益氣通脈飲對慢性心力衰竭大鼠心功能及血清 TNF-α、IL-6、TGF-β1水平的影響

吉 利，張 艷

遼寧中醫藥大學附屬醫院心內一科，遼寧 沈陽 110032

慢性心力衰竭(CHF)是心血管疾病的終末期表現和最主要的死因。心氣虛衰是CHF發病的始動因素，而血瘀是CHF的中心病理環節。根據CHF的病機特點，篩選藥物制成益氣通脈飲治療CHF取得了良好的療效，為進一步探討益氣通脈飲治療CHF的作用機理進行了動物實驗研究，現報道如下：

1 材料與方法

1.1 動物 10～12周齡健康雄性Wistar大鼠100只，體質量250～300 g，由遼寧中醫藥大學實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號：SYXX(遼)2010-0013。

1.2 試劑 益氣通脈飲，藥物組成：黃芪、人參、紅花、丹參、三七、益母草等（遼寧中醫藥大學附屬醫院中藥局提供）；科素亞（杭州默沙東制藥有限公司生產，國藥準字H20000371，規格：50 mg/片）；大鼠腫瘤壞死因子 α(TNF-α)、白介素 -6(IL-6)、轉化生長因子 -β1(TGF-β1)ELISA試劑盒（上海博研生物工程研究中心，產品編號分別為BYS11721B、BYS11731B、BYS11722B）。

1.3 儀器設備 DH-140B型小動物呼吸機(浙江醫科大學醫療實驗儀器廠生產)；MS-2000多媒體化心電圖軟件(廣州市龍飛達科技有限公司生產)；SONOS5500分色多普勒超聲心動圖機(Agilent公司生產)。

1.4 方法

1.4.1 造模與分組 參考文獻［1］方法，在無菌操作下，于胸骨左側第3、4肋間皮膚處橫向切開長約1.5 cm的切口，鈍性分離軟組織，暴露心臟后，于左冠狀動脈前降支起點下2～4mm處用6號絲線結扎左冠狀動脈主干造成急性心肌梗塞模型。術后記錄標準肢體導聯及胸前導聯(紙速50 mm/s)心電圖，ST段弓背抬高者為造模成功。常規喂養飼料與水1周后，于第2周將飼料減半，使大鼠處于半饑餓狀態，常規喂水；于第3周開始，每天游泳1次，致疲乏無力(約20分鐘)；于第4周由電檢科醫生做彩色超聲多普勒心電圖，測定左室收縮末期容積(ESV)、左室舒張末期容積(EDV)、左室射血分數(LVEF)、左室每搏輸出量(SV)，進而計算左室心指數(CI)，CI≤180mL/(min/kg)者作為心衰成功模型入選。將造模成功大鼠隨機分為模型對照組、中藥等效劑量組、中藥大劑量組、西藥對照組，另設正常對照組，每組8只。

1.4.2 給藥方法 中藥等效劑量組與大劑量組分別按照5.4 g/kg(體質量)、16.2 g/kg(體質量)予益氣通脈飲煎取液灌胃，即相當于臨床成人劑量與3倍成人劑量；西藥對照組予科素亞混懸液，按4.5mg/kg(體質量)灌胃，相當于臨床成人劑量；模型對照組與正常對照組以同體積生理鹽水灌胃。1次/d，共8周。

1.5 觀察指標及檢測方法 心功能檢查：由電檢科醫生為大鼠做彩色超聲多普勒心動圖，測定左室收縮末期容積(ESV)、左室射血分數(LVEF)、左室舒張末期容積(EDV)、左室每搏輸出量(SV)，各項數值均經計算機處理后獲得；測定血清TNF-α、IL-6、TGF-β 含量：5%戊巴比妥(2～3mL/kg)腹腔注射麻醉下開胸取左心室腔血2mL，注入試管中，搖勻，4℃3 000 r/min離心10分鐘，取血清-20℃保存。用放射免疫法(ELISA)測定TNF-α、IL-6與 TGF-β1。

1.6 統計學方法 數據采用SPSS 13.0統計軟件包進行分析，計量資料以(χ±s)表示，組間多重比較采用SNK-q檢驗。檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 各組大鼠一般狀態 除正常對照組外，其余各組大鼠在造模后均出現不同程度的蜷臥、脫毛、消瘦、厭食、便溏等癥狀，未經任何治療的模型對照組最重。該組大鼠一般狀態差，表現為活動度顯著下降，進食及飲水量明顯減少，消瘦明顯。各組大鼠治療后一般狀態普遍有所改善，以中藥等效劑量組最為明顯，表現為體質量增加，活動較多，一般狀態尚可。中藥大劑量組和西藥對照組同模型對照組比較，一般狀態也有所改善，但不如中藥等效劑量組明顯。

