Sam68蛋白對宮頸癌細胞增殖的影響研究

汪 蘭

廣東藥學院基礎學院，廣東廣州 510006

子宮頸癌屬于常見的婦科疾病之一，隨著人們生活水平、生活質量的提高，宮頸癌發病率呈逐年上升的趨勢發展，據有關研究表明，宮頸癌占女性生殖器官癌瘤中的第一位[1]。宮頸癌在世界各國均有大量的患病人群，發病率與死亡率極高[2]，根據地區的不同，觀察發現子宮頸癌患病人群的發展趨勢，可將其總結為鄉村高于城市，山區高于平原。一旦患有子宮頸癌，將給女性患者的身體健康帶來極大的威脅[3]，依據此類事實，本文將我院一年來收治的宮頸癌患者共56 例和宮頸良性腫瘤患者44例進行研究，通過檢測子宮頸癌中Sam68 蛋白、核增殖抗原、皮鈣黏附蛋白等項目的表達，對Sam68蛋白在宮頸癌細胞增殖的影響進行了深入的研究和探討，相關報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本組選擇我院于2012 年12 月～2013 年12月收治的宮頸癌患者共56 例和宮頸良性腫瘤患者44 例，前者作為觀察組，后者作為對照組，同時每位患者均經臨床資料、病理學及實驗室檢查證實存在宮頸組織病變，對每一名患者腫瘤組織中Sam68 蛋白、核增殖抗原（Ki67）、皮鈣粘附蛋白（E-cadherin）指數變化進行分析和比較。100例患者均為女性，年齡23 ～78 歲，平均年齡（53.2±6.7）歲，兩組患者病情、年齡、病程比較均無明顯差異（P ＞0.05），可以進行對比分析。

1.2 方法

本次研究使用的試劑為Sam68 蛋白單克隆抗體（由上海瑞奇生物科技有限公司生產制造）[4]，免疫組化 Power Vision 二步法試劑盒PV-6002（由北京欣興唐生物科技有限公司生產制造）， DAB 顯色試劑盒（由北京康為世紀生產制造）[5]；嚴格按照試劑盒及Sam68 蛋白說明書進行操作，Sam68 蛋白、E-cadherin采用免疫組化PV 二步法染色，Sam68 蛋白抗濃度為1 ∶10[7]，E-cadherin 抗濃度為1 ∶200[8]。

1.3 診斷結果

在實驗室顯微鏡下觀察Sam68 蛋白的性質，若其胞核、胞漿染色呈棕黃色則為陽性，根據免疫組化半定量計分法對Sam68 蛋白陽性染色程度進行計分，無著色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分[9]；根據陽性細胞比例進行計分，陽性細胞比例≤5%計0 分，陽性細胞比例在5%～10%間計1 分，陽性細胞比例在11%～50%間計2 分，陽性細胞比例在51%～80%間計3 分，陽性細胞比例大于80%計4 分[10]；根據Sam68 蛋白染色與陽性細胞比例的乘積判斷其陽性結果，0 分即為-，1 ～4分即為+，5 ～12 分即為++～+++。

在實驗室顯微鏡下觀察E-cadherin 的性質，若其胞核、胞漿染色呈棕黃色則為陽性，根據免疫組化半定量計分法對E-cadherin 陽性染色程度進行計分，計分情況與Sam68 蛋白陽性染色計分方法相同；根據E-cadherin 陽性細胞占細胞總數的平均值判斷其陽性率，小于10%即為-，10%～50%即為+，大于50%即為++～+++。ki67 檢測方法與E-cadherin 基本相同。

1.4 統計學方法

應用SPSS16.0 統計學軟件對上述治療進行數據的分析，計量資料采用（）表示，進行t 檢驗，計數資料進行x2檢驗，檢驗水準為α=0.05，相關性分析采用 Spearman 秩相關分析法[11]，P ＜0.05 時為差異具有統計學意義。

2 結果

本組選取的宮頸癌患者共56 例和宮頸良性腫瘤患者44 例，對兩組患者腫瘤組織中Sam68 蛋白、Ki67、E-cadherin 指數變化情況進行分析和比較后，對于所取得的成果比較滿意，Sam68 蛋白表達與TNM 分期、腫瘤大小有關，差異有顯著統計學意義（P ＜0.05）；Sam68 蛋白表達與患者年齡、分化程度無關，差異無明顯統計學意義（P ＞0.05）；Sam68 的表達水平臨床病理因素的關系，如表1。Sam 68 蛋白在乳腺癌和乳腺良性腫瘤中表達，差異有顯著統計學意義（P ＜0.05）。見圖1。

