原兒茶醛對大鼠慢性非細菌性前列腺炎的治療作用

紀必磊 劉小麗 張 晶

深圳市第三人民醫(yī)院急診科，廣東深圳 518114

泌尿科和男科中前列腺炎是臨床較為常見疾病，且大部分前列腺炎門診患者中，均為慢性非細菌性前列腺炎[1]，在全世界男性中的患病率為9%～14%[2]。慢性非細菌性前列腺炎主要臨床表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿不盡、排尿困難等，嚴重影響患者生活質(zhì)量及家庭負擔。目前，該病在治療臨床上采用了抗生素、α1-受體阻滯劑、非甾體抗炎藥等藥物[3]，但臨床療效不佳，且副作用大，因此現(xiàn)臨床研究熱點為尋找有效防治慢性非細菌性前列腺炎藥物。原兒茶醛是丹參水溶性成分主要產(chǎn)物之一，研究表明[4]其具有改善微循環(huán)，抗炎、抗氧化、抑制細胞凋亡等廣泛活性，然而動物實驗研究表明原兒茶醛在體內(nèi)無蓄積作用，并且毒性低，臨床應用安全[5]。而近年來大量研究表明炎癥、微循環(huán)障礙及氧化應激等參與了慢性非細菌性前列腺炎的發(fā)生發(fā)展[6-7]。綜上提示原兒茶醛可能對慢性非細菌性前列腺炎具有較好的治療作用。目前原兒茶醛對慢性非細菌性前列腺炎的研究尚未見報道，本研究旨在探討原兒茶醛對慢性非細菌性前列腺炎的療效及其作用機制，為臨床應用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

苯甲酸雌二醇注射液（上海通用藥業(yè)股份有限 公 司，H41021503，1mL/支）；前列康（浙江康恩貝制藥股份有限公司，B20020078）；原兒茶醛（SHO310），安耐吉化學。

1.2 動物分組、給藥及實驗方法

SPF 級雄性SD 大鼠50 只，體重180 ～220g [廣東省實驗動物中心提供，SCXK（粵）2008-0003]適應性喂養(yǎng)1 周后隨機分為假手術(shù)組、模型組、前列康組、原兒茶醛低、高劑量組，每組10 只，除假手術(shù)組外，其余各組采用魏氏方法造模，具體方法如下：腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠， 8% Na2S 下腹部脫毛，75%酒精與碘酊消毒。于陰囊中間行1cm縱行切口，擠出陰囊，在睪丸根部將其切斷、結(jié)扎，縫合，術(shù)后1d 腹腔注射青霉素避免感染，去勢后皮下注射苯甲酸雌二醇0.25mg/（kg·d），連續(xù)30d。建模完成后，連續(xù)灌胃給藥4 周，其中前列康組給藥1.2g/（kg·d），原兒茶醛低、高劑量組分別給藥5mg/（kg·d），15mg/（kg·d），假手術(shù)組、模型組給予等量生理鹽水。實驗結(jié)束后，2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，頸椎脫臼處死，取前列腺稱濕重。部分前列腺組織經(jīng)生理鹽水、組織4μL/mg 的比例，剪碎并混勻。取2mL 試管加入0.38mL 白細胞稀釋液，準確吸取20μL 上述制備好標本，加入試管并混勻。用低倍鏡計數(shù)四角4 個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)及卵磷脂小體密度，其中卵磷脂小體密度按臨床檢驗標準分為4 級，即1/4 視野為+，1/2 視野為++，3/4 視野為+++，滿視野為++++。部分前列腺組織組織與生理鹽水比例1 ∶9 勻漿，按酶聯(lián)免疫法試劑盒方法檢測TNF-α，IL-8 含量。用生理鹽水將剩余前列腺組織漂洗干凈，后于10%中性甲醛溶液中固定，石蠟包埋，蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠前列腺濕重比較

與假手術(shù)組比較，模型組前列腺濕重明顯增加（P ＜0.05）。與模型組比較，原兒茶醛高劑量組前列腺濕重明顯降低（P ＜0.01）。見表1。

表1 各組大鼠的前列腺濕重變化

表1 各組大鼠的前列腺濕重變化

組別 n 前列腺濕重 t P假手術(shù)組 10 0.540±0.046 2.954 0.004模型組 10 0.742±0.055 0.294 1.045前列康組 10 0.699±0.04 0.287 1.020低劑量組 10 0.702±0.072 1.056 0.090高劑量組 10 0.604±0.053 3.008 0.001

2.2 各組大鼠前列腺內(nèi)白細胞數(shù)及卵磷脂小體密度觀察

各組大鼠前列腺內(nèi)白細胞數(shù)變化見表2。各組大鼠卵磷脂小體密度變化見表3。

表2 各組大鼠前列腺內(nèi)白細胞數(shù)的變化（）

表2 各組大鼠前列腺內(nèi)白細胞數(shù)的變化（）

組別 n 白細胞計數(shù)（×109/L） t P假手術(shù)組 10 1.220±0.220 2.668 0.008模型組 10 6.390±0.375前列康組 10 4.350±0.606 2.994 0.003低劑量組 10 4.350±0.606 3.541 0.002高劑量組 10 5.620±0.454 3.42 0.002

