動物炭疽病的血清學診斷

（黑龍江省動物疫病預防與控制中心 150069）

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1 沉淀反應

當尸體腐敗、致使細菌學診斷得不到正確的結果，以及檢查大量的畜產品時，可進行血清學沉淀反應診斷。炭疽沉淀原（炭疽菌溶解產物）存在于炭疽尸體的組織中，具有極高的耐酸和耐腐敗的特性，炭疽沉淀原對炭疽免疫血清（沉淀素抗體）可發生特異性的沉淀現象，甚至死后一年半以上的腐敗炭疽尸體，仍有沉淀原存在。試驗證明，病畜在死前20～22 h血液中即有沉淀原出現，因此本法也可應用與生前診斷，并且由于本法操作簡單，短時間內即可得出結果，所以在生前診斷方面，可能比鏡檢和細菌培養更具有應用的價值。

為了使炭疽沉淀反應的結果正確可靠，必須特別注意材料的采取、沉淀原的浸出、炭疽沉淀素血清的質量以及其他可能影響結果的因素等。由于炭疽尸體各部組織中沉淀原的含量不同，因此其反應的表現也不一樣。新鮮的組織材料，以脾臟的含量最高，制成2560倍稀釋的浸出液仍可出現陽性反應。而鮮皮及肌肉則含量很低，患最急性炭疽死亡的動物有時呈陰性反應。各組織器官沉淀原的含量，與其所含炭疽桿菌的數量成正比例，故采取材料以脾、腎、肝及血液等為宜。用這些材料做沉淀反應，1～2 min即可觀察到結果，如檢驗材料為鮮皮或肌肉時，則先置于37℃中2～3天或更長的時間，使其中的細菌增殖，以增加沉淀原的含量，待迅速干燥（必須注意保證安全），然后再進行檢驗。為了操作安全常將已干燥的被檢材料先高壓消毒（避免進入水分，否則沉淀原會溶于水中而受損失）。皮樣須在消毒后進行浸出。如果鮮皮或濕皮沒有事先干燥就高壓消毒，則皮樣會形成膠體而不易得到透明的浸出液，皮張浸出液須完全透明，方能進行沉淀反應。為了容易使浸出液透明，皮張常用冷浸法，使用的生理鹽┫加入0.3%～0.5%的石碳酸防腐。以皮張和肌肉進行沉淀反應，須觀察1～10 min方能保證診斷的正確性。

由于一定pH值的溶液可使診斷血清中的蛋白物質發生凝固或絮狀沉淀，所以用于沉淀反應的浸出液以接近中性的為宜。據經驗，浸出液的pH值在5～8不會影響沉淀反應的結果，超出這個限度就會出現假陽性反應，影響判斷的正確性。

被檢材料為鹽干皮或鹽浸皮時，則浸出液中含鹽過多，比重加大，不能與血清重積。一般都用透析方法除去浸出液中多余的鹽分，但此法手續較繁且延長了檢驗時間。我國獸醫工作者試驗證明，在炭疽沉淀素中加入4%的食鹽，即可改變血清的比重，使鹽皮抗原液能重積于其上，仍能得到正確的結果。一般未經過鹽處理的皮張的反應，雖在10～15 min即可觀察到結果，但這種反應仍須延長至20 min。

溫度對沉淀反應出現的速度也有影響，于16～30℃10 min所達到的反應程度，若低于16℃，則須延長至15 min才能達到，故一般以20℃室溫為宜。

炭疽沉淀素血清的特異性對沉淀反應的準確性有很大的關系，特異性不高的血清，常對非炭疽材料出現類屬反應，招致診斷的錯誤。用標準炭疽抗原（5萬倍稀釋）檢驗時，于30～60 s內出現的陽性反應，對干燥炭疽皮抗原（10倍稀釋）于1～2 min發生陽性反應，而對健康皮抗原（10倍稀釋）于15 min不發生反應，對類炭疽桿菌及枯草菌均呈陰性反應。

2 熒光抗體快速診斷法

本法是一種特異性強、檢出率高、方法簡便而快速的診斷方法，可對可疑炭疽病死畜的血液或頜下淋巴結、扁桃體的病料，利用熒光抗體法檢查，只需1～2 h就可得出結果。將病料涂片、干燥、固定后用異硫氰酸熒光標記提純的抗炭疽莢膜血清抗體（γ—球蛋白），在炭疽莢膜熒光抗體染色后，用熒光顯微鏡觀察。具有莢膜的炭疽菌，菌體高度膨大，菌體莢膜呈明亮黃綠色熒光或菌體周圍呈明亮的黃綠色熒光環，熒光亮度強，很易辨認。

3 炭凝集反應

據報道，有人曾研究過應用平板炭疽凝集反應檢出炭疽芽孢的方法，結果初步認為對檢查炭疽芽孢污染的標本是直接、快速、準確的診斷方法。制備炭疽炭血清的方法是：將用pH值為7.2磷酸緩沖液40倍稀釋的未提純的抗炭疽血清（12 mL）以60℃水浴加濕處理30 min后，加入1 g濕木炭末在56℃的水浴中致敏10 min，即成炭疽炭血清。反應操作時，先將可疑含炭疽桿菌芽孢的被檢標本倍比稀釋液各0.1 mL分別滴于玻板上，并以生理鹽水、磷酸緩沖液各0.1 mL為對照，然后分別加入炭疽炭血清各0.05 mL，混勻后，在室溫下靜置1～20 min，在對照為陰性反應的條件下判定結果。結果此法可檢出每毫升含有39000個純炭疽桿菌芽孢的培養物和每毫升含40萬個以上炭疽芽孢而混有雜菌的污染標本。

動物炭疽病的血清學診斷

趙曉春，王寧寧，李 鵬