乙型肝炎肝硬化血清纖維化指標和肝功能相關性研究

陸明海，張軍艷，楊宏偉

(十堰市中醫醫院檢驗科，湖北 十堰 442012)

乙型肝炎肝硬化血清纖維化指標和肝功能相關性研究

陸明海※，張軍艷，楊宏偉

(十堰市中醫醫院檢驗科，湖北 十堰 442012)

摘要：目的探討血清纖維化指標透明質酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、Ⅲ型膠原蛋白(PC-Ⅲ)和肝功能的關系，評價HA、LN和PC-Ⅲ對診斷肝纖維化的敏感性和特異性。方法選擇2012年3月至2014年6月十堰市中醫醫院收治的乙型肝炎患者145例為研究對象，其中慢性乙型肝炎(A組)63例、乙型肝炎肝硬化(B組)42例、慢性HBV攜帶者(C組)40例，同期選擇20例健康健康體檢者作為健康對照組(D組)。采用生化法檢測丙氨酸轉氨酶(ALT)；放射免疫法檢測血清HA、LN、PC-Ⅲ，熒光定量聚合酶鏈反應檢測HBV-DNA載量。分析4組纖維化指標及其與ALT、HBV-DNA載量的關系。結果4組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平比較差異有統計學意義(均P<0.01)。B組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平最高[(475±103) μg/L、(158±43) μg/L、(224±78) μg/L]，與A組[(298±23) μg/L、(124±33) μg/L、(186±44) μg/L]、C組[(82±22) μg/L、(73±18) μg/L、(45±13) μg/L]、D組[(78±14) μg/L、(68±13) μg/L、(38±10) μg/L]分別比較，差異有統計學意義(均P<0.05)。A組患者HA、LN、PC-Ⅲ和ALT、HBV-DNA呈正相關(均P<0.05)；B組患者HA、LN、PC-Ⅲ和ALT、HBV-DNA無明顯相關性(均P>0.05)。HA對肝硬化纖維化診斷的靈敏度最高(93.4%)，PC-Ⅲ特異度最高(88.4%)。結論乙型肝炎患者血清HA、LN、PC-Ⅲ明顯升高，對慢性乙型肝炎患者聯合診斷有助于早期診斷肝纖維化，及早干預。

關鍵詞：乙型肝炎；肝纖維化；透明質酸；Ⅲ型膠原蛋白；肝功能

各類肝炎世界流行趨勢不減，每年約有100萬人死于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染后導致的肝硬化、肝衰竭和肝癌[1]。當機體感染HBV后，病毒持續在體內進行復制，啟動自身免疫應答清除體內的病毒，導致肝臟細胞持續損傷，刺激肝臟發生纖維化[2]。肝星狀細胞與肝臟纖維化的發生、發展及肝臟星狀細胞密切相關，當其受到刺激時，可分泌大量的纖維化相關修復因子，促進肝臟纖維修復[3]。本研究主要分析肝臟纖維化主要指標透明質酸(hyaluronic acid,HA)、層粘連蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型膠原蛋白(protein collagen Ⅲ,PC-Ⅲ)與肝功能的相關性。現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2012年3月至2014年6月十堰市中醫醫院收治的145例乙型肝炎患者為研究對象，其中慢性乙型肝炎(A組)63例、乙型肝炎肝硬化(B組)42例、慢性HBV攜帶者(C組)40例。其中A組男33例、女30例，年齡23～67歲，平均(36±5)歲；B組男27例、女15例，25～57歲，平均(39±3)歲；C組男23例、女17例，23～67歲，平均(37±3)歲。同期選擇20例健康健康體檢者作為健康對照組(D組)，男12例、女8例，年齡22～46歲，平均(34±4)歲。慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、慢性HBV攜帶者診斷均符合2010年乙型肝炎防治指南[1]，排除藥物性肝炎、酒精性肝炎、腎疾病、腎功能障礙、惡性腫瘤、急性感染、服用激素類藥物等，自愿參與該項目的研究，并愿意承擔各項檢測項目的費用。各組受試者的性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1血清HA、LN、PC-Ⅲ檢測血清HA、LN、PC-Ⅲ檢測采用放射免疫法。主要儀器：γ放射免疫技術器(GC-1200H，科大創新股份有限公司)。HA放射免疫分析試劑盒(北京申宗生物技術研究所提供，批號：20121120H)；Ⅲ膠原放射免疫試劑盒(上海科美生物試劑有限公司，批號：MA20132203)；層粘連蛋白放射免疫試劑盒(上海科美生物試劑有限公司，批號：MA20130431)。

