蔓性千斤拔免疫增強活性部位化學成分研究

卓 燊,喬 雪,秦海洸*

(1.廣西科技大學 醫學院，廣西 柳州545005；2.廣西中醫藥大學，廣西 南寧530001)

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蔓性千斤拔免疫增強活性部位化學成分研究

卓 燊1,喬 雪2,秦海洸1*

(1.廣西科技大學 醫學院，廣西 柳州545005；2.廣西中醫藥大學，廣西 南寧530001)

目的：研究蔓性千斤拔免疫增強活性部位的化學成分。方法：采用硅膠柱層析、反相ODS柱色譜、高效液相色譜法等方法對化合物進行分離、純化，使用核磁共振等光譜手段確定化合物結構。結果：分離得到6個已知化合物，分別為染料木素(1)、5,7,3',4'-四羥基異黃酮(2)、8-(1,1-二甲基烯丙基)染料木黃酮(3)、鷹嘴豆芽素A(4)、蔓性千斤拔素D(5)、胡蘿卜苷(6)。結論：蔓性千斤拔的免疫增強活性部位為乙酸乙酯萃取部位，化合物6為首次從該植物中分離得到。

蔓性千斤拔；活性部位；免疫增強；化學成分

千斤拔為豆科千斤拔屬多年生草本植物蔓性千斤拔(FlemingiaphilippinensisMerr.et Rolfe )的干燥根，屬于瑤族常用藥之一。現代藥理研究表明，千斤拔具有抗炎、鎮痛、保護周圍神經損傷等作用，對于其免疫增強作用少有報道[1]。因此，本課題組通過NK細胞活性測定、ConA誘導的淋巴細胞轉化率實驗和小鼠碳廓清實驗法確定了蔓性千斤拔的免疫增強活性部位為乙酸乙酯萃取部位，之后對此部位進行化學成分研究，從中分離鑒定出6個化合物。其中，化合物6為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker ARX-300/600MHz超導核磁共振儀(Bruker公司)；旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；Sephadex LH-20(Pharmacia公司)；ODS 硅膠(Merck公司)；薄層色譜用硅膠GF254、柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)；試劑均為分析純。千斤拔藥材購自云南省玉溪市，經鑒定為蔓性千斤拔。

2 千斤拔的提取與分離

取蔓性千斤拔藥材5kg，適當粉碎。用10倍量蒸餾水浸泡過夜，加熱回流提取3次，每次0.5h，過濾后合并提取液。將提取液進行減壓濃縮至適量，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，分別減壓濃縮成浸膏，晾干，稱重，備用。

取乙酸乙酯萃取物130g，使用開放硅膠柱色譜法分離，用二氯甲烷-甲醇進行梯度洗脫，合并相同流分。用開放ODS柱色譜、凝膠柱色譜等反復分離純化，得到化合物1-6。

3 結構鑒定

化合物1:無色針晶(丙酮)，mp 297～299℃。1H-NMR(600MHz，C3D6O) δ: 8.18(1H,s,H-2),6.39(1H,d,J=2.1Hz,H-6),6.25(1H,d,J=2.1Hz,H-8),7.46(2H,d,J=8.3Hz,H-2',6'),6.92(2H,d,J=8.3Hz,H-3',5');13C-NMR(150MHz,C3D6O) δ:155.2(C-2),124.8(C-3),180.1(C-4),170.5(C-5),104.9(C-6),167.8(C-7),97.5(C-8),160.1(C-9),108.2(C-10),124.2(C-1'),133.5(C-2',6'),116.5(C-3',5'),161.3(C-4')。數據與文獻[2]報道基本一致,因此確定為染料木素。

化合物2:黃色針晶(甲醇)，mp 268～ 270 ℃。1H-NMR (600MHz，CDCl3)δ：8.20(1H,s,H-2),6.43(1H,d,J=2.2 H z,H-6),6.24(1H,d,J =2.2 Hz,H-8),7.11(1H,d,J =8.2,H-5'),7.62(1H,d,J =8.2Hz,H-6');13C-NMR(150MHz，DMSO-d6) δ:158.2(C-2),124.1(C-3),184.2(C-4),165.4(C-5),103.1(C-6),167.8(C-7),97.1(C-8),164.3(C-9),108.8(C-10),113.4(C-1'),107.5(C-2'),160.3(C-3'),159.8 (C-4'),110.7(C-5'),135.5(C-6')。數據與文獻[3]報道基本一致 ，故鑒定為5,7,3',4'-四羥基異黃酮。

