大腸癌患者胸苷酸合成酶表達水平及對預后的影響

李進科, 付建軍, 張永國, 李智斌

(湖北省老河口市第二醫院 胸外科, 河北 老河口, 441800)

大腸癌患者胸苷酸合成酶表達水平及對預后的影響

李進科, 付建軍, 張永國, 李智斌

(湖北省老河口市第二醫院 胸外科, 河北 老河口, 441800)

摘要:目的探討大腸癌患者腫瘤組織中胸苷酸合成酶(TS)表達水平及對預后的影響。方法選擇80例大腸癌患者的腫瘤組織標本和癌旁組織標本作為研究材料，應用免疫組化法對標本中的TS表達水平進行檢測和比較；對患者的性別、年齡、浸潤深度、分期、分化程度、5年生存率、總生存期(OS)、無病生存期(DFS)等指標及影響因素進行比較。結果腫瘤組織標本中的TS高表達比例顯著高于癌旁組織標本(χ2=76.201, P<0.05); TS高表達患者和TS低表達患者在性別構成、年齡、腫瘤浸潤深度、腫瘤分期、腫瘤原發部位、腫瘤分化程度等一般臨床資料的差異均無統計學意義(P>0.05); TS高表達患者與TS低表達患者的5年生存率、OS、DFS的差異均無統計學意義(χ2=2.390、0.928、1.035, P>0.05); COX多因素回歸結果顯示，Dukes′分期與患者的OS(RH=2.813)和DFS(RH=4.516)具有相關性(P<0.05), 而TS表達水平及其他臨床指標與患者的OS和DFS均無相關性(P>0.05)。結論大腸癌組織呈現TS的高表達狀態，但是大腸癌組織中的TS表達水平與患者的臨床指標無顯著相關性，也不會對患者的預后產生顯著的影響。

關鍵詞:大腸癌; 胸苷酸合成酶; 免疫組化法; 5-氟脲嘧啶; 預后

大腸癌是中國常見的惡性腫瘤之一，早期大腸癌患者如得到及時的診治，其5年生存率可超過90%，但是中、晚期大腸癌患者的預后則多不佳。近年來，隨著纖維乙狀結腸鏡、結腸鏡檢查及分子篩查技術在臨床上廣泛應用，大腸癌的早期診斷率得到了一定程度的提高[1]，但是接受常規的術后+化療的治療方案后，大腸癌患者的預后卻具有較大的差異，這與腫瘤組織中的胸苷酸合成酶(TS)的表達水平差異有關，TS基因的多態性及所導致的TS表達水平差異是與大腸癌的發生發展、轉移、復發及其中多種相關因子的互相作用密切相關的關鍵因素[2], 也造成了腫瘤細胞對5-氟脲嘧啶(5-Fu)類化療藥物的耐藥性差異，但是這種差異是否可對患者的預后造成直接影響尚存在爭議。本研究針對大腸癌患者腫瘤組織中TS的表達水平及對預后的影響進行了觀察和分析，現將研究的具體情況報告如下。

1資料與方法

1.1　一般資料

選取2007年1月—2013年12月在本院接受根治術的原發性大腸癌患者80例，所有納入患者均經病理學檢查證實為大腸癌，其中結腸癌病例為74例，直腸癌病例為6例，男61例，女19例，患者年齡為35～78歲，平均年齡為(56.8±11.3)歲；患者的Dukes′臨床分期為2例為A期，58例為B期，20例為C期。腫瘤病理分型為：5例為乳頭狀腺癌, 66例為管狀腺癌，7例為黏液腺癌，1例印戒細胞癌，1例為未分化癌。腫瘤分化程度為: 11例為高分化，58例為中分化，10例為低分化，1例為未分化。所有納入患者均于術后接受了5-Fu類化療4～6周期。