1.2.2HBV核酸的檢測方法熒光定量PCR檢測(廈門新創科技有限公司)。檢測步驟規范對待來自患者血漿樣本和對照品(陰、陽)進行處理，其中步驟方法嚴格按試劑盒中說明書進行操作。樣品在進行熒光定量PCR擴增前要進行反轉錄。對數據相關性進行分析，采用對數計算的方法同時定量計算HBV-DNA的平均拷貝數。所用試劑檢測下限為<80 copies/mL。僅A、B、C組完成HBV-DNA檢測。

1.2.3丙氨酸轉氨酶(alanine aminotransferase,ALT)檢測主要試劑：ALT測定試劑盒，北京利德曼公司生產[國食藥監械(進)字2004第3400295號]。采用生化方法，用貝克曼DX800全自動生化分析儀結合ALT測定試劑盒進行檢測。僅A、B、C組進行ALT檢測。

2結果

2.1各組HA、LN、PC-Ⅲ水平比較4組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平比較差異有統計學意義(均P<0.01)。B組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平最高，與A、C、D組比較，差異有統計學意義(均P<0.05)；C、D組高于B組(P<0.05)。而C組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平與D組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

HA：透明質酸；LN：層粘連蛋白；PC-Ⅲ：Ⅲ型膠原蛋白；a與A組比較，P<0.05；b與B組比較，P<0.05；A組：慢性乙型肝炎；B組：乙型肝炎肝硬化；C組：慢性HBV攜帶者；D組：健康對照組

2.2乙型肝炎患者HA、LN、PC-Ⅲ和ALT、HBV-DNA的關系A組患者HA、LN、PC-Ⅲ與ALT呈正相關(r=0.34，0.35，0.41，均P<0.05)。B組和C組HA、LN、PC-Ⅲ和ALT無明顯相關性(P>0.05)。A組患者HA、LN、PC-Ⅲ與HBV-DNA呈正相關(r=0.35，0.45，0.53，均P<0.05)。B組和C組HA、LN、PC-Ⅲ與HBV-DNA無明顯相關性(r=0.04，P>0.05)。

2.3ROC曲線評價血清HA、LN、PC-Ⅲ對肝硬化診斷的敏感性和特異性HA曲線下面積最大，為0.93，而LN和PC-Ⅲ分別為0.86、0.89，HA、LN、PC-ⅢROC曲線均位于機會線上，HA和LN、PC-Ⅲ曲線下面積比較差異有統計學意義(Z=3.05，P<0.05)，LN、PC-Ⅲ曲線下面積比較差異無統計學意義(P>0.05)。在最佳臨床診斷分界點時，HA對肝硬化纖維化診斷的靈敏度最高，PC-Ⅲ對肝硬化纖維化的特異度較高。見表2，圖1。

HA：透明質酸；LN：層粘連蛋白；PC-Ⅲ：Ⅲ型膠原蛋白；每個指標檢測的靈敏度和特異度為該指標最佳臨床診斷分界點下的靈敏度和特異度

HA：透明質酸；LN：層粘連蛋白；PC-Ⅲ：Ⅲ型膠原蛋白

圖1乙型肝炎肝硬化患者血清HA、LN、PC-Ⅲ水平ROC曲線結果

3討論

肝纖維化是各類肝臟疾病共同的病理進程，最終發展到肝硬化、肝癌階段，導致最終疾病發展不可逆，但早期肝纖維化是可逆的病理改變，所以臨床對早期肝纖維化診斷尤為重要[4]。肝纖維化診斷的金標準是肝臟組織活檢，但因其創傷性不為臨床廣泛應用[5]。雖然超聲對肝纖維化的診斷臨床應用廣泛，尤其是彈性超聲技術的發展，對肝纖維化的診斷更為準確，但肝纖維化一旦發生超聲學改變，多數情況下肝纖維病程已經進展到不可逆階段[6]。

目前臨床對早期肝纖維化血清學診斷還處于不成熟階段，血清學研究最多的指標有轉化生長因子β1、PC-Ⅲ、血小板衍生生長因子、HA等，這些因子主要由肝臟庫普弗細胞、星狀細胞分泌[7-8]。TGF-β1主要是抑制細胞外基質降解和肝細胞再生能力，使肝纖維化逐漸加重，與肝纖維化程度呈正相關[9]。HA由間質細胞合成，是結締組織主要的非細胞成分，當肝纖維化庫普弗細胞清除能力明顯下降，使得HA代謝速率明顯下降，血清中HA水平明顯增高[10]。血清PC-Ⅲ主要是由肝臟星狀細胞合成，其血清水平增高表明PC-Ⅲ合成活躍，表明肝臟庫普弗細胞功能活躍，血清含量與肝纖維程度相一致[11]。LN主要是內皮細胞合成，介導細胞間粘連作用，正常血清LN水平極低，若血清中LN水平升高，提示間質細胞增生[12]。