化合物3:黃色塊晶(甲醇)。1H-NMR (600MHz，CDCl3) δ：7.85 (1H,s,H-2),6.27 (1H,s,H-6),7.34(2H,d,J=8.5 Hz,H-2',6'),6.89 (2H,d,J=8.5 Hz,H-3',5');13C-NMR(CDCl3,120MHz): 150.2(C-2),122.5(C-3),180.4(C-4),160.1 (C-5),101.2(C-6),161.1(C-7),108.9 (C-8),155.6 (C-9),106.3(C-10),122.1 (C-1'),129.5 (C-2',6'),115.2 (C-3',5'),155.4 (C-4'),40.3 (C-1''),147.9 (C-2''),112.8(C-3''),26.9 (C-4'',2)。與文獻[4]報道數據基本一致，故鑒定該化合物為8-(1,1-二甲基烯丙基)染料木黃酮。

化合物4:黃色針晶(甲醇)。1H-NMR (600MHz，DMSO-d6) δ:3.62 (3H,s,4'-OCH3),6.17 (1H,d,J=1.5Hz,H-6),6.28 (1H,d,J=1.5Hz,H-8);13C-NMR (120MHz,DMSO-d6): 152.8 (C-2),120.5 (C-3),178.9 (C-4),161.2 (C-5),97.8 (C-6),163.4 (C-7),93.1 (C-8),156.2 (C-9),103.2 (C-10),121.7 (C-1'),128.8 (C-2'),112.1 (C-3'),158.2 (C-4'),113.1 (C-5'),129.6 (C-6'),55.5 (-OCH3)。與文獻[5]報道的數據基本一致，故鑒定為鷹嘴豆芽素A。

化合物5:白色粉末(甲醇)。1H-NMR (600MHz，CDCl3) δ： 2.97(2H,m,H-3),6.51(2H,s,H-3',5'),1.79(3H,s,4''-CH3),1.83(3H,s,5''-CH3);13C-NMR (CDCl3,120MHz):78.8 (C-2),43.5 (C-3),197.8 (C-4),161.2 (C-5),108.4 (C-6),158.5 (C-7),108.1 (C-8),163.2 (C-9),103.4 (C-10),117.3 (C-1'),156.6 (C-2'),104.9 (C-3'),158.3 (C-4'),109.2 (C-5'),128.6 (C-6'),22.8 (C-1''),123.1 (C-2''),134.9 (C-3''),19.4 (C-4''),27.3 (C-5''),22.6 (C-1'''),123.4 (C-2'''),136.3 (C-3'''),19.2 (C-4'''),26.5 (C-5''')。數據與文獻[6]報道基本一致，故鑒定為蔓性千斤拔素D。

化合物6:白色粉末(甲醇)。1H-NMR (600MHz，CD3OD) δ：5.48(1H,d,J =5.3,H-6),4.51(H,d,J =7.2Hz,H-1'),3.32(2H,q,J =5.8,H-2',3'),3.45( 1H,q,J= 4.2Hz,H -4'),3.24(1H,m,H-5' ) ;13C-NMR (120MHz,CD3OD): 36.7(C-2),31.5(C-3),41.5(C-4),139.1(C-5),121.3(C-6),31.2(C-7),31.2(C-8),49.9(C-9),35.7(C-10),20.1(C-11),37.9(C-12),42.0(C-13),56.8(C-14),22.6(C-15),27.7(C-16),55.1(C-17),10.2(C-18),17.9(C-19),35.4(C-20),18.3(C-21),33.2(C-22),25.4(C-23),44.9 (C-24),28.6(C-25),18.8(C-26),18.5(C-27),21.9(C-28),11.7(C-29),100.4(C-1'),73.2(C-2'),75.5(C-3'),68.9(C-4'),76.3(C-5'),61.6(C-6') 。與文獻[7]數據基本一致，故鑒定為胡蘿卜苷。

[1] 張麗霞,彭建明,馬潔.千斤拔研究進展[J].中藥材,2007,30(7):887-890.

[2] 馮潔,向誠,梁鴻.豐城雞血藤異黃酮類成分的研究[J].中國中藥雜志,2007,32(4):321.

[3] 張雪,宋啟示.銹毛千斤拔根的化學成分研究[J].中草藥,2009,40(6):865-868.

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[6] 李華,李鳳嵐,馬小軍.千斤拔異戊烯基黃酮研究[C].中國藥學會學術年會暨第八屆中國藥師周論文集,2008.

[7] 李文武,丁立生,李伯剛.苧麻根化學成分的初步研究[J].中國中藥雜志,1996,21 (7):321.

(責任編輯：宋勇剛)

2015-06-12

廣西壯族自治區衛生廳自籌經費科研課題(Z2012602)； 廣西壯族自治區教育廳一般資助項目(2013YB289)；廣西植物功能物質研究與利用重點實驗室主任基金項目(FPRU2014-8)；廣西科技大學科學基金項目合同(校科醫1307201)

卓燊(1975-)，女，廣西科技大學主管中藥師，研究方向為中藥藥效成分。

秦海洸(1970-)，男，廣西科技大學教授，研究方向為中醫藥治療皮膚病、性病。

R284.1

A

1673-2197(2015)21-0026-01

10.11954/ytctyy.201521011