肉牛胚胎移植的要點

（黑龍江省方正縣畜牧獸醫局 150800）

（黑龍江省方正縣畜牧獸醫局 150800）

肉牛胚胎移植是指從一頭配種后的優良肉用母牛體內取出早期胚胎，將其移植到另一頭生理狀態基本相同的肉用母牛體內，并在其體內繼續發育形成胎兒，也叫做借腹懷胎。一般將提供胚胎的母牛稱為供體，接受胚胎的母牛稱為受體。優良的肉用犢牛，不僅由公牛決定，也依賴于母牛，后代犢牛的生產性能由其父母代決定，遺傳物質則來源于供體母牛以及與之配種的公牛，即胚胎的遺傳特性由雙親決定；而胚胎發育所需的營養物質由受體母牛提供，即只在胚胎生長發育發揮作用。

1 供體牛和受體牛

供體母牛要選擇優良肉牛品種，遺傳性能穩定，無遺傳缺陷，生殖器官發育正常，具有較高的繁殖力，發情周期正常，配種指數、受胎性及受胎率均較好，連續多年保持一年產一犢。如果母牛長期空懷、患子宮內膜炎或發情周期不明顯，則都不能選作供體牛。供體母牛生殖器官發育良好，使其進行超數排卵產生良好的反應，增加排卵數量，并獲得質量良好的受精卵。

2 同期發情和超數排卵

同期發情技術是肉牛胚胎移植中的一個主要環節，其可為超數排卵的供體母牛在同一時間內準備足夠可用于移植的受體，還能夠使同期化處理的供體牛群和受體牛群再次同期化，從而確保供、受體母牛的生理狀態保持相同。常用的同期發情方法是使用前列腺素—2 α誘導受體母牛發情，且試驗表明注射兩次效果要優于注射一次。受體母牛發情期8～15天，直腸檢查其發情狀態，此時第一次肌肉注射4 mL前列腺素—2 α；間隔11天，第二次肌肉注射前列腺素—2 α，且此次注射必須在供體母牛注射前列腺素—2 α的前一天進行。

肉牛進行胚胎移植時，要對供體母牛進行超數排卵處理，從而一次性獲得多枚胚胎。一般來說，供體母牛排卵量保持10個左右較好。母牛排卵量過多則容易造成其卵巢發生囊腫，以及排卵效果不穩定等不良后果；排卵量太少則會降低胚胎移植的意義，同時還會導致收集胚胎比較困難。超數排卵一般是在供體母牛預計發情到來之前4天，也就是發情周期的第16天注射促性腺激素，然后在出現發情的當天注射絨毛膜促性腺激素。

3 胚胎的采集與檢查

將供體母牛出現發情的當天作為第0天，采集胚胎在其發情后的第7天進行。將沖洗液通過二路式導管沖卵器注入供體母牛子宮角內，之后導出沖洗液并進行充分收回，將從生殖道內沖出的胚胎收集在經過滅菌消毒的器皿中。收集到的胚胎要采用高倍顯微鏡進行檢查，觀察其發育階段和形態。現在，基本采用形態學的方法來鑒定胚胎質量，并將胚胎分為A、B、C和D級。A級是指優秀胚胎，其形態正常，卵裂球清晰、整齊、緊密，發育程度與日齡一致；B級是指良好胚胎，卵裂球比較緊密、整齊，稍微不勻，并有個別卵裂球游離；C級是指一般胚胎，卵裂球不十分勻稱，發育較慢，出現變形；D級是指不良胚胎，大部分卵裂球異常、變形，且發育緩慢，其中可用于移植的胚胎是A級和B級胚胎。

4 胚胎的保存、解凍與輸入

采集的胚胎一般進行冷凍保存，使其長期具有活力。可選擇常規冷凍法，先將胚胎放入防凍液中進行一段時間的平衡，裝管后以每分鐘降低0.3～0.5℃的速度降低至—7℃，植冰后溫度緩慢降低至—35℃，平衡10 min后迅速讓入液氮中保存，該方法現在已經成熟，且大多數哺乳動物依舊采用這種傳統的平衡冷凍法進行胚胎保存；直接冷凍法，基本與常規冷凍法類似，只是細管中的稀釋液和冷凍液分開，直接冷凍胚胎，是一種比較簡單的方法。

胚胎解凍時，可選擇一步法解凍和常規解凍。一般常用的是一步法解凍，即從液氮罐中取出細管，室溫緩解10秒后放入32～35℃溫水中進行10秒水浴，將封口端剪去，裝槍后進行移植。輸胚采用直腸把握法，輸胚槍經過子宮頸后，槍芯向前推，排掉長度為0.5～1.0 cm的液體段，沖掉在過子宮頸時黏液、出血對輸胚槍槍孔的堵塞和污染，然后插入近側的子宮角前1/3處進行輸胚。

5 術后觀察

胚胎移植后，要注意觀察受體和供體母牛的健康狀況以及在推測時間內是否正常發情。對于供體母牛，在下一次發情時即可正常配種，如果仍舊將其作為供體，則通常需要2～3個月才能夠再次進行超數排卵。對于受體母牛，如過移植后出現發情，說明移植失敗，也許是胚胎吸收、丟失、死亡或有缺陷，也可能是受體母牛的子宮環境不適宜胚胎發育；如果未表現發情，則需要繼續觀察3～5個情期，并適時進行妊娠診斷。

肉牛胚胎移植的要點

陳文龍