圖1 乳腺癌組織中 Sam68 蛋白表達情況（×400）。Sam68 蛋白在乳腺癌組織中，a 為強陽性表達；b 為度陽性表達；c 為弱陽性表達；d 為陰性表達

表1 Sam68的表達水平臨床病理因素的關系

本次研究，兩組患者Sam68 蛋白 E-cadherin 陽性例數為82（82%），基于Spearman 秩相關分析法的基礎上，觀察到Sam68 蛋白與E-cadherin 表達呈負相關的關系， r=-0.247，P=0.021。兩組患者Sam68 蛋白與E-cadherin 的表達關系綜合比較，見表2。

表2 兩組患者Sam68蛋白與E-cadherin的表達關系綜合比較

采用Spearman 秩相關分析法，觀察到Sam68蛋白與Ki67 表達呈正相關的關系，r=-0.236，P=0.027。兩組患者Sam68 蛋白與ki67 的表達關系綜合比較見表3。

表3 兩組患者Sam 68 蛋白與Ki67 表達關系綜合比較

3 討論

子宮頸癌是一種常見的婦科疾病，由于該病具有較高的發病率與致死率，嚴重威脅著女性的生命健康，根據相關研究數據顯示，國內宮頸癌死亡率占總癌癥死亡率的第四位[12]。近年來，子宮頸癌發病率越來越高，世界各地區均存在著許多子宮頸癌患者，該病好發于40 ～50 歲的女性，在臨床上子宮頸癌的治療方法比較單一[13]，主要依賴于手術治療，患者處于早期子宮頸癌發展階段，通常采用子宮切除術進行治療。若發展到子宮頸癌晚期的患者，一般都會采用根治性治療方式[14]，并聯合外照射及近距離照射，此種治療方法雖然能夠在一定程度上控制病情，提高患者生存率，但是易于出現局部復發的情況[15]。

隨著科技與醫學水平的提高，治療子宮頸癌患者由20 世紀90 年代的化療聯合標準放療方式，直至變為今天的聯合放化療方式[16]，能夠最大限度的提高患者生存率，降低復發率與病死率，延長患者生存周期。早期子宮頸癌患者若采用單純放療就可得到良好的治療效果，甚至治愈，但是采用聯合放化療，則治療效果相對不足，并且存在一定的風險性，易于產生一系列毒副后果。聯合放化療適用于治療子宮頸癌晚期患者，雖然會出現局部復發率，但治療效果相對理想[17]。

在子宮頸癌的檢測中Sam68 蛋白具有較高的診斷意義，子宮頸癌患者體內Sam68 蛋白指數相對較高，尤其表現在對宮頸癌組織的表達[18]上，本次研究對100 例患者進行治療后，子宮頸癌患者Sam68 蛋白表達水平明顯高于宮頸良性腫瘤患者，并且與E-cadherin 表達呈正相關的關系，與Ki67 表達呈負相關的關系，由此可證明，Sam68 蛋白對宮頸癌細胞增殖有著明顯的作用關系。同時觀察Sam68 的表達水平臨床病理因素的關系，發現Sam68 蛋白表達與TNM 分期、腫瘤大小有關，與患者年齡、分化程度無關。

本次研究結果與大量實驗數據結果基本相似，這就說明，Sam68 蛋白在正常宮頸組織中的表達明顯低于宮頸癌組織，Sam68 的表達及其胞質中的定位與宮頸癌組織轉移有著密切的關聯，因此，在臨床上Sam68 蛋白能夠作為檢測早期宮頸癌總生存時間、無病生存時間的重要指標，并且具有一定的臨床預測價值。與此同時，子宮頸癌患者下調Sam68 的表達水平具有抑制 Akt/GSK-3β/Snail 向上皮間質轉化[19]，從而抑制宮頸癌組織及細胞的浸潤和轉移，是一種有效的預測宮頸癌組織淋巴結轉移的獨立預測因子。

根據大量研究表明，Sam68 蛋白有著控制細胞惡化、抑制腫瘤組織發展、促進惡性細胞凋亡的特性，隨著研究的逐漸深入，發現Sam68 的表達水平與宮頸癌病理因素、預后有著密切的聯系，從E-cadherin、Ki67 等癌細胞增殖抗原中可發現，Sam68 蛋白確實具備促進宮頸癌細胞增殖的作用。

在早期宮頸腫瘤轉移的過程中，上皮細胞間質化出現的首要特性是E-cad 蛋白表達水平消除或不明顯，Sam68 蛋白能夠根據不同途徑調控其下游分子GSK-3β、Snail 轉錄因子[20]，從而對E-cad herin 蛋白表達水平造成影響。本次研究，Sam68 蛋白與E-cadherin 表達呈負相關的關系，r=-0.247；P=0.021，與Ki67 表達呈正相關的關系，r=-0.236；P=0.027，這就說明Sam68 蛋白對E-cadherin、Ki67有著不同的影響。

綜上所述，研究既往的有關實驗數據，我們會發現有許多臨床指標與子宮頸癌的預后息息相關，例如分子功能影像學指標、離體標本相關指標、宮頸癌腫瘤內環境指標、與宮頸癌細胞生物學特性相關指標等，但由于許多指標的檢測過程太過復雜，存在一定的局限性，而在宮頸癌組織中Sam68 蛋白的表達明顯高于正常宮頸組織，因此，Sam68 蛋白對宮頸癌細胞增殖具有促進作用。

[1] 王力揚.Sam68 對結直腸癌細胞增殖、侵襲和遷移能力的影響[D].廣州：南方醫科大學，2014：39-45.

