四季感冒片中3味藥材超臨界CO2復方萃取物揮發性成分分析

喬越，于蓮，焦淑清（佳木斯大學藥學院/黑龍江省生物藥制劑重點實驗室，黑龍江佳木斯154007）

四季感冒片由桔梗、紫蘇葉、陳皮、荊芥等9味藥材組成，具清熱解表功能，該制劑的解表功能與處方中的紫蘇葉、陳皮、荊芥3味藥材含有的揮發性成分密切相關。在現行生產工藝以及文獻[1-2]報道的四季感冒片制備工藝中，是將紫蘇葉、陳皮、荊芥用水蒸氣蒸餾法（Water Steam Distillation，簡稱SD）提取揮發油至盡，然后將其用乙醇溶解后噴入壓片前的顆粒上。SD溫度高、時間長，致使揮發油的得率極低且有些成分被熱解破壞，從而影響制劑的療效。超臨界CO2萃取（Supercritical CO2Fluid Extraction，SFE-CO2）工藝以其提取溫度低、提取率高等優點而廣泛應用于多種中藥揮發油的提取，其對單味藥材和復方藥材的提取均有報道[3-5]。有文獻報道[6-9]，應用SFE-CO2分別單味提取紫蘇葉、陳皮、荊芥的揮發性成分，但采用該技術對3味藥材的復方萃取的研究未見報道。本文采用SFE-CO2技術對四季感冒片中紫蘇葉、陳皮、荊芥進行了復方提取研究，用氣相色譜-質譜（GC-MS）聯用技術分析了復方萃取物的揮發性成分，旨在探討SFE-CO2技術在提取四季感冒片中揮發性成分的可行性及其所得復方提取物與SD法提得的揮發油的成分差異。

1 材料

1.1 儀器

HA221-50-06型超臨界萃取裝置（南通華安超臨界萃取有限公司）；6890-5973N型GC-MS聯用儀（美國Agilent公司）；RE-SZA型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 試劑

乙醚、無水硫酸鈉等為國產分析純；CO2購于佳木斯市金鼎氣體有限責任公司（浩良河化肥廠，純度≥99.5%食品級）。

1.3 藥材

紫蘇葉（產地安徽，亳州市芍香藥業有限公司）；陳皮（產地四川，安國市永春藥材行）；荊芥（產地河北，金天慈濟大藥房），以上藥材均經佳木斯大學藥學院宗希明高級實驗師鑒定為真品。

2 方法與結果

2.1 萃取方法

SFE-CO2法操作流程如下：CO2氣瓶→冷卻系統→高壓泵→萃取釜→分離釜Ⅰ→分離釜Ⅱ→循環。

將紫蘇葉、陳皮、荊芥粉碎，按四季感冒片方中3味藥材比例 0.46∶0.31∶0.23，分別稱取紫蘇葉 69.0 g、陳皮 46.5 g、荊芥34.5 g，共150 g，投入1 L萃取釜中，在萃取溫度35℃，萃取壓力25 MPa，萃取時間2 h，分離器Ⅰ壓力12 MPa下進行萃取，分別從分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ出口收集萃取物，萃取率為2.21%。萃取率（%）＝萃取物質量/藥材質量×100%。同時，進行了SD法復方提取3味藥材中揮發油的對比試驗，萃取率為1.035%。

2.2 復方萃取物中揮發油的精制

用少量乙醚多次溶解SFE-CO2復方萃取物，溶解液轉移至離心管中，以半徑為5 cm、2 500 r/min離心30 min。取上清液轉移至梨形瓶中，減壓蒸餾，除去乙醚，得精制總揮發油，密封，置冰箱保存，備用。

對SD復方提取的揮發油進行無水硫酸鈉干燥、乙醚萃取、減壓除去乙醚等處理，最后得精制總揮發油，同上貯存。

2.3 復方萃取物中揮發油的GC-MS分析

（1）GC條件。色譜柱：DB-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；汽化室溫度：320℃；柱溫：初始溫度60℃，以10℃/min升至250 ℃，停留20 min。（2）MS條件：電子EI源；能量：70 eV；離子源溫度：280℃；掃描范圍（m/z）：30～500。分別取精制的SFE-CO2復方萃取物和SD復方提取的揮發油進行GC-MS檢測。利用NIST05a.L Database檢索，通過與標準譜圖比對、人工解析確認提取物的揮發性成分，按面積歸一化法確定各成分的相對含量。

采用GC-MS聯用技術得到的SFE-CO2復方萃取物和SD復方提取物的總離子流圖，詳見圖1、圖2；兩種萃取物中化學成分分析結果見表1、表2。

圖1 SFE-CO2復方萃取物的TIC圖Fig 1 TIC chromatogram of SFE-CO2 compound extraction

圖2 SD復方萃取物的TIC圖Fig 2 TIC chromatogram of SD compound extraction

表1 SFE-CO2復方萃取物中化學成分分析結果Tab 1 Results of chemical composition analysis of SFE-CO2 compound extraction

3 討論

與SD復方提取法相比，SFE-CO2復方萃取法萃取率（2.21%）高于SD復方提取法（1.035%），其揮發性成分提取率有了很大地提高。SD法復方提取的揮發油為淡黃色液體，具有流動性、香氣。但是SFE-CO2復方萃取物為黃色油膏狀，有較濃的香味且香氣全面。GC-MS分析結果表明，SFE-CO2復方萃取物共分離出21個峰，鑒定出16種化合物，占其揮發性成分總相對含量94.25%，其中以甜橙黃酮含量最高（36.56%），其次為亞油酸（19.52%）和2-乙醛基呋喃（8.60%）。SD復方提取物共分離出51個化合物，鑒定出32種化合物，占揮發性成分總相對含量90.10%，其中以D-檸檬烯含量最高（62.40%），其次為側柏酮（15.49%）。二者相同成分有5個，即D-檸檬烯、萜品烯、薄荷酮、胡薄荷酮和石竹烯。分子量＜160的成分在SD萃取物鑒定出的成分中占65.63%，而在SFE-CO2萃取物鑒定出的成分中只占29.41%?？梢?，SD法導致了部分成分熱分解為小分子，而SFE-CO2由于操作溫度接近室溫而相對多的保全了天然成分。

表2 SD復方萃取物中化學成分分析結果Tab 2 Results of chemical composition analysis of SD compound extraction

綜上所述，SFE-CO2用于四季感冒片中3味藥材復方萃取是可行的，但與SD法相比，其提取物的成分存在較大差異，值得進一步研究。

（致謝：感謝黑龍江大學分析測試中心協助完成GC-MS分析檢測工作）

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