朱氏盆炎湯對(duì)慢性盆腔炎大鼠IL-2、IL-6及TNF-α的影響

朱氏盆炎湯對(duì)慢性盆腔炎大鼠IL-2、IL-6及TNF-α的影響

左玲，張靜，胡國(guó)華*

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院，上海 200071)

摘要：目的探討朱氏盆炎湯對(duì)慢性盆腔炎(SPID)模型大鼠免疫方面的影響。方法采用化學(xué)燒傷造模法制備慢性盆腔炎大鼠模型，用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)各組大鼠血清的炎癥細(xì)胞因子水平，包括白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的濃度變化。結(jié)果朱氏盆炎湯中劑量即臨床常用量對(duì)于SPID模型大鼠治療作用顯著，能有效降低大鼠血清中炎癥細(xì)胞因子IL-2、IL-6、TNF-α含量。結(jié)論朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎作用機(jī)制與其調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能相關(guān)。

關(guān)鍵詞：慢性盆腔炎；朱氏盆炎湯; 白介素-2; 白介素-6

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2015.06.005

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：2095-6258(2015)06-1112-03

基金項(xiàng)目：上海市衛(wèi)計(jì)委科研項(xiàng)目“驗(yàn)方盆炎湯對(duì)慢性盆腔炎大鼠細(xì)胞因子及T細(xì)胞亞群的影響”(20134Y072 )；上海市衛(wèi)生三年行動(dòng)計(jì)劃海派基地建設(shè)項(xiàng)目“海派朱氏婦科流派傳承研究(痛證)”(ZYSNXD-CC-HPGC-JD-008)。

作者簡(jiǎn)介：左玲(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事海派朱氏婦科傳承研究。

收稿日期:(本欄責(zé)任編輯：張海洋2015-05-05)

*通信作者：胡國(guó)華，教授，主任醫(yī)師，博士研究生導(dǎo)師，電話(huà)-13817813957，電子信箱-0083@szy.sh.cn

Zhushi Penyan decoction on IL-2, IL-6 and TNF- a in rats with chronic pelvic inflammatory disease

ZUO Ling, ZHANG Jing, HU Guohua*

(Shanghai Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200071，China)

Abstract：ObjectiveThe research into the impact of immunization of Zhushi Penyan decoction to chronic pelvic inflammatory disease model of the rats. Methods Model of chronic pelvic inflammatory disease in rats by using chemical burn, Adsorption of inflammatory cytokines were measured in serum by ELISA, including IL-2 IL-6 and TNF-a concentration changes. ResultsZhushi Penyan decoction dose for the treatment of SPID rats significantly, Can effectively reduce the content of serum IL-2, IL-6, and TNF- a. ConclusionThe research results showed that Zhushi Penyan decoction for the treatment of chronic pelvic inflammatory disease mechanisms and its role in regulating the body immune function is related.

Keywords：chronic pelvic inflammatory disease; Zhushi Penyan Decoction; IL-2；IL-6

盆腔炎性疾病后遺癥(sequelae of pelvic inflammatory disease，PID后遺癥)即慢性盆腔炎[1],是婦科常見(jiàn)病、多發(fā)病之一，臨床發(fā)病率有明顯增高趨勢(shì)。其病情復(fù)雜、病程較長(zhǎng)，嚴(yán)重影響婦女的身體健康。朱氏盆炎湯是名老中醫(yī)朱南孫教授(系“朱氏婦科”第三代傳人)治療慢性盆腔炎的經(jīng)驗(yàn)方。本項(xiàng)目在我科長(zhǎng)期應(yīng)用朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎療效確切的基礎(chǔ)上，觀(guān)察朱氏盆炎湯對(duì)大鼠慢性盆腔炎模型的治療作用，并從細(xì)胞免疫的角度探討朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎的作用機(jī)制。報(bào)道如下。

1材料

1.1動(dòng)物清潔級(jí) SD雌性大鼠90只，體質(zhì)量 180～220 g。由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。將90只大鼠隨機(jī)分為模型組、空白組、婦科千金膠囊組、朱氏盆炎湯高、中、低劑量組，共6組，每組15只。1.2藥品與試劑治療組：朱氏盆炎湯，由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院制劑室協(xié)助監(jiān)制，配成高、中、低3種劑量，按人鼠體質(zhì)量比換算后給藥。對(duì)照組：婦科千金膠囊，用蒸餾水溶解，按人鼠體質(zhì)量比換算后，以0.22 g/kg劑量給藥。試劑盒為大鼠白介素-2、白介素-6、TNF- a定量酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒。苯酚膠漿劑的配制：液化苯酚5 mL、甘油4 mL(由江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司提供)，西黃著膠1 g(由九鼎化學(xué)公司提供)，加蒸餾水至20 mL，配成濃度為25%的苯酚膠漿。

