組氨酸三聯體及肺癌抑制因子1基因表達與宮頸癌發生及人乳頭瘤病毒感染的相關性

李　菲

(武漢大學人民醫院, 湖北 武漢, 430060)

組氨酸三聯體及肺癌抑制因子1基因表達與宮頸癌發生及人乳頭瘤病毒感染的相關性

李菲

(武漢大學人民醫院, 湖北 武漢, 430060)

摘要:目的探討肺癌抑制因子1(TSLC1)及組氨酸三聯體(FHIT)在正常宮頸組織、宮頸鱗狀上皮內病變及宮頸癌組織中的表達及其與人乳頭瘤病毒(HPV)的關系。方法采用細胞免疫組化法測定35例正常子宮組織、40例低度鱗狀上皮內病變(LSIL)、38例高度鱗狀上皮內病變(HSIL)及35例子宮癌組織中TSLC1及FHIT的表達情況。采用HC2基因雜交捕獲儀(HC-Ⅱ)檢測各組HPV感染情況。結果HSIL、宮頸癌組織中FHIT、TSLC1陽性表達率顯著低于正常宮頸組織及LSIL，而HPV陽性率則高于正常宮頸組織及LSIL(P<0.05)。FHIT表達與病理分級、臨床分期及淋巴結轉移相關(P<0.05)。TSLC1表達與臨床分期及淋巴結轉移相關(P<0.05)。在正常宮頸組織、LSIL、HSIL及宮頸癌組織中, FHIT、TSLC1表達與HPV感染呈負相關(P<0.05)。結論FHIT、TSLC1表達缺失發生在HSIL階段, FHIT、TSLC1表達缺失與HPV感染參與宮頸鱗狀上皮細胞內病變、宮頸癌發生、侵襲及轉移具有密切的關系。

關鍵詞:肺癌抑制因子1; 組氨酸三聯體; 宮頸癌; 人乳頭瘤病毒

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，嚴重威脅中國女性生命健康。目前普遍認為人乳頭瘤病毒(HPV)感染是引起宮頸癌變的重要因素，但HPV感染并非是宮頸癌發生的唯一因素[1]。近年相關研究[2]指出，除了HPV感染外，原癌基因的激活及抑癌基因的失活在癌癥發生及進展中也起到關鍵的作用，因此通過檢測相關癌癥基因表達情況將有助于臨床盡早識別HPV感染者宮頸病變進展情況，可為宮頸癌早期診斷提供指導。肺癌抑制因子1(TSLC1)及組氨酸三聯體(FHIT)是近年新發現的抑癌基因，其表達情況與宮頸癌病情進展及轉歸具有密切的關系[3]。本研究探討FHIT與TSLC1基因表達與宮頸癌發生及HPV感染的關系，現報告如下。

1資料與方法

1.1　臨床資料

選取2012年6月—2014年6月本院病理科石蠟包埋宮頸組織標本進行研究，其中低度鱗狀上皮內病變(LSIL)40例、高度鱗狀上皮內病變(HSIL)38例及子宮頸癌35例。另選取35例正常子宮組織標本為對照組，所有標本均來自于慢性宮頸炎或子宮肌瘤組織。宮頸癌組年齡22～68歲，平均年齡(45.3±2.2)歲，<60歲20例，≥60歲15例；病理分級：中低分化癌 17例，高分化癌18例。根據國際婦產科聯盟(FIGO)臨床分期: Ⅰ期 10例，Ⅱ期 8例，Ⅲ期 10例，Ⅳ 7例。腫瘤大小: >5 cm者14例，≤5 cm者21例。淋巴轉移 18例，無淋巴轉移17例。所有病例術前均未接受放化療治療。

1.2　方法

1.2.1細胞免疫組化法(SABC)測定FHIT與TSLC1表達：將上述各樣本組織剪碎后采用D-Hank′s試劑液(美國Gibco公司)進行沖洗，并加入1 mg/mL的DNASeI以及2.5 g/L胰蛋白酶(由美國Gibco公司提供)混合液，并在37 ℃中孵化60 min, 并在含有小牛血清的DMEM(由美國Gibco公司提供)培養基中終止消化。樣液反復吹打后過濾棄上清液，并用D-Hank′s試劑洗滌2次，再次離心5 min, 棄掉上清液，留置沉淀物，采用SABC法測定FHIT、TSLC1，兔抗人FHIT多克隆抗體、兔抗人TSLC1多克隆抗體及SABC試劑盒均由美國Sgima公司提供，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.2.2HPV檢測:采用HC2基因雜交捕獲儀進行檢測，HC2基因雜交捕獲儀以及HPVDNA檢測試劑盒均由美國Digene公司提供，陰道內窺鏡由德國Leica公司提供。

1.3　結果判斷

① FHIT、TSLC1陽性判斷：在倍數為100的顯微鏡下觀察細胞著色情況，根據著色程度由輕至重可分別記為0、1、2、3分。隨機選取5個視野點，采用倍數為400的顯微鏡進行觀察，每個視野進行細胞計數，以500個細胞作為一組計算單位，細胞陽性百分率：1分為小于10%, 2分為10%～50%, 3分為大于50%。兩項評分乘積為綜合得分，綜合得分>3分為陽性，≤3分為陰性; ② HPV陽性判斷：標本中檢出HPV含量≥1.0 pg/mL為陽性, HPV含量<1.0則判斷為陰性。

2結果

2.1　不同宮頸組織中FHIT與TSLC1陽性表達及HPV感染情況

HSIL、宮頸癌組織中FHIT、TSLC1陽性表達率顯著低于正常宮頸組織及LSIL, 而HPV陽性率則高于正常宮頸組織及LSIL, 差異有統計學意義(P<0.05), 見表1。

