組織學等學科共同研究的焦點問題，因不同研究存在側重點不同和研究方向差異，使壓瘡的形成機制呈現多學派爭鳴的局面。壓瘡形成機制有缺血性損傷學說、再灌注傷學說、細胞變形學說等，但理論界普遍支持缺血性損傷學說。該學說認為壓瘡的實質是組織受壓變形后毛細血管被阻斷導致局部缺血，各層組織同時發生相應的病理改變,包括水腫、吞噬細胞浸潤、橫紋肌溶解消失、膠原纖維透明性變等[7]。結合壓瘡致病機制，西醫認為壓瘡的治療主要是解除壓力壓迫，積極局部換藥，預防創面感染，加強全身營養以及必要時手術治療等。但臨床往往治療效果差，創面遷延不愈。壓瘡的難以愈合不僅降低了患者的生活質量，而且極大地消耗了醫藥及護理費用。

中醫認為,壓瘡的成因為局部脈絡瘀阻或復感邪毒,瘀毒互結而致局部紅腫潰破成腐成膿,加之患者多為氣血虛衰, 瘡口不能自愈。針對壓瘡病因宜選用解毒疏散、活血化瘀、收斂生肌之中藥,效果頗佳[8]。蒲黃壓瘡散由蒲黃粉、大黃、黃連、白芨中藥組成，其中蒲黃粉為香蒲科植物水燭香蒲( 狹葉香蒲)、東方香蒲或同屬植物的干燥花粉，蒲黃粉含有黃酮類組分，而黃酮類組分中的苷類具有顯著活血化瘀作用，故蒲黃粉為重要的傳統化瘀藥物，具有行血和破血的功效[9]。另外研究表明, 蒲黃水溶液體外對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌及Ⅱ型副傷寒桿菌均有較強抑制作用和抗炎作用[10]。故組方中的蒲黃對壓瘡創面的感染預防和治療有極其重要的作用。大黃中的主要成分為蒽醌衍生物、大黃酸、大黃素和蘆薈大黃素等， 具有清熱解毒、活血化瘀、解痙功能,并具有較強的抗菌作用[11]；大黃粉外敷具有活血祛瘀、抑菌消炎、收斂和消除局部性炎水腫的作用[12]。黃連為毛茛科植物，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效。白芨性微寒,味苦、甘、澀，具有收斂止血、清熱利濕、消腫止痛之功效，臨床上廣泛用于治療咯血、吐血、外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚鄆裂、肺結核吐血、潰瘍病出血等病癥[13]。四味中藥合用，覆蓋于壓瘡創面，具有的清熱解毒、活血化瘀、抗炎、消腫止痛、收濕斂瘡之功效。

VEGF是一種特異地作用于血管內皮細胞的多功能細胞因子, 既能使血管內皮細胞增殖、遷移，又能增加血管的通透性，使血管中的大分子物質進入細胞外基質中,有利于新生血管和基質的細胞生長[14]。VEGF在壓瘡愈合過程中表達比較豐富，其在壓瘡愈合過程中起決定性作用。本實驗結果也顯示蒲黃壓瘡散及云南白藥均可增加大鼠創面VEGF的表達，能有效改善壓瘡創面局部的血液循環，促進血管及纖維組織的增生,進而促進創面的修復。但蒲黃壓散效果更好。

綜上所述, 蒲黃壓瘡散可以有效改善壓瘡創面局部的血液循環，促進血管及纖維組織的增生,與該方具有的清熱解毒、活血化瘀、抗炎、消腫止痛、收濕斂瘡之功效相一致，為臨床應用蒲黃壓瘡散治療壓瘡提供了實驗依據。

[1] 于清浩.前列地爾脂微球載體制劑治療褥瘡的效果觀察[D].遵義：遵義醫學院碩士學位論文，2011：7-8

[2] 韓斌如,王欣然.壓瘡護理[M].北京：科學技術文獻出版社，2013：5-6

[3] 王德強,夏仁云.局部應用胰島素促進壓瘡創面愈合的機制[J].中國康復，2006，21(1)：18-20

[4] Peirce SM,Skalak TC,Rieger JM,et al.Select ive A( 2A) adenosine recept or act ivation reduces skin pressure ulcer format ion and inflammat ion[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol,2001,281(1):H67-H74

[5] Russell RR,Alan CS，Jon EM,et al.Anovel murine model of cyclicai.cutaneous is chemia-reperfusion injury[J].Jsurl Res,2004,116:172-180

[6] 蘭海梅.荊芥連翹湯促愈小腿潰瘍臨床與實驗研究[D].廣州：第一軍醫大學博士學位論文，2003：40-41

[7] 姜麗萍,蔡福滿.局部皮膚持續受壓致壓瘡的實驗研究[J].解放軍護理雜志,2007，12(24):4-5

[8] 劉靖芳,陳秀鳳,榮向霞.“清、疏、斂、收”治褥瘡[J].中國基層醫藥,2004，11(5):603-604

[9] 陳佩東，孔祥鵬，李芳，等.蒲黃炒炭前后化學組分的變化及譜效相關性研究[J].中藥材，2012,35(8):1221-1222

[10] 王海波,王章元.蒲黃藥理作用的研究進展[J].醫藥導報,2005,24(4):318-319

[11] 陳長勛.中藥藥理學[M].上海：上海科學技術出版社， 2006：65-66

[12] 于寶開.大黃粉外敷治療甲溝炎[J].中國臨床醫生，2007,35(4):79

[13] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學工業出版社，2000：76-77

[14] Chen J,De S,Brainard J,et al.Metastatie properties of prostate cancer cellsare controlled by VEGF[J].Cell Commun Adhes,2004,11(1):1-11

Influence of Pollen Typhae Bedsore Powder on VEGF in rat model of pressure ulcer wound

LIU Peng1, ZHOU Jun2

(1.Shangluo Vocational and Technical College, Shangluo 726000, Shannxi, China; 2.The Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712000, Shaanxi, China)

Objective It is to observe the influence of Pollen Typhae Bedsore Powder (PTBP) on vascular endothelial growth factor (VEGF) in rat model of pressure ulcer wound.Methods 40 rats were randomly divided into sham operation control group (group A), model group (group B), PTBP group (group C) and Yunnan Baiyao group (group D).The animal model of pressure sore was constructed by magnetic compression sustained ischemic damage.After the success of modeling, the animals were given routine dressing PTBP in group C and with Yunnan Baiyao in group D.5 days respectively to the wound edge tissue based, conventional fixed, embedded, serial section, HE staining, the expression of VEGF were observed under light microscope and photographed by immunohistochemical staining.Results The number of capillaries marked by VEGF and the number of capillary capillary area in rats of group C and D wound were higher than those of group B (allP<0.01), and those of group C were higher than group D (P<0.05).Conclusion PTBP can effectively improve the local blood circulation of decubitus ulcer, promote blood vessels and fibrous tissue hyperplasia, thereby promoting wound repair.

Pollen Typhae Bedsore Powder; pressure sore; vascular endothelial growth factor

劉鵬，男，講師,碩士,從事免疫學教學與科研、病原微生物與臨床疾病關系研究。

陜西省教育科學“十二五”規劃課題(SGH140934)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.15.004

R-332

A

1008-8849(2015)15-1606-03

2015-01-25