本研究結果顯示，HBV攜帶者和正常健康對照組人群血清纖維化指標比較差異無統計學意義，說明HBV攜帶者體內病毒對肝臟細胞無侵犯，未對其造成損失。而慢性乙型肝炎患者體內病毒對肝臟細胞慢性損失，其體內的HA、LN、PC-Ⅲ稍有升高。HA對肝硬化纖維化診斷的靈敏度為93.4%，特異度為75.2%；PC-Ⅲ對肝硬化纖維化的特異性最高，為88.4%。Lu等[13]研究認為，HA對肝纖維診斷的靈敏度和特異性分別為85%和78%，是檢測肝纖維化較理想的血清指標。本研究結果與其基本吻合。Bai等[14]研究認為，HBV-DNA是評估肝纖維化的獨立指標，HBV-DNA載量與肝纖維化程度呈正相關。本研究結果顯示，慢性乙型肝炎患者體內的HA、LN、PC-Ⅲ水平與HBV-DNA、ALT呈正相關。本研究結果與Bai等[14]結果相似，但是在B組患者HA、LN、PC-Ⅲ和HBV-DNA無明顯相關性，呈“分離現象”，血清纖維化指標處于較高水平，而HBV-DNA 和ALT處于相對較低水平。

總之，肝功能及HBV-DNA對已纖維化病變的肝臟無明顯相關性，血清肝纖維化指標的對慢性乙型肝炎患者長期監測，有利于臨床早期發現肝纖維化，及早干預具有積極的臨床意義。

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Research on the Relationship between Serum Fibrosis Indexes and Liver Function in Patients with Cirrhosis Hepatitis BLUMing-hai，ZHANGJun-yan，YANGHong-wei.(DepartmentofClinicalLaboratory,ShiyanCityTraditionalChineseMedicineHospital,Shiyan442012,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the correlation between the serum fibrosis indexes,including hyaluronic acid(HA),laminin(LN),protein collagen-Ⅲ(PC-Ⅲ) and liver function,and assess the sensitivity and specificity of HA,LN and PC-Ⅲ in diagnosing liver fibrosis.MethodsDuring Mar.2012 and Jun.2014,145 patients with hepatitis B in Shiyan City Traditional Chinese Medicine Hospital were selected,including chronic hepatitis B(group A) 63 cases,hepatitis B cirrhosis(group B) 42 cases,chronic hepatitis B virus (HBV) carriers(group C) 40 cases,and 20 cases of for health checkup during the same period were included as control group(group D).ALT was detected by biochemical method;HA,LN,PC-Ⅲ were detected by radioimmunoassay;HBV- DNA load was detected by FQ-PCR.Analysis of fibrosis indexes and its relationship with ALT,HBV-DNA loads of the four groups was conducted.ResultsThe difference of the level of serum HA,LN,PC-Ⅲ in the four groups was statistically significant(P<0.01).The level of serum HA,LN and PC-Ⅲ were the highest in group B compared with group [(475±103) μg/L,(158±43) μg/L,(224±78) μg/L]，compared with A group[(298±23) μg/L,(124±33) μg/L,(186±44) μg/L],C group[(82±22) μg/L,(73±18) μg/L,(145±13) μg/L]and D group[(78±14) μg/L,(68±13) μg/L,(38±10) μg/L]and the difference was statistically significant(P<0.05).HA,LN,PC-Ⅲ and ALT,HBV DNA were positively correlated in group A(P<0.05);HA,LN,PC-Ⅲ and ALT,HBV DNA had no obvious correlation in group B(P>0.05).ConclusionThe serum level of HA,LN,PC-Ⅲ are significantly increases in patients with liver fibrosis,and combined detection in patients with chronic hepatitis B is helpful to early diagnose liver fibrosis and clinical intervention.

Key words:Hepatitis B; Hepatic fibrosis; Hyaluronic acid; Protein collagen-Ⅲ; Hepatic function

收稿日期：2015-01-19修回日期：2015-05-21編輯：伊姍

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.24.045

中圖分類號：R446.1

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)24-4544-03