表1　不同宮頸組織中FHIT與TSLC1陽性表達及HPV感染情況[n(%)]

與正常組織相比，*P<0.05; 與LSIL組相比，#P<0.05; 與HSIL組相比，△P<0.05。

2.2　FHIT與TSLC1與宮頸癌臨床特征的關系

FHIT表達與病理分級、臨床分期及淋巴結轉移相關(P<0.05)。TSLC1表達與臨床分期及淋巴結轉移相關(P<0.05), 見表2。

表2　FHIT與TSLC1與宮頸癌臨床特征的關系[n(%)]

2.3　不同病理組織中FHIT與TSLC1與HPV感染的關系研究

正常宮頸組織、LSIL、HSIL及宮頸癌組織中FHIT、TSLC1表達與HPV感染呈負相關(P<0.05), 見表3。

表3　不同病理組織中FHIT與TSLC1與HPV感染的關系研究[n(%)]

3討論

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，其病死率位居女性惡性腫瘤病死率的第2位[4]。目前普遍認為高危型HPV感染與宮頸癌的發生具有密切的關系，在幾乎所有的宮頸癌組織中均可檢測到高危HPV DNA，但宮頸癌患者從感染HPV至最終發展成為宮頸癌需要數年甚至數十年的時間，且大多數HPV感染為一過性，患者可自行消退，僅有小部分患者最終進展為浸潤性宮頸癌，可以推測宮頸癌的發生及進展是多階段多因素共同作用引起的[5-6]。本研究中HSIL、宮頸癌組織中HPV陽性率則高于正常宮頸組織及LSIL，差異有統計學意義(P<0.05)，從而提示HPV感染與宮頸癌癌前病變具有密切的關系。隨著宮頸組織病變程度的增加，患者HPV感染率顯著增加，從而提示宮頸病變的發生與HPV感染具有密切的關系，結果與既往研究[8]一致。

近年隨著分子生物學的進展，人們發現抑癌基因失活及原癌基因激活與腫瘤的發生、轉移及浸潤具有密切的關系。肺癌抑制因子1(TSLC1)最早是從非小細胞癌中發現的抑癌基因，其屬于免疫球蛋白超家族細胞黏附分子(IgCAMs)，與神經細胞黏附分子NCAM1及NCAM2具有高度同源性，可參與細胞黏附及轉移[9]。FHIT基因可由阿非迪霉素誘發機體脆性位點HPV16及FRA3B位點獲得，它可參與細胞周期調控，誘導細胞凋亡，目前已發現多種腫瘤細胞株中存在FHIT表達異常、缺失或甲基化[10]。王偉等[11]研究發現不典型增生細胞中FHIT蛋白表達呈減弱或缺失，而在正常上皮細胞中則表達正常。Liu等[12]以腺病毒載體作為THIT基因導入宮頸癌細胞中，結果顯示FHIT蛋白陰性細胞株中發生Caspases 8介導的細胞凋亡，從而表明FHIT可促進腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤生長。Huang等[13]通過動物體外實驗表明TSLC1突變可引起腫瘤的發生及轉移。Liang等[14]研究指出，TSLC1抑制惡性腫瘤的作用機制可能與其能有效促使半胱天冬酶凋亡，激活多聚酶底物裂解有關。本研究中HSIL、宮頸癌組織中FHIT、TSLC1陽性表達率顯著低于正常宮頸組織及LSIL，從而表明FHIT、TSLC1表達缺陷是引起宮頸病變的重要因素，研究結果與既往文獻一致。這提示臨床工作者可通過檢測宮頸組織中FHIT、TSLC1表達情況，從而判斷患者宮頸癌發生風險，將有助于宮頸癌的早期篩查及預防。

參考文獻

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Correlation between histidine triad, inhibitory factor in lung cancer 1 gene expressions and occurrences of cervical cancer and human papillomavirus infection

LI Fei

(ThePeople′sHospitalofWuhanUniversity,Wuhan,Hubei, 430060)

ABSTRACT:ObjectiveTo investigate the expressions of inhibitory factor in lung cancer 1 (TSLC1) and histidine triad (FHIT) in normal cervical tissue, cervical squamous intraepithelial lesions and cervical cancer and their correlation with human papillomavirus (HPV). MethodsThe expressions of TSLC1 and FHIT in 35 cases of normal uterine tissue cells, 40 cases of low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL), 38 cases of high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL) and 35 cases of uterine carcinoma were detected by immunohistochemical method. The HPV infection in each group was detected by Hybrid Capture (HC-Ⅱ). ResultsThe positive expression rates of the FHIT and TSLC1 expression in HSIL, cervical carcinoma were significantly lower than those in normal cervical tissue and LSIL, and positive rate of HPV was significantly higher than normal cervical tissue and LSIL (P<0.05). FHIT expression was correlated with tumor grade, clinical stage and lymph node metastasis (P<0.05). TSLC1 expression was correlated with clinical stage and lymph node metastasis (P<0.05). In normal cervical tissue, LSIL, HSIL and cervical cancer, expressions of FHIT and TSLC1 were negatively correlated with HPV infection (P<0.05). ConclusionLoss of FHIT and TSLC1 expressions occurs in the HSIL stage, and loss of FHIT and TSLC1 expressions were closely correlated with HPV infection involved in cervical squamous cells, the occurrence of cervical cancer, invasion and metastasis.

KEYWORDS:lung cancer inhibitory factor 1; histidine triad; cervical cancer; human papillomavirus

收稿日期:2014-08-23

中圖分類號:R 737.33

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)07-097-04DOI: 10.7619/jcmp.201507028