1.2　觀察指標和檢測方法

對所有納入患者的切除腫瘤組織和癌旁組織中的TS表達水平進行檢測和比較，方法為選取切除腫瘤組織和癌旁組織的石蠟標本，進行組織切片、微波修復抗原后以TS 1∶100為一抗稀釋度，以山羊血清代替一抗作為陰性對照，用已知TS表達陽性的大腸癌組織切片作陽性對照，應用免疫組化法(SP法)檢測TS 的表達水平，試劑盒購自美國羅氏公司。染色后TS表達陽性細胞的胞漿呈棕黃色，取4個有代表性高倍視野中計數細胞中的陽性細胞比例作為計算依據，計數細胞數為100個，陽性細胞數比例<5%判定為(-)，陽性細胞比例為5%～25%判定為(+)，陽性細胞數比例為26%～50%判定為(2+)，陽性細胞比例為51%～75%判定為(3+)，陽性細胞比例>75%判定為(4+)，當陽性細胞比例≤50%時判定為TS低表達，當陽性細胞數比例>50%時判定為TS高表達；對腫瘤組織具有不同TS表達水平的患者的性別、年齡、浸潤深度、分期、分化程度等一般臨床資料進行觀察和比較；對患者進行隨訪，對其5年生存率、總生存期(OS)、無病生存期(DFS)等指標及影響因素進行觀察和比較。

2結果

2.1　患者腫瘤組織與癌旁組織的TS表達情況的比較

患者的腫瘤組織和癌旁組織標本中的TS高表達的比例分別為73.7%和5%, 2組差異有統計學意義(χ2=79.201,P<0.05)，見表1。

表1　患者腫瘤組織與癌旁組織的TS表達情況的比較[n(%)]

與癌旁組織比較，*P<0.05。

2.2　腫瘤組織TS表達水平與患者一般臨床資料的關系

在納入患者中，腫瘤組織TS高表達患者為59例，占73.7%; 腫瘤組織TS低表達患者為21例，占26.3%。兩類患者在性別構成、年齡、腫瘤浸潤深度、腫瘤分期、腫瘤原發部位、腫瘤分化程度等一般臨床資料的差異均無統計學意義(P>0.05), 見表2。

表2　腫瘤組織TS表達水平與患者一般臨床資料的關系[n(%)]

2.3　患者腫瘤組織TS表達水平與生存情況的關系

本組患者的隨訪時間為5～90個月，中位隨訪時間為53個月，無失訪病例，患者的生存時間為5～82個月。腫瘤組織TS低表達患者的5年生存率為83.75%，中位OS為37個月，中位DFS為19個月，腫瘤組織TS高表達患者5年生存率73.75%，中位OS為35個月，中位DFS為18個月，兩類患者的5年生存率、OS、DFS的差異均無統計學意義(χ2=2.390、0.928、1.035,P>0.05)。COX多因素回歸結果顯示, Dukes′分期與患者的OS(RH=2.813)和DFS(RH=4.516)具有相關性(P<0.05), 而TS表達水平及其他臨床指標與患者的OS和DFS均無相關性(P>0.05), 見表3。

表3　患者OS和DFS的COX回歸分析

3討論

大腸癌是臨床上最為常見的消化道惡性腫瘤之一，如得不到早期診斷和治療，患者的死亡率較高。近年來，中國大腸癌的發病率呈現顯著遞增的趨勢。由于大腸癌患者的預后存在著較大的差異，近年來研究者開始從分子生物學和遺傳學角度篩選可用于預測大腸癌患者預后的生物標志物，目前研究較多的標志物主要包括表皮生長因子受體信號通路中的KRAS、BRAF、NRAS、PIK3CA、PTEN等分子生物標志物及ras基因、C-erbB-2基因、MMR基因以、微衛星不穩定性(MSI)、染色體18q雜合性缺失(18qLOH)、CpG島甲基化型(CIMP)等，這些基因的突變及功能異常均可影響大腸癌的發生、發展、藥物療效及預后[3-4]。而應用免疫組化方法對腫瘤組織細胞中的標志性蛋白進行檢測具有結果精確、操作簡便、成本低廉的特點，目前應用免疫組化方法證實的與大腸癌患者預后相關的生物標志物主要包括內皮生長因子、層黏連蛋白、Ang-2、Tie-2、血小板衍生生長因子A等，而且應用這些生物學標志物中的幾種進行聯合檢測，可更加準確地反映大腸癌浸潤轉移并評估其預后[5-6]。此外，還有研究[7]應用免疫組化法測定大腸癌組織中的微血管密度作為判斷大腸癌患者預后的重要參考指標。

