清肺止喘合劑工藝研究

袁麗娟

（連云港中醫藥高等職業技術學校 江蘇連云港 222007）

清肺止喘合劑由魚腥草、連翹、板藍根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗七味藥組方通過水提取工藝制成合劑，具有清熱解毒、化痰止咳的功效，本品對肺熱所致的支氣管炎、肺炎見咳嗽痰多等癥,具有較好的臨床療效，臨床多應用與兒童咳嗽。本實驗在原方劑基礎上，將影響水提取工藝的主要因素加水量、浸泡時間、煎煮次數及時間為考察因素，方中黃芩為唇形科植物黃芩的干燥根, 對金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、溶血性鏈球菌等多種細菌有抗菌作用[1], 其有效成分為黃芩苷。以方中主要活性成分黃芩苷含量及得膏率為考察指標，按正交試驗設計表設計L9(34)試驗優選最佳工藝。

一、儀器、試劑與試藥

1.儀器：美國Waters 1525 高效液相色譜儀；UV 檢測 器（HanbonLichrospher C18 250×4.5mm 5μm）； 電子天平（SECURA5102-1CN）；KQ2200E 型醫用超聲清洗器(昆山舒美超聲儀器有限公司)；HH-2 數顯恒溫水浴鍋 (北京中西遠大科技有限公司)；SZ-93 自動雙重純水蒸餾器。

2.實驗用藥材和對照品：實驗用黃芩苷對照品采購于中國生物制品檢定所(批號：110715-200815)魚腥草、連翹、板藍根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗由連云港三禾興藥店采購，經我校中藥資源教研室鑒定符合2010版藥典標準。

3.實驗用試劑：實驗用試劑乙腈、磷酸、乙醇等均購于國藥集團化學試劑有限公司，純化水（自制）。

二、方法與結果

1.正交試驗優選最佳提取工藝

將魚腥草、連翹、板藍根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗七味藥材按處方比例稱量混合好，通過實驗發現影響提取的主要因素包括四方面：水量、浸泡時間、提取時間以及提取次數。實驗設計以加水量、浸泡時間、提取次數以及提取時間四個因素為考察因素，每因素各選三個水平，見表1，進行L9(34)正交試驗。

本次實驗以黃芩苷為主要考察指標，將9 組實驗樣品分別測定黃芩苷的含量，所得結果進行方差分析。試驗方法及結果如下。

表1 提取因素水平表

2.樣品制備方法

按處方量稱取魚腥草、連翹、板藍根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗七位藥材9 份，將實驗所得的正交樣品液混合過濾后進行濃縮，9 份濃縮液定容到1000ml 容量瓶中，即得樣品溶液，備用進行黃芩苷、干浸膏率測定。試驗結果，見表2。方差分析結果，見表3.

3. 對魚腥草、連翹、板藍根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗提取液中的黃芩苷進行含量測定

供試品溶液參照2010 版中國藥典黃芩項下含量測定[2]。

（1）黃芩苷的含量測定

①色譜條件

色 譜 柱 為HanbonLichrospher C18 250×4.5mm 5μm； 柱 溫：25 ℃， 以 甲 醇- 水- 磷 酸 水 溶 液（43 ∶57:0.2）； 流 速：1.0mL/ 分 鐘； 檢 測 波 長280nm；理論塔板數不低于4000[3]。

②對照品溶液的制備

精密稱定黃芩苷對照品6.0200mg 置于10 mL 棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，再精密量取1 mL 置于10 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得黃芩苷為0.0602g·L-1的對照品溶液。

③供試品溶液的制備

精密量取清肺止喘合劑提取液25 mL 置于100mL 容量瓶中，加乙醇至含醇量為70%，超聲處理 20 min，放置至室溫，然后加70%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置，過濾，棄去初濾液，精密量取續濾液2 mL 置10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度。用0.45 μm 膜過濾，作為供試品溶液[4]。

④線性關系考察 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液2μL、4μL、6μL、8μL、12μL、16μL、20μL， 注入液相色譜儀，以上述色譜條件進行測定。以峰面積( Y) 與對照品體積( X)進行線性回歸，得黃芩苷的回歸方程為Y = 2745.4X + 15.32( R2= 0.9995)，線性范圍為0.1304 ～1.2060μg; 結果表明，黃芩苷在相應范圍內線性關系良好。

⑤樣品測定 分別精密吸取對照品溶液、1 ～9 號供試品溶液，在上述色譜條件下一次進樣10μL，記錄峰面積，含量測定結果。

4.干膏質量的計算

精密量取供試品溶液50 mL 于已干燥至恒質量的蒸發皿中，水浴蒸干，再于105 ℃烘箱中干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速稱質量，記錄干浸膏的質量，計算干膏率。

三、實驗結果分析

表2 L9(34)正交試驗結果

表3 水提工藝正交試驗方差分析

注：F0.05（2，2）=19 , F0.01（2，2）=99

綜合黃芩苷，方差分析結果，兼顧生產實際，確定最佳水提工藝條件為A2B2C3D1，即藥材無需浸泡，每次加10 倍量的水回流提取3 次，每次1.5h。

四、 討論

肺熱咳嗽或由外邪襲肺，蘊郁化熱或飲食不節，蘊積化熱，導致肺內郁熱，煉液為痰，痰盛生熱，肺失宣肅，故而咳嗽頻作，痰難咯出。清肺止喘合劑對肺熱咳嗽效果極佳，作為醫院制劑在臨床已經使用20 年，在臨床應用中取得了滿意療效。清肺止喘合劑應用復方制劑達到標本兼治的作用。本方采用正交試驗法，優選清肺止喘合劑制水提工藝，以黃芩苷含量為指標，分別用HPLC 法進行含量測定，結果進行方差分析，最終優選出A2B2C3D1的制備工藝。

[1] 遲戈夫,丁麗,常麗敏.目前國內黃芩藥理研究進展[J].內蒙古民族大學學報(自然科學版) , 2005,20(2):207.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：化學工業出版社，2010:283,97.

[3] 戴航,侯小濤,程世賢.正交試驗優選復方百部止咳顆粒中黃芩苷的提取工藝[J]世界中西醫結合雜志,2008,3(3):139.

[4] 趙明偉，孫耀志，高松等. 黃芩湯提取工藝研究[J]中醫學報,2013,12(28):187.