2方法

2．1慢性盆腔炎大鼠模型的建立采用化學(xué)燒傷造模法[2-4]制備慢性盆腔炎大鼠模型。用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(0.3 mL/100g)，待麻醉生效后，用橡皮筋牽拉四肢固定大鼠于操作臺(tái)上，剃去腹毛，用絡(luò)合碘消毒皮膚。無(wú)菌條件下取大鼠下腹正中切口約 0.8～1 cm，開(kāi)腹后暴露并固定子宮，用4號(hào)針頭在子宮分叉處小心進(jìn)針，向卵巢方向緩慢注入25%苯酚膠漿0.08 mL，兩側(cè)子宮均注射，注射完畢后分層關(guān)閉腹腔，消毒術(shù)區(qū)。術(shù)后正常清潔飼養(yǎng)。于造模后第 7、14、30 天，每次各隨機(jī)抽取3 只大鼠解剖，觀(guān)察子宮腫脹、充血程度，有無(wú)宮腔積液，有無(wú)與周?chē)M織黏連。術(shù)后 30 d肉眼觀(guān)察大鼠子宮腫脹迂曲、充血，宮腔部分黏連、狹窄，內(nèi)有積液，盆腔充血，內(nèi)見(jiàn)廣泛黏連，且不易分離，顯微鏡下見(jiàn)子宮內(nèi)膜上皮及腺上皮細(xì)胞增生，淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，見(jiàn)少量中性粒細(xì)胞，符合盆腔炎性疾病后遺癥病理改變，提示大鼠慢性盆腔炎模型成功[5-9]。2．2給藥方法慢性盆腔炎造模成功后， 各治療組大鼠按人和動(dòng)物間體表面積折算給藥計(jì)量，其中盆炎湯煎成濃縮劑,按成人等效劑量的1/2、1、2倍分別給藥，盆炎湯低劑量組按照8.9 g/kg體質(zhì)量劑量灌胃，盆炎湯中劑量組按照17.8 g/kg體質(zhì)量劑量灌胃，盆炎湯高劑量組按照35.6 g/kg體質(zhì)量劑量灌胃。婦科千金膠囊組按照0. 22 g/kg體質(zhì)量劑量灌胃。模型組、空白組給予灌服等量蒸餾水,每日灌胃量為10 mL/kg，連續(xù)給藥14 d。2．3采血于給藥后第15天清晨處死大鼠，打開(kāi)腹腔，于大鼠主動(dòng)脈處采血，用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)大鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α水平。2．4肉眼觀(guān)察及病理改變?nèi)庋塾^(guān)察輸卵管形狀、色澤、粗細(xì)、彈性、有無(wú)積水、化膿及與周?chē)M織有無(wú)黏連。分離子宮周?chē)嘤嘀}組織，肉眼觀(guān)察子宮的形態(tài)改變。肉眼觀(guān)察完畢，精確切取輸卵管、子宮組織，置于10%的福爾馬林中固定，常規(guī)切片，HE染色，光鏡下觀(guān)察病理改變。2．5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用 SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)形式表示，統(tǒng)計(jì)方法采用單因素方差分析檢驗(yàn)，組間比較在方差齊時(shí)采用 LSD 法，方差不齊時(shí)采用 Dennett’s T3 法。

3結(jié)果

3．1肉眼觀(guān)察及病理變化肉眼觀(guān)察正常組:宮腔正常，無(wú)炎性滲出，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞規(guī)整，腺體結(jié)構(gòu)清晰，子宮壁各層分界清楚，各層血管無(wú)充血水腫，無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組:子宮壁組織結(jié)構(gòu)紊亂，各層分界不清，腺體明顯減少，子宮內(nèi)膜缺失，上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，輕微纖維組織增生，間質(zhì)充血、水腫。盆炎湯高劑量組:宮腔無(wú)炎性滲出，子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)基本接近正常組，內(nèi)膜上皮細(xì)胞形態(tài)基本恢復(fù)正常，固有層腺腔清晰可見(jiàn)，各層分界清楚，有少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)明顯充血、水腫。盆炎湯中劑量組:宮腔無(wú)炎性滲出，子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)趨向于正常，內(nèi)膜上皮細(xì)胞形態(tài)部分欠清晰，腺體結(jié)構(gòu)欠清晰，各層分界清楚，可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，充血、水腫明顯減輕。盆炎湯低劑量組:宮腔無(wú)炎性滲出，子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)欠清晰，腺體增粗，結(jié)構(gòu)模糊，子宮壁各層分界尚清楚，可見(jiàn)少量漿細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，充血、水腫減輕。婦科千金膠囊組:宮腔無(wú)炎性滲出，子宮內(nèi)膜少許缺失，上皮細(xì)胞排列尚規(guī)整，腺體減少，子宮壁各層分界欠清楚，可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，充血、水腫減輕。3．2各組大鼠血清中IL-2 、IL-6、TNF-α濃度檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　各組炎性細(xì)胞因子比較( ± s)　ng/L

