結(jié)直腸癌患者血清miR-31的表達(dá)變化及意義

胡煊，熊兵紅，馬利(眉山市人民醫(yī)院，四川眉山6000;昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院; 四川省綿陽市第三人民醫(yī)院)

結(jié)直腸癌患者血清miR-31的表達(dá)變化及意義

胡煊1，熊兵紅2，馬利3
(1眉山市人民醫(yī)院，四川眉山620010;2昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院; 3四川省綿陽市第三人民醫(yī)院)

摘要:目的探討結(jié)直腸癌(CRC)患者血清微小RNA-31(miR-31)的表達(dá)變化及意義。方法利用實時定量RT-PCR檢測60例CRC患者血清中miR-31的表達(dá)量，并以20例健康體檢者作為對照組，通過受試者工作特征曲線(ROC曲線)下面積計算miR-31診斷CRC的敏感度和特異度。結(jié)果CRC患者血清miR-31顯著高于對照組(P ＜0.05)。血清中miR-31的相對表達(dá)量與CRC的TNM分期、浸潤深度、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。血清miR-31診斷CRC的靈敏度和特異度分別為75.3%和60.2%，ROC曲線下面積為0.75。結(jié)論CRC患者血清miR-31升高，后者與腫瘤進(jìn)展有關(guān);miR-31水平檢測對診斷CRC具有良好的特異度和敏感度。

關(guān)鍵詞:結(jié)直腸腫瘤;miR-31;腫瘤標(biāo)志物

結(jié)直腸癌(CRC)是世界上常見的惡性腫瘤，是腫瘤死亡的第二大原因［1］。其發(fā)生發(fā)展機制未完全闡明，因此，發(fā)現(xiàn)CRC有關(guān)新的診斷、發(fā)展、轉(zhuǎn)移標(biāo)志物非常重要。微小RNAs已被證實和腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其參與腫瘤的生物學(xué)過程，如細(xì)胞生長、增殖、發(fā)育、凋亡、分化、侵襲和轉(zhuǎn)移［2，3］。研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA-31(miR-31)在CRC中表達(dá)明顯升高，充當(dāng)致癌因子發(fā)揮作用［4～6］。本研究檢測CRC患者外周血清中miR-31水平，探討其與腫瘤發(fā)展的關(guān)系及其診斷CRC的價值。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集2010年10月～2013年10月住院治療的60例CRC患者(CRC組)外周血標(biāo)本，均經(jīng)病理學(xué)證實。患者入院前均未進(jìn)行過化、放療。男46例、女14例，年齡30～78歲。CRC的TNM分期按照國際抗癌聯(lián)盟和美國癌癥聯(lián)合會2010年版進(jìn)行分期。患者均行CRC根治手術(shù)。另選擇正常健康體檢者20例作為對照組，男10例、女10例，年齡20～70歲。

1.2血清miR-31的檢測采用實時定量RT-PCR法。患者均在手術(shù)前抽取靜脈血5mL，EDTA抗凝。低溫高速離心機離心，用1.5mL無RNase的離心管分裝血清和血細(xì)胞，隨即放入－80℃冰箱保存?zhèn)溆谩irVana PARIS試劑盒(Ambion，USA)說明書抽提總RNA，用紫外分光光度儀檢測RNA溶液D260/D280，計算RNA濃度和純度，D260/D280在1.8～

2.1者用于進(jìn)一步實驗檢測RNA的完整性。使用一步法逆轉(zhuǎn)錄miRNA，miRNA反轉(zhuǎn)錄引物由美國ABI公司合成，U6作為內(nèi)參。反應(yīng)條件: 42℃、60min，70℃、5min，4℃儲存，qRT-PCR反應(yīng)體系，PCR擴增反應(yīng)條件: 95℃、10min，95℃、15 s，60℃、1min(50個循環(huán))。實驗結(jié)果采用定量PCR中的相對定量法進(jìn)行分析，以2－ΔΔCT表示腫瘤組織miR-31表達(dá)量相對于對照組表達(dá)量的變化倍數(shù)，其中ΔCT =(CTmiR-31－CTU6)腫瘤－(CTmiR-31－CTU6)

正常對照。

2　結(jié)果

2.1兩組血清miR-31相對表達(dá)量比較CRC組患者血清中miR-31相對表達(dá)量(2－ΔΔCT)為9.50± 7.45，明顯高于對照組(2.45±2.65)(P＜0.01)。

2.2 CRC患者血清中miR-31相對表達(dá)量與臨床病理因素的關(guān)系見表1。

2.3血清miR-31在CRC中的診斷價值曲線下面積為0.75(95%CI: 0.65～0.87)，臨界值取2.34時，其靈敏度和特異度分別為75.3%和60.2%。見圖1。