表3 各組大鼠前列腺內(nèi)卵磷脂小體密度的變化（）

表3 各組大鼠前列腺內(nèi)卵磷脂小體密度的變化（）

組別 n 卵磷脂小體密度 Z P+ ++ +++ ++++假手術(shù)組 10 0 1 2 7 3.41 0.002模型組 10 8 2 0 0前列康組 10 0 3 6 1 3.28 0.001低劑量組 10 0 3 5 2 3.76 0.001高劑量組 10 0 2 8 0 3.87 0.001

從表2 和表3 結(jié)果可見：與正常組相比，模型組前列腺白細胞數(shù)明顯增多（P ＜0.01），卵磷脂小體密度降低（P ＜0.01）。與模型組比較，前列康組、原兒茶醛低、高劑量組前列腺白細胞數(shù)明顯減少（P ＜0.01），卵磷脂小體密度升高（P ＜0.01）。

2.3 各組大鼠前列腺組織勻漿TNF-α和IL-8含量觀察

從表4 結(jié)果可見：與正常組相比，模型組前列腺TNF-α、IL-8 含量明顯升高（P ＜0.01）。與模型組比較，前列康組、原兒茶醛高劑量組前列腺TNF-α、IL-8 含量明顯降低（P ＜0.01）。

2.4 各組大鼠光鏡下的病理學觀察

假手術(shù)組大鼠前列腺組織結(jié)構(gòu)完整，腹腔存在正常分泌物，間質(zhì)無水腫與炎癥細胞浸潤，腺泡上皮無增生（圖1-A）。模型組較于假手術(shù)組，大鼠前列腺組織結(jié)構(gòu)異常，表現(xiàn)為纖維增生、間質(zhì)水腫、分泌物過多、血管擴張充血、腺泡上皮細胞呈乳頭狀增生（圖1-B）。與模型組比較，前列康組和原兒茶醛高、低劑量組癥狀明顯減輕，導管與腺體之間有少量充血，間質(zhì)炎癥細胞浸潤減少，而原兒茶醛高劑量組療效最好（圖1-C、D、E）。

表4 各組大鼠前列腺組織勻漿TNF-α和IL-8含量變化（pg/mL）

表4 各組大鼠前列腺組織勻漿TNF-α和IL-8含量變化（pg/mL）

組別 n TNF-α t P IL-8 t P假手術(shù)組 10 3.702±0.53 2.185 0.006 25.808±2.790 2.412 0.005模型組 10 122.209±2.701 108.288±3.415前列康組 10 83.875±4.991 2.245 0.006 99.249±3.010 2.412 0.004原兒茶醛低劑量組 10 92.546±5.086 2.355 0.005 104.263±8.121 2.136 0.006原兒茶醛高劑量組 10 55.342±3.588 2.565 0.003 84.939±6.167 2.289 0.006

圖1 各組大鼠前列腺組織病理觀察

3 討論

原兒茶醛具有抑制炎癥，抑制細胞凋亡，抗血栓，促進微循環(huán)等廣泛藥理活性[8]，目前其對慢性非細菌性前列腺炎的研究未見報道，本研究發(fā)現(xiàn)原兒茶醛降低大鼠慢性非細菌性前列腺炎前列腺濕重、白細胞數(shù)和TNF-α、IL-8 含量，升高卵磷脂小體密度，減輕間質(zhì)水腫和炎癥細胞浸潤，改善慢性非細菌性前列腺炎癥狀，且呈劑量依賴性，提示原兒茶醛對慢性非細菌性前列腺炎具有較好的治療作用，其作用機制是通過減輕炎癥而改善癥狀，故原兒茶醛很可能可作為一種抗慢性非細菌性前列腺炎新藥應用于臨床。

前列腺炎是男科常見疾病之一，目前西醫(yī)治療該病尚無有效藥物，因此目前臨床研究熱點為尋找防治慢性非細菌性前列腺藥物。慢性前列腺炎發(fā)病機制復雜，病機制尚不明確。研究發(fā)現(xiàn)炎癥介質(zhì)參與了其發(fā)病過程，非細菌性前列腺炎大鼠前列腺勻漿TNF-α 和 IL-8 顯著升高[9-10]。臨床慢性非細菌性前列腺炎患者的前列腺液和組織中存在大量炎癥細胞和多種炎癥因子，有研究[11-12]報道在慢性非細菌性前列腺炎患者精液中，細胞因子水平顯著提高，但也有發(fā)現(xiàn)大鼠慢性非細菌性前列腺炎模型測定在不同時期IL-1β，IL-6，MIP，COX-2，iNOS 的表達差異較大[13]。氧化應激也與慢性非細菌性前列腺炎的發(fā)生發(fā)展密切相關，一些研究表明Ⅲa 和Ⅲb 患者的精液及前列腺液中活性氧含量增高[14]。除上述發(fā)病機制之外，病原體感染、自身免疫、神經(jīng)內(nèi)分泌失常、微循環(huán)障礙等與慢性非細菌性前列腺炎的發(fā)生發(fā)展有關[15]?？傊?，目前慢性非細菌性前列腺炎的發(fā)病機制還不確定，可能是多種病因和發(fā)病機制相互綜合作用的結(jié)果，其發(fā)病機制還需進一步研究。

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