TS是DNA合成的關鍵酶，能夠在組織細胞的DNA合成和修復過程中發揮關鍵性作用，TS基因的多態性可對細胞組織中的TS蛋白表達水平產生影響，導致個體對癌癥的易感性產生差異并對癌癥患者的治療療效和總體預后產生影響[8]。近年來的研究已證實，TS的表達水平不僅與食管癌、胃癌、胰腺癌等消化系統腫瘤的發病具有相關性，而且還可對個體對新生兒白血病、非小細胞肺癌的易感性產生影響。同時也有研究[9]證實，術后接受紫杉醇聯合5-Fu輔助化療的胃癌患者的DFS與其腫瘤組織中的TS表達水平具有相關性，TS可作為預測胃癌患者預后的輔助指標。本研究結果顯示，腫瘤組織標本中的TS高表達比例顯著高于癌旁組織標本(χ2=76.201,P<0.05), 說明在大腸癌的腫瘤組織中, TS呈現高表達狀態，其表達水平顯著高于癌旁的正常組織; TS高表達患者和TS低表達患者在性別構成、年齡、腫瘤浸潤深度、腫瘤分期、腫瘤原發部位、腫瘤分化程度等一般臨床資料的差異均無統計學意義(P>0.05), 說明大腸癌組織中的TS表達水平與上述臨床資料均無相關性; TS高表達患者與TS低表達患者的5年生存率、OS、DFS的差異均無統計學意義(χ2=2.390、0.928、1.035,P>0.05)。COX多因素回歸結果顯示, Dukes′分期與患者的OS(RH=2.813)和DFS(RH=4.516)具有相關性(P<0.05)，而TS表達水平及其他臨床指標與患者的OS和DFS均無相關性(P>0.05), 說明大腸癌患者應用手術+5-Fu化療后的預后僅與患者的Dukes′分期具有相關關系，而腫瘤組織中TS表達水平對于患者預后無顯著的影響，這與最近國內研究得出的TS表達情況與患者的年齡、hMLH1、hMSH2蛋白表達情況有關，但與預后無明顯相關性的結果一致[10]。近年來的研究還證實, TS高表達的腫瘤組織對5-Fu化療更為敏感，其原因是抗代謝物分子對于腫瘤細胞的作用機制是在結構上和它們干擾的代謝物相似，而5-Fu是通過競爭性抑制TS活性而抑制胸腺嘧啶的合成，從而選擇性地抑制腫瘤細胞DNA或RNA的合成，從而達到干擾細胞分裂、抑制腫瘤增殖的作用[11]。

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Expression level of thymidylate synthase in patients with

colorectal cancer and its influence on prognosis

LI Jinke, FU Jianjun, ZHANG Yongguo, LI Zhibin

(DepartmentofThoracicSurgery,TheSecondHospitalofLaohekou,Laohekou,Hebei, 441800)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the expression level of thymidylate synthase (TS) in colorectal cancer tissue and its influence on the patients′ prognosis. MethodsThe cancer tissue specimens and the para-cancerous tissues specimens of 80 patients with colorectal cancer were selected as the research materials. The immunohistochemical method was used to detect and compare the expression level of TS in the specimens. Clinical data of age, depth of invasion, tumor stage and tumor differentiation degree, 5 years survival rate, total survival (OS), disease free survival (DFS) of the patients and the influencing factors were observed and compared. ResultsThe ratio of tumor tissue specimens with TS high expression in cancer tissues was significantly higher than that in para-cancerous tissues (χ2=76.201, P<0.05). There were no significant differences of the general clinical data of sex, age, depth of invasion, tumor stage, primary tumor site, tumor differentiation degree between the patients with TS high expression and the patients with low TS expression (P>0.05). There were no significant differences of 5 years survival rate, patients with OS, DFS of the patients between the patients with TS high expression and the patients with low TS expression (χ2=2.390, 0.928, 1.035, P>0.05). The multivariate COX regression showed Dukes′ staging of the patents was correlated with the OS (RH=2.813) and DFS (RH=4.516) of the patient's (P<0.05). The expression level of TS and other clinical indexes of the patients had no correlation with OS and DFS (P>0.05). ConclusionThe colorectal cancer tissue shows a high expression level of TS, but the expression level of TS in colorectal cancer tissues is not significantly correlated with the clinical indexes of the patients, and it has no significant impact on the prognosis of the patients.

KEYWORDS:colorectal cancer; thymidylate synthase; immunohistochemistry; 5- fluorouracil; prognosis

收稿日期:2015-03-02

中圖分類號:R 735.3

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)11-050-04

DOI:10.7619/jcmp.201511015