[2] 元敏，夏婷，胡小戊等.乳腺癌組織Sam68 蛋白與臨床預后的相關性研究[J].實用醫學雜志，2013（8）：1293-1295.

[3] 吳喆.評價宮頸癌預后生物學指標的最新進展[J].岳陽職業技術學院學報，2013（5）：91-95.

[4] 章樂虹，元敏，曹騰飛.乳腺癌組織Sam68 表達與腋淋巴結狀態的相關性研究[J].中國現代醫學雜志，2013（31）：47-51.

[5] 王遲鵑，許華，張海瑞.沉默Sam68 基因對Jurkat 細胞增殖影響的研究[J].中國實驗血液學雜志，2014（4）：894-898.

[6] Shaker，Mohammed，Yokoyama.Aberrant Expression of Disintegrin-Metalloprotease Proteins in the Formation and Progression of Uterine Cervical Cancer[J].EN，2011，22（11）：782-783.

[7] 張嫻.宮頸癌組織中RASSF2A 基因啟動子甲基化狀態及其臨床意義[D].濟南：山東大學，2014：46-52.

[8] 張曉麗.LKB1 對宮頸癌細胞轉錄譜的影響及抑癌機制研究與CIP2A 調控宮頸腺癌多藥耐藥的研究[D].濟南：山東大學，2014：53-57.

[9] 李瑛花.siRNA 沉默HPV16 E6 對宮頸癌細胞p63 蛋白的影響[D].長沙：中南大學，2012：40-42.

[10] Huizhen Zhong，Xia Liu，Meng Lou.Gemcitabine and carboplatin demonstrate synergistic cytotoxicity in cervical cancer cells by inhibiting DNA synthesis and increasing cell apoptosis [J].OncoTargets and Therapy，2013，15（3）：34-37.

[11] 董倩.葉酸、DNMT1 對宮頸癌細胞生長的影響及與HPV16 的關系[D].太原：山西醫科大學，2012：32-34.

[12] 王妍，何慧儀.宮頸癌相關基因的研究進展[J].中華腫瘤防治雜志，2011（16）：1316-1320.

[13] 王艷，李鷗，白娣斯.白介素-10 基因的表觀遺傳與宮頸癌研究進展[J].中國婦幼保健，2012（3）：462-464.

[14] Nonkululeko N.Mthembu，Lesetja Raymond Motadi.Apoptotic potential role of Agave palmeri and Tulbaghia violacea extracts in cervical cancer cells [J].Molecular Biology Reports，2014，21（4）：417-419.

[15] Chan Kyo Kim，Sung Yoon Park，Seung Jae Huh.Blood oxygenation level-dependent MR imaging as a predictor of therapeutic response to concurrent chemoradiotherapy in cervical cancer： a preliminary experience[J].European Radiology，2014，18（9）：245-247.

[16] Li Lianqin，Zhang Yong-Gang，Chen Chun-Ling.Antiapoptotic role of peroxiredoxin III in cervical cancer cells.[J].FEBS open bio，2013，28（3）：5-7.

[17] Li Xiaolei，Wu Zhiqiang，Han Weidong.Characterization of Adult α- and β-Globin Elevated by Hydrogen Peroxide in Cervical Cancer Cells That Play A Cytoprotective Role Against Oxidative Insults.[J].PL o S One，2013，16（3）：79-81.

[18] D.Feng，Z.Cao，C.Ling.Combination of Valproic Acid and ATRA Restores RARβ2 Expression and Induces Differentiation in Cervical Cancer through the PI3K/Akt Pathway[J].Current Molecular Medicine，2012，10（5）：121-123.

[19] A.Bruning，M.Vogel，A.Burges.Bortezomib Targets the Caspase-Like Proteasome Activity in Cervical Cancer Cells，Triggering Apoptosis That Can be Enhanced by Nelfinavir[J].Current Cancer Drug Targets，2011，11（7）：114-117.

[20] Haitao Bai，Shengfang Ge，Jian Lu.Hypoxia inducible factor‐1α‐mediated activation of survivin in cervical cancer cells[J].Journal of Obstetrics and Gynaecology Research，2012，28（9）：390-392.