3　討論

表1　CRC患者血清中miR-31相對表達(dá)量與臨床病理因素的關(guān)系

圖1　miR-圖31檢測診斷CRC的ROC曲線

miRNAs是一類小的含有19～24個核苷酸的非編碼RNA，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。最近研究已證實，miRNAs能在血清、血漿中穩(wěn)定地檢測到，循環(huán)miRNAs可作為新的潛在腫瘤標(biāo)志物［7，8］。許多研究表明，miR-31作為致癌因子，可調(diào)控腫瘤的生長、凋亡、轉(zhuǎn)移和化療耐藥［9，10］。miR-31在CRC組織和細(xì)胞中明顯升高，和腫瘤的發(fā)生發(fā)展預(yù)后相關(guān)［11，12］。

本研究發(fā)現(xiàn)，CRC外周血中miR-31水平明顯高于對照組。隨著腫瘤的發(fā)展，腫瘤TNM分期增加，外周血中miR-31的表達(dá)量也呈現(xiàn)上升趨勢;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)增加，外周血中miR-31的表達(dá)量也隨之增加，提示miR-31水平升高與CRC腫瘤的進(jìn)展有關(guān)。血清中miR-31診斷CRC的靈敏度和特異度分別為75.3%和60.2%，ROC曲線下面積為0.75，對于CRC的診斷準(zhǔn)確性良好:提示血清miR-31可作為診斷CRC的一個新的標(biāo)志物，并且具有較好的敏感性和特異性。

綜上所述，血清miR-31水平升高與CRC的進(jìn)展相關(guān)。血清miR-31是一個較好的診斷CRC的非侵入性腫瘤標(biāo)志物，具有較好的敏感度和特異度。但需要更多大樣本多中心前瞻性試驗來證實其臨床應(yīng)用價值。

參考文獻(xiàn):

［1］Siegel R，Naishadhamd，Jemal A.Cancer statistics，2013［J］.CA Cancer J Clin，2013，63(1): 11-30.

［2］Ambros V.The functions of animalmicroRNAs［J］.Nature，2004，431(7006): 350-355.

［3］Chen CZ，Li L，Lodish HF，et al.MicroRNAsmodulate hematopoietic lineagedifferentiation［J］.Science，2004，303(5654): 83-86.

［4］Wang S，Hu J，Zhangd，et al.Prognostic role ofmicroRNA-31 in various cancers: ameta-analysis［J］.Tumour Biol，2014，35(11): 11639-11645.

［5］Chen T，Yao LQ，Shi Q，et al.MicroRNA-31 contributes to colorectal cancerdevelopment by targeting factor inhibiting HIF-1α(FIH-1)［J］.Cancer Biol Ther，2014，15(5): 516-523.

［6］Xu RS，Wu XD，Zhang SQ，et al.The tumor suppressor gene RhoBTB1 is a novel target ofmiR-31 in human colon cancer［J］.Int J Oncol，2013，42(2): 676-682.

［7］Chen X，Ba Y，Ma L，et al.Characterization ofmicroRNAs in serum: a novel class of biomarkers fordiagnosis of cancer and otherdiseases［J］.Cell Res，2008，18(10): 997-1006.

［8］Mitchell PS，Parkin RK，Kroh EM，et al.CirculatingmicroRNAs as stable blood-basedmarkers for cancerdetection［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2008，105(30): 10513-10518.

［9］Mitamura T，Watari H，Wang L，et al.Downregulation ofmiRNA-31 induces taxane resistance in ovarian cancer cells through increase of receptor tyrosine kinasemET［J］.Oncogenesis，2013，(2): e40.

［10］Krner C，Keklikoglou I，Bender C，et al.MicroRNA-31 sensitizes human breast cells to apoptosis bydirect targeting of protein kinase C epsilon(PKCepsilon)［J］.J Biol Chem，2013，288(12): 8750-8761.

［11］Wang CJ，Zhou ZG，Wang L，et al.Clinicopathological significance ofmicroRNA-31，-143 and -145 expression in colorectal cancer［J］.Dismarkers，2009，26(1): 27-34.

［12］Slaby O，Svobodam，F(xiàn)abian P，et al.Altered expression ofmiR-21，miR-31，miR-143 andmiR-145 is related to clinicopathologic features of colorectal cancer［J］.Oncology，2007，72(5-6): 397-402.

收稿日期:( 2015-06-22)

通信作者:熊兵紅

文章編號:1002-266X(2015)37-0060-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號:R735.3

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.37.023