離子色譜法測定甲磺酸伊馬替尼中殘留的二甲胺

嵇海澄 李孝壁 李 琴 姜 濤 胡春勇

江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港 222000

甲磺酸伊馬替尼（imatinib mesylate）化學(xué)名稱為4-（4-甲基-1-哌嗪)甲基-N-4-甲基-3-4-（3-吡啶）-2-嘧啶氨基苯基-苯甲酰胺甲磺酸鹽，是瑞士諾華公司（Novartis）研發(fā)的酪氨酸激酶抑制劑類藥物。2001 年5 月10 日，伊馬替尼以“具有突破性的抗腫瘤機制”獲得美國FDA 的特快審批，商品名為“Gleevec”（格列衛(wèi)），并于2001 年11 月7 日歐盟批準格列衛(wèi)上市，最初用于α-干擾素給藥失敗胚細胞危象病期、慢性病期、加速病期的粒細胞白血病（慢性骨髓血癌）臨床治療用藥。隨后，美國FDA 又批準了伊馬替尼的第二個適用癥，用于治療胃腸道間質(zhì)細胞瘤的治療。作為罕見病用藥，經(jīng)過全球廣泛的臨床使用后，獲得了醫(yī)學(xué)界的高度評價，于2002 年12 月23 日正式取得美國FDA 的全面認可，批準作為慢性粒細胞白血病一線治療用藥，從而被醫(yī)學(xué)界譽為近年“有重大突破性”的抗腫瘤靶向小分子口服藥物制劑[1-2]。二甲胺是廣泛存在于自然環(huán)境和食品中，與自然界中存在的亞硝酸根易形成具有很強的動物致癌性和致突變型的N-亞硝基化合物[3-4]，對人及動物有很大的危害，故此有必要對二甲胺進行嚴格控制。另外二甲胺是甲磺酸伊馬替尼合成工藝過程中不可避免要產(chǎn)生的副產(chǎn)物，為了有效保證藥品質(zhì)量，有必要對甲磺酸伊馬替尼原料藥中可能殘留的二甲胺進行嚴格控制。離子色譜[5-8]是作為有效分離和檢測陰、陽離子的液相色譜方法，已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用在食品、藥品、化工、化妝品等多個行業(yè)，作為一種有效的分離手段，2010 年版中國藥典二部附錄對離子色譜法的原理、應(yīng)用及要求進行了相關(guān)描述和規(guī)定[9-10]，而且離子色譜在藥物中使用的越來越多[11-14]。本論文根據(jù)二甲胺的特性，建立了離子色譜測定二甲胺殘留的方法，該方法快速、準確，可對甲磺酸伊馬替尼的質(zhì)量進行有效的控制。

1 儀器與試劑

儀器：電子分析天平，梅特勒XS105；熱電DIONEX ISC-2100 離子色譜，Dionex CERS500 抑制 器，DS6 Heated Conductivity Cell 電 導(dǎo) 檢 測 器；CHROMELEON 6.8 化學(xué)工作站；色譜柱：陽離子交換色譜柱（Dionex IonPac CS12A 4×250mm）。

試劑：鹽酸二甲胺為國藥集團化學(xué)試劑股份有限公司；甲磺酸為SIGMA-ALDRICH，純化水由本公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

照離子色譜法（中國藥典2010 年版二部附錄V J）測定。用陽離子交換色譜柱（Dionex IonPac CS12A 4mm×250mm）；采用以20mmol/L 甲磺酸溶液作為為流動相，流速為1.0mL/min；柱溫為30℃；檢測器為電導(dǎo)檢測器，檢測方式為抑制電導(dǎo)檢測，檢測器溫度為35℃。

2.2 專屬性試驗

考慮到樣品中含有一定量的常規(guī)離子會干擾測定，我們將Li+、Ca2+、Mg2+、Na+、K+、NH4+及二甲胺按一定比例混合。各離子的分離情況見表1，專屬性圖見圖1。從表和圖中可以看出常規(guī)陽離子不干擾二甲胺的測定，說明該方法的專屬性很好。

表1 方法專屬性

圖1 方法專屬性色譜圖

2.3 定量限與檢測限

在上述色譜條件下，精密稱取鹽酸二甲胺適量，置量瓶中，用水溶解，制成儲備液。逐步稀釋儲備液，分別進樣至信噪比（峰高／基線噪聲）3±1 為檢測限，至信噪比10±2 為定量限，見表2。

表2 二甲胺的檢測限與定量限

2.4 線性關(guān)系試驗

按照標準限度濃度配制線性試驗溶液，二甲胺在0.10 ～9.84μg/mL，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，線性回歸方程為：A=0.1279C-0.0016，相關(guān)系數(shù)r=1.0000，說明本方法線性良好，見表3。

表3 線性關(guān)系

2.5 重復(fù)性

精密稱取鹽酸二甲胺適量，用水溶解并定量稀釋制成每1 毫升含二甲胺約3μg 的溶液，作為對照品溶液。按上述色譜條件，連續(xù)6 針進樣對照品溶液，記錄色譜圖，計算峰面積的相對標準偏差RSD，見表4。

表4 重復(fù)性

由表可見，二甲胺的峰面積的RSD 為0.11%，表明方法的重現(xiàn)性好。

2.6 回收率測定

精密稱取鹽酸二甲胺21.31mg，置50mL 量瓶中，用水溶解稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ～100mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為二甲胺含量母液備用。

表5 回收率測定

以二甲胺含量限度（0.05%）的濃度為基準100%，分別精密量取上述母液1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL 置 含 基 質(zhì) 樣 品 的20mL 量 瓶 中，用水稀釋至刻度，分別配制成限度為50%、100%和150%的溶液各三份，作為供試品溶液。另精密稱取鹽酸二甲胺適量，用水溶解并定量稀釋制成每1mL 含二甲胺約3μg 的溶液，分別精密量取上述溶液各25μL 注入離子色譜儀，記錄色譜圖，測量峰面積，采用外標法計算回收率，結(jié)果見表5。

樣品測定的平均回收率為97.5%，RSD 為1.8%（n=9），表明該方法檢測甲磺酸伊馬替尼中二甲胺含量準確、可靠。

3 討論

本研究建立了二甲胺的測定方法，并通過對二甲胺的專屬性、檢測限、定量限，線性范圍，重復(fù)性、回收率等項目的考察，充分說明本文確定的方法能有效、準確的測定甲磺酸伊馬替尼中可能殘留的二甲胺。

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