組 別nIL-2IL-6TNF-α千金膠囊組 988.65±13.50#92.56±8.22# 45.44±13.25# 盆炎湯高劑量組994.09±25.50#161.83±24.52#△115.26±16.65#△盆炎湯中劑量組1081.57±13.00#69.82±13.02#△35.83±7.84# 盆炎湯低劑量組9148.72±27.58 205.42±23.68#△139.63±38.42#△模型組 10157.71±41.86 225.17±28.82 166.20±21.56 空白組 1164.75±15.60 51.67±11.97 20.73±2.93

注：與模型組比較，#P<0.05；與千金膠囊組比較，△P<0.05

4討論

我國(guó)古代醫(yī)籍中無(wú)慢性盆腔炎病名， 歷代醫(yī)家對(duì)本病的論述散在于“少腹痛”“帶下病”“癥瘕”“不孕”等疾病的論述中[10]。結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病理學(xué)變化的知識(shí)， 總結(jié)出本病的病因病機(jī)為“熱”“毒”“濕”“瘀”“寒”， 病理性質(zhì)屬本虛標(biāo)實(shí)。本虛以腎虛， 奇經(jīng)八脈虧損為主[11-12]。正是由于慢性盆腔炎性疾病后遺癥發(fā)病率高及遷延難愈的特點(diǎn)，使中醫(yī)藥治療慢性盆腔炎臨床優(yōu)勢(shì)凸現(xiàn)，內(nèi)治和外治相結(jié)合，體現(xiàn)了中醫(yī)學(xué)扶正祛邪、整體觀(guān)的特色。朱氏盆炎湯是全國(guó)名老中醫(yī)朱南孫教授(系“朱氏婦科”第三代傳人)治療慢性盆腔炎的經(jīng)驗(yàn)方。朱南孫教授認(rèn)為，慢性盆腔炎多與濕熱和血瘀有關(guān)。二者導(dǎo)致沖任受損，氣滯血瘀，損傷肝腎，故以益腎清肝同治[13]。我科長(zhǎng)期應(yīng)用盆炎湯治療慢性盆腔炎療效確切。朱氏盆炎湯具有清熱化瘀、疏理沖任的功效。君藥紅藤、紫花地丁、蒲公英清熱解毒、消腫、化瘀、散結(jié)。臣藥延胡索舒肝、理氣、止痛、解瘀，劉寄奴破血、通經(jīng)、止痛。佐使藥續(xù)斷、桑寄生補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨[14]?，F(xiàn)代藥理研究報(bào)道，蒲公英對(duì)葡萄球菌、鏈球菌有很強(qiáng)滅殺和抑制作用；延胡索可促使巨噬細(xì)胞數(shù)量增加及吞噬功能增加，增加細(xì)胞免疫和體液免疫；桑寄生具有提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和抗炎作用。全方攻補(bǔ)兼施，用藥精簡(jiǎn)，藥物性味平和。

白介素-2(IL-2)具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、增加機(jī)體抗感染作用，其高低從一個(gè)側(cè)面反映了宿主淋巴細(xì)胞活化程度，以及宿主免疫系統(tǒng)清除自身衰老變性細(xì)胞、自體變性和損傷細(xì)胞方面的能力。IL-6在組織炎性反應(yīng)中起著炎癥的誘導(dǎo)和傳遞，以及隨后的組織修復(fù)和愈合期的重建[15]。TNF-α在炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)中起重要作用，過(guò)度反應(yīng)產(chǎn)生過(guò)量時(shí)，導(dǎo)致劇烈的免疫反應(yīng)，呈現(xiàn)毒性作用，對(duì)機(jī)體造成損害[16-17]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，朱氏盆炎湯高劑量組、中劑量組與千金膠囊組對(duì)血清IL-2改善相近，其中盆炎湯中劑量組降低血清IL-2含量最大。血清IL-6變化比較，各組與模型組比較均有意義，組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明朱氏盆炎湯與婦科千金膠囊均能降低SPID模型大鼠血清IL-6水平，其中朱氏盆炎湯中劑量組降低血清IL-6含量最大。朱氏盆炎湯及婦科千金膠囊均可減輕血清炎癥細(xì)胞因子IL-2、IL-6、TNF-α含量。朱氏盆炎湯中劑量即臨床常用量對(duì)于SPID模型大鼠治療作用顯著，其治療后血清IL-2、TNF-α水平和空白組結(jié)果相近，說(shuō)明該劑量對(duì)SPID模型大鼠血清IL-2、TNF-α改善顯著。為朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎提供了確切的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)也證實(shí)了朱氏盆炎湯治療慢性盆腔炎作用機(jī)制與其調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能相關(guān)。

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