2.2 各組大鼠心功能的變化 模型對照組大鼠ESV、LVEF、EDV、SV同正常對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)，同模型對照組比較，中藥等效劑量組以及西藥對照組ESV、LVEF、EDV、SV差異有統計學意義(P＜0.05)；而中藥大劑量組和西藥對照組之間各項指標比較差異無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

2.3 各組大鼠血清細胞因子水平比較 與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平顯著增高(P＜0.01)；中藥大劑量組、等效劑量組和西藥對照組血清 TNF-α、IL-6、TGF-β1水平均較模型對照組降低(P＜0.05)；而中藥大劑量組、等效劑量組和西藥對照組之間血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平比較差異無統計學意義(P＞0.05)，見表 2。

表1 各組大鼠心功能變化情況(χ±s)

表 2 各組大鼠血清 TNF-α、IL-6、TGF-β1水平比較(χ±s)

3 討論

多項研究表明，慢性心力衰竭是一種神經激素細胞因子網絡失衡狀態［2］。心衰時，多種有生物活性細胞因子的過度表達是造成心肌損傷、循環功能受損的重要原因。TNF-α是一種具有多種生物學效應的細胞因子。近年研究發現，充血性心力衰竭時，心肌細胞會產生大量TNF-αmRNA及表達TNF-α。而且，血清TNF-α濃度與心力衰竭的嚴重程度以及臨床特征密切相關，提示TNF-α是反映心力衰竭程度的一項重要指標［3］。IL-6類似于TNF-α，是另一種多功能細胞因子。除了調節免疫和炎癥反應，IL-6還能獨立調節心臟功能，發揮負性肌力作用和細胞毒作用。相關實驗證實衰竭心肌組織可表達IL-6，并通過自分泌或旁分泌機制致心肌收縮功能不全［4］。TGF-β1是一種多功能蛋白質,具有增加細胞外基質沉積的作用。在心臟中,心肌成纖維細胞是其作用的主要靶點。作為最重要的促纖維性細胞因子之一，TGF-β1可促進心肌成纖維細胞的生長并調節基因的表達［5］。

CHF屬祖國醫學“心悸”“怔忡”“心痹”等范疇［6-8］。本研究認為CHF的基本病機為本虛標實，心氣虧虛為本，血瘀為標。益氣通脈飲是基于心氣虛衰為CHF發病的基礎，血瘀是其中心病理環節理論認識的基礎上，結合臨床經驗組方，由黃芪、人參、紅花、丹參、三七、益母草等組成。本研究表明，益氣通脈飲不僅能改善大鼠的一般狀況、減輕心力衰竭癥狀，還可有效降低血清中TNF-α、IL-6、TGF-β1水平，拮抗這些細胞因子對心血管的不利影響。

總之，本研究發現益氣通脈飲治療慢性心力衰竭的作用與抑制炎性細胞因子TNF-α與IL-6的活性，降低促纖維性細胞因子TGF-β1的水平有關,從而在一定程度上達到改善心衰癥狀，提高生存質量的目的，對于預防和延遲心功能不全的進展具有重要意義。

［1］ 王碩仁，趙明鏡，王振濤，等.建立心肌梗死心氣虛血瘀證和心陽虛血瘀證病癥動物模型的研究［J］.中國中西醫結合雜志，2008，28(3):245-247.

［2］ 胡大一.心血管內科學高級教程［M］.北京：人民軍醫出版社，2013：166.

［3］ Cugno M，Mari D，Meroni PL，et al.Haemostatic and inflammatory biomarkers in advanced chronic heart failure:role of oral anticoagulants and successful heart transplantation［J］.Br JHaematol，2004，126(1):85-92.

［4］ Meyer T，Stanske B，Kochen MM，et al.Elevated serum levels of interleukin-10 and tumor necrosis factor α［corrected］are both associated w ith vital exhaustion in patients with cardiovascular risk factors［J］.Psychosomatics，2010，51(3):248-256.

［5］ Martos R，Baugh J，Ledwidge M，et al.Diastolic heart failure:evidence of increased myocardial collagen turnover linked to diastolic dysfunction［J］.Circulation，2007，115(7):888-951.

［6］ 宋吉法.ACEI、ARB聯合參松養心膠囊治療慢性心力衰竭42例療效觀察［J］.西部中醫藥，2012，25(7):63-64.

［7］ 鄭軍，劉金玲.中西醫結合治療氣虛血瘀型慢性充血性心力衰竭 37 例［J］.西部中醫藥，2011，24(12):62-64.

［8］ 王強，孟云輝，付達.通腑泄濁法治療腑實證慢性心力衰竭52 例臨床觀察［J］.河北中醫，2012，